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Readytouse,lentiviralpackagingplasmidmixture.
Developedinhouse,threepackagingplasmidsareoptimizedformulatedasapoolforexpressionofgag⁄pol,revandVSVG.Itgenerateshightitersoflentivirusin293TlentiviralpackagingcelllineHEK293Tcell(cat#TLV-C) afterco-transfectionwithtargetcontainingexpressionlentivector.TogetherwiththeSIN(self-inactivated)expressionlentivector,itonlyproducesthereplicationincompetentlentivirus.
Itis fullycompatIBLetoallcurrentlentiviralsystemonmarket,canbeusedtopack yourdesiredlentivectors,suchasViraPower(Invitrogen),MissionShRNA(Sigma),Lent-X(Clontech),GIPZLentiviralShRNAmir(OpenBiosystem).Itgeneratesonlyrepliction-incompetentlentivrus.ProductManual.
Cat#:HT-pack Amount:60ug(100rxn)
Usage:use1:2massratiobetweenthe(expressionlentivector):(packagingmixtureplasmids).
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2018-05-21
上海宾智生物科技有限公司在发布的VPK-411 pAAV-MCS Promoterless Expression Vector 质粒pAAV-MCS无启动子表达载体供应信息，浏览与VPK-411 pAAV-MCS Promoterless Expression Vector 质粒pAAV-MCS无启动子表达载体相关的产品或在搜索更多与VPK-411 pAAV-MCS Promoterless Expression Vector 质粒pAAV-MCS无启动子表达载体相关的内容。 查看更多
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2021-07-19
上海泽叶生物科技有限公司在发布的pMHE3载体供应信息，浏览与pMHE3载体相关的产品或在搜索更多与pMHE3载体相关的内容。 查看更多
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2021-07-15
英文名：Molecular Dessert，隶属于分子美食料理其中的一个新兴分子派别，利用分子技术所产生的化学或物理反应，对水果、果汁、糖分、牛奶、巧克力等食材加以研发重组，成为创新型的甜品系列，以科学的手法、新颖的卖相、独特的口感去乔装甜品。分子甜品的出现改变了人们一直以来对甜品（特别... 查看更多
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2017-10-13
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的Easy-shRNA质粒载体产品供应信息，浏览与Easy-shRNA质粒载体产品相关的产品或在搜索更多与Easy-shRNA质粒载体产品相关的内容。 查看更多
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2018-07-03
pPARS载体酵母游离型质粒是由BiovectorCo.,LTD代理或销售的Biovector,Addgene,ATCC,Invi品牌的试剂，产品来源于BiovectorInc.USA。BiovectorCo.,LTD是中国最权威的pPARS载体酵母游离型质粒试剂销售服务商之一，在海淀区等地方销售pPARS载体酵母游离型质粒试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pPARS载体酵母游离型质粒仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的pPARS载体酵母游离型质粒产品 查看更多
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2018-01-04
上海沪震实业有限公司在发布的载体pPACKH1-REV供应信息，浏览与载体pPACKH1-REV相关的产品或在搜索更多与载体pPACKH1-REV相关的内容。 查看更多
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2018-03-08
成都溶海生物技术有限公司在发布的pGEM®-T Easy Vector System I经典T载体供应信息，浏览与pGEM®-T Easy Vector System I经典T载体相关的产品或在搜索更多与pGEM®-T Easy Vector System I经典T载体相关的内容。 查看更多
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2018-02-17
湖南丰晖生物科技有限公司在发布的<载体>有图谱序列测序报告，仅需398元—丰晖生物供应信息，浏览与<载体>有图谱序列测序报告，仅需398元—丰晖生物相关的产品或在搜索更多与<载体>有图谱序列测序报告，仅需398元—丰晖生物相关的内容。 查看更多
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苏州泓迅生物科技股份有限公司在发布的泓迅亚克隆/转载体供应信息，浏览与泓迅亚克隆/转载体相关的产品或在搜索更多与泓迅亚克隆/转载体相关的内容。 查看更多
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2021-07-25
武汉百翼生物科技有限公司在发布的慢病毒表达载体PLVX PURO 4×Flag供应信息，浏览与慢病毒表达载体PLVX PURO 4×Flag相关的产品或在搜索更多与慢病毒表达载体PLVX PURO 4×Flag相关的内容。 查看更多
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2018-03-20
上海嵘崴达实业有限公司在发布的钾离子载体 I供应信息，浏览与钾离子载体 I相关的产品或在搜索更多与钾离子载体 I相关的内容。 查看更多
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2018-03-08
pE-SUMO载体病毒克隆载体是由深圳市伟通生物公司代理或销售的伟通生物品牌的试剂，产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的pE-SUMO载体病毒克隆载体试剂销售服务商之一，在深圳等地方销售pE-SUMO载体病毒克隆载体试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pE-SUMO载体病毒克隆载体仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的pE-SUMO载体病毒克隆载体产品 查看更多
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人HIF1αRN干扰质粒构建及其转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞...123
西月是神4222017-11-10
