首先，给大家先分享一下有关细胞的基本知识。

细胞培养过程中绝对避免如细菌，支原体，真菌的污染，这些污染将显著地影响并改变实验结果。细胞培养因组织来源的不同而异，动物细胞一般采用黏附培养或者悬浮培养。根据其增殖潜力不同而被分为三类：原代细胞，细胞株，细胞系。

贴壁细胞：黏附细胞需要附着后才能生长，不断增殖的细胞在细胞培养器皿上铺成单细胞层。许多细胞在铺满细胞培养器壁后就不再增殖，有些细胞在此之后会死亡。从组织中得到的大多数细胞都是贴壁细胞。

悬浮细胞：悬浮细胞在培养基中存活和增殖，不需要黏附在细胞培养器皿上，包括造血干细胞（来源于血液，骨髓，脾脏），一些转化的细胞系以及恶性肿瘤细胞等。

原代细胞：由酶法、化学法或者机械法得到的组织碎片中的细胞迁移到细胞培养皿上形成了原代细胞，这些细胞在分散组织的过程中幸存下来，黏附或者悬浮于细胞培养液中，之后进行增殖。这些细胞不能或者仅能进行有限的细胞分裂，分裂相结束后进行衰老相，最后死亡。黏附原代培养细胞对接触抑制特别敏感，一旦铺满细胞培养皿他们就停止生长。培养原代细胞通常比培养细胞系更加困难。在实验中有时需要用到原代细胞而不是细胞系。

细胞株：从原代细胞开始的头几次传代所得到的细胞被称为细胞株。这些细胞传代几次后就衰老了，但可以导入病毒的转化因子增加细胞株的增殖代数。这些细胞的表型介于细胞株和细胞系之间，他们可以更长时间的增殖，但最终他们和细胞株一样也会衰老，停止分裂。在筛选稳定转化的细胞克隆时，使用这些细胞比原代细胞更方便。

细胞系：细胞株最终都会死亡，但他们中的某些个体发生了一些可稳定遗传的突变，这些突变使得这些细胞能够无限的增殖。这类细胞和它的后代被称为细胞系，这个过程被称为体外转化或永生化，这和体内的细胞癌变相似。无论是自发还是经过某种诱变剂的诱导，龋齿类动物的原代细胞会更容易形成细胞系。相比较而言，人的原代细胞很少会形成细胞系，但是从人癌组织中分离得到的细胞通常是永生的，可以传代成细胞系。细胞系比原代细胞和细胞株更易于使用。

下面简单先提几个问题：

问题：细胞污染问题解决（操作注意事项和污染源分析）

小编回复：

安全操作须知：操作所有可能具有感染性的材料应当遵循以下原则：操作细胞时严格按照细胞操作规程以最大可能避免操作者和细胞中可能带有的致病因子接触，操作细胞应当在合格的层流超净台中进行，注意无菌并且避免气溶胶的生成。操作完成后，所产生的废弃物应当用湿热灭菌或浸没在合适的去感染物溶液中。

无菌操作和尽量避免气溶胶产生所用的器械和溶液应该事先经过彻底灭菌，工作之前用消毒液擦拭台面，试剂瓶和手。操作过程避免形成气溶胶，吸入气溶胶是有害的。气溶胶也有可能会导致细胞之间的交叉污染。因此，应选用TD（todeliver）吸管而不是TC（tocontain）吸管，所用的吸管后端应该塞上棉花。混合溶液时避免快速的吸上吸下，吹出的液体时不要用力过猛。移液时移液管口尽量与培养瓶中液面接近。使用离心机时确保离心管盖是合上的，避免液滴残留在离心管盖附近。使用带盖的离心转头时，运行前务必盖紧。

使用层流超净台：保证层流超净台放置地方的气流不被经常搅动。避免把它安置在门口，通气口或经常有人活动的地方。超净台应放在专门的细胞培养间内。保持超净台的整洁，不把东西堆放在里面。工作之前，给工作台面和试剂瓶外表面消毒，把所有细胞操作作用到的东西都放在超净台内。有序排列器械，吸管，试剂瓶和垃圾杯，把用过的物品和干净的物品分开摆放。移动废物品时避免从干净的物品上经过。

细胞污染：细胞污染物会抑制细胞的生长，导致细胞死亡，使实验结果不一致。无论是细胞培养新手还是老手都会出现这样的问题。可以导致污染的途径举不胜举，例如不规范的操作，被污染的培养基，试剂，器械（如枪头），或是携带在操作者身上和来自其他实验室中的微生物。在动物细胞培养中，细菌，真菌，霉菌，支原体和其他种类细胞是常见的污染物。规范的操作可以帮助避免细胞被微生物和其他种类的细胞污染。为了减少偶尔细胞污染所造成的损失，我们建议冻存细胞保种，即使细胞被污染了也能够及时补充新的细胞。

微生物污染：细胞微生物污染后，有些情况下细胞培养基会变浑浊，pH值发生显著变化（通常为细菌污染）。另一些情况下，微生物污染不会使细胞培养液变浑浊，对细胞也不会产生明显的影响。例如支原体污染是一种极为常见，但极难检测到的微生物污染。

支原体污染-检测：支原体是一些体型小，生长缓慢的原核生物，它们没有细胞壁，是常见的细胞污染微生物。常用的抗生素和抗真菌药一般对支原体都没有作用。更糟糕的是，由于支原体一般不会比细胞生长更快也就不会引起细胞培养基的浑浊度和颜色变化，所以它们会长时间存在而不被发现，并会迅速传播到其他细胞中去。支原体污染会抑制细胞的代谢和生长，也会干扰细胞的核酸代谢和细胞的抗原性。急性的支原体感染会使所有的细胞状态变坏，有时候有个别细胞会形成克隆。有三种主要的检测支原体的方法：Hoeschest33258染色；支原体特异的DNA探针（FisherScientifie）；基于PCR的方法（如MinervaBiolabs的VenorGeMMycoplasmaDetectionKit）。另外，ATCC和MicroBIOLOGicalAssociates都提供付费的基于PCR的支原体检测服务。

支原体污染-清除：处理支原体慢性污染的细胞最明智的方法是丢弃它，用湿热灭菌或焚烧彻底消灭污染物。处理的方法主要是用各种商业化的抗生素处理，如Mynox®MycoplasmaEliminationReagent（MinervaBiolabs），enrofloxacin（Baytril®），及tiamulin和minocycline的混合处理（BM-Cyclin）。

细胞的交叉污染：细胞被另一种快速生长的细胞污染是较为严重的问题。为避免交叉污染，需要向可以保证质量的细胞库订购细胞，在超净台中一次只处理一种细胞，给不同的细胞分别准备所需的枪头，试剂，培养基。并且定期检查细胞的形态和生长特征。