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苍茫中的尘埃
用户
在RNA干扰实验中 首先需要构建dsRNA表达载体 将这种载体导入受体细胞中后 表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA 引起具有相同序列的mRNA发生讲解 导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质 所以个体会表现出功能缺失表型 构建表达载体通常选用dsRNA需要注意的一些方面是dsRNA序列中GC的含量要小于50% 高GC含量会降低RNAi的效果 选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性 以避免对其他同源性基因表达的抑制 不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果 可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体 还要充分考虑siRNA的结构特征 siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响 启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制 但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响 所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi 而且在构建表达载体时 经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列最后将其转入到质粒中 这里说的只是一个简单的过程 总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程 如果要知道详细的技术 建议还是去看书吧 这里是说不清的
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miaolingbio
用户克隆上去就行啊
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