稳定转染hif-1α rna干扰表达载体_有道翻译
翻译结果：
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
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动物细胞表达系统中常用的表达载体有哪些123
LR0271LR2017-10-02
病毒，噬菌体衍生物，质粒（环状DNA分子）
基因表达载体中标记基因的作用到底是什么呢【高中生物吧】_百度...123
LR13Q2021-08-28
基因工程中标记基因必不可少，基因工程的核心步骤，构建基因表达载体，中用标记基因检测重组质粒是否已经导入受体细胞中，从而区分己导入细胞和未导入细胞。(标记基因通常是抗生素基因。)
似乎都是鉴定目的基因是否导入受体细胞 没有鉴定是否成功导入质粒的 鉴定目的基因是否导入受体细胞有四个层次 1 直接鉴定受体细胞中是否有目的基因 用DNA分子杂交 2 鉴定目的基因是否转录 分子杂交（mRNA） 3 目的基因是否表达 抗原-抗体 （蛋白质） 4 看受体细胞发育成的个体是否表现出相关性状
似乎都是鉴定目的基因是否导入受体细胞 没有鉴定是否成功导入质粒的 鉴定目的基因是否导入受体细胞有四个层次 1 直接鉴定受体细胞中是否有目的基因 用DNA分子杂交 2 鉴定目的基因是否转录 分子杂交（mRNA） 3 目的基因是否表达 抗原-抗体 （蛋白质） 4 看受体细胞发育成的个体是否表现出相关性状
如何预测和鉴定miRNA的靶基因 123
Bsvn丶鼬ゅ2017-11-07
免疫沉淀
当然，确定miRNA与mRNA之间的互作，我们还有更直接的方法，那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物（RISC）中的Argonaut（AGO）蛋白的抗体进行免疫共沉淀（co-IP）。生物通 www.ebiotrade.com
目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物，然后开展深度测序以鉴定发现的RNA，这种方法被称为紫外交联免疫沉淀结合高通量测序（HITS-CLIP），或CLIP-seq。利用这种方法来寻找miRNA的靶基因，能够明显降低miRNA结合位点的假阳性预测率，并且缩小miRNA结合位点的空间范围，可在全基因组范围内鉴定AGO蛋白与不同RNA上的结合。现在有多家公司提供CLIP-seq服务，如锐博生物。
Clontech公司（Takara旗下）也推出了一种新工具，能协助鉴定细胞中的miRNA靶点。这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体，允许miRNA与其目标结合，但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中，并“锁定”miRNA-目标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK（FLAG表位）标签有助于整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其目标的免疫沉淀，从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。生物通
整个过程大致如下：
1. 创建miRNA模拟物。生物通 www.ebiotrade.com
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞，并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。生物通 www.ebiotrade.com
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物（其中包括靶标mRNA）进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA，鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。
Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后，细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞，它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样，研究人员只需投入很少，就能实现大范围的筛选。
靶基因的验证
预测终归是预测，miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似，也就是抑制或过表达miRNA，然后检查mRNA或蛋白水平的反应。生物通 www.ebiotrade.com
目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先，构建荧光素酶表达载体，将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中，然后将构建好的重组载体转染到细胞中，并改变miRNA的表达水平，最后检测荧光素酶的表达情况，以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。
目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pmirGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因，其中萤火虫荧光素酶（luc2）作为主要报告基因，其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合；海肾荧光素酶/新霉素基因（hRluc-neo）作为对照报告基因，既能实现归一化处理，又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。
就目前而言，预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少，但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展，这种现状有望改变。让我们拭目以待吧。（生物通 余亮）
当然，确定miRNA与mRNA之间的互作，我们还有更直接的方法，那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物（RISC）中的Argonaut（AGO）蛋白的抗体进行免疫共沉淀（co-IP）。生物通 www.ebiotrade.com
目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物，然后开展深度测序以鉴定发现的RNA，这种方法被称为紫外交联免疫沉淀结合高通量测序（HITS-CLIP），或CLIP-seq。利用这种方法来寻找miRNA的靶基因，能够明显降低miRNA结合位点的假阳性预测率，并且缩小miRNA结合位点的空间范围，可在全基因组范围内鉴定AGO蛋白与不同RNA上的结合。现在有多家公司提供CLIP-seq服务，如锐博生物。
Clontech公司（Takara旗下）也推出了一种新工具，能协助鉴定细胞中的miRNA靶点。这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体，允许miRNA与其目标结合，但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中，并“锁定”miRNA-目标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK（FLAG表位）标签有助于整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其目标的免疫沉淀，从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。生物通
整个过程大致如下：
1. 创建miRNA模拟物。生物通 www.ebiotrade.com
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞，并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。生物通 www.ebiotrade.com
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物（其中包括靶标mRNA）进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA，鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。
Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后，细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞，它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样，研究人员只需投入很少，就能实现大范围的筛选。
靶基因的验证
预测终归是预测，miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似，也就是抑制或过表达miRNA，然后检查mRNA或蛋白水平的反应。生物通 www.ebiotrade.com
目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先，构建荧光素酶表达载体，将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中，然后将构建好的重组载体转染到细胞中，并改变miRNA的表达水平，最后检测荧光素酶的表达情况，以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。
目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pmirGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因，其中萤火虫荧光素酶（luc2）作为主要报告基因，其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合；海肾荧光素酶/新霉素基因（hRluc-neo）作为对照报告基因，既能实现归一化处理，又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。
就目前而言，预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少，但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展，这种现状有望改变。让我们拭目以待吧。（生物通 余亮）
Git 使用教程——关联VS Code_伊人如梦_vscode ...123
小男人沼L652021-08-16
因为目的基因要靠运载体进入受体细胞，然后目的基因才能在受体细胞中表达。所以基因表达载体的构建是基因工程的核心
腺病毒载体是什么意思?腺病毒载体疫苗的优缺点、原理、安全性...123
newton1322021-09-21
病毒载体有哪些？有什么优缺点？
基因表达载体是怎样进入微生物细胞内的123
夏露露HW632021-07-27
1、目的基因：是人们需要的特定基因，主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子．
2、基因表达载体的构建
（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用．（2）基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
②启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始，故②正确；
③终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束，故③正确；
④由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的，
2、基因表达载体的构建
（1）目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用．（2）基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
②启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始，故②正确；
③终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束，故③正确；
④由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分，以及目的基因导入受体细胞的方法不同，因此基因表达载体的构建是不完全相同的，
双荧光素酶实验 武汉巴菲尔生物技术服务有限公司123
箲神2017-11-07
生物发光，是生物素酶
干细胞疗法在部分中枢神经性疾病的进展和挑战 中国生物技术网123
enjoy恩杰2017-11-05
表达载体四部分：目的基因、启动子、终止子、标记基因
常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。
表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点（如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp），其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
常用细菌质粒进行构建，构建过程中运用限制性核酸内切酶切割出与目的基因相合的末端（多为黏性末端，也有平末端），采用DNA连接酶连接，导入生物体实现表达。标记基因可帮助识别质粒并检测是否成功整合到染色体DNA中。
表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自pBR322和pUC的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。在表达元件中，有一个杂合tac强启动子和终止子，在启动子下游有RBS位点（如果利用这个位点，要求与ATG之间间隔5-13bp），其后的多克隆位点可装载要表达的目标基因。
科研人员利用转基因技术将乙烯形成酶(EFE)反义基因导入番茄中获得...123
wbq_19812021-09-23
RNA干扰载体的构建的实验流程123
血刺SC3422017-11-06
在RNA干扰实验中
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
引起具有相同序列的mRNA发生讲解
导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
经常使用U6启动子等RNA聚合酶Ⅲ能够识别的启动子序列
最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
如果要知道详细的技术
建议还是去看书吧
这里是说不清的
首先需要构建dsRNA表达载体
将这种载体导入受体细胞中后
表达产生的dsRNA在DICER酶作用下形成siRNA
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导致细胞或个体不能合成相应的蛋白质
所以个体会表现出功能缺失表型
构建表达载体通常选用dsRNA
需要注意的一些方面是
dsRNA序列中GC的含量要小于50%
高GC含量会降低RNAi的效果
选定的dsRNA序列应通过搜索数据库确保与其他基因无同源性
以避免对其他同源性基因表达的抑制
不同区域的dsRNA具有不同的基因沉默效果
可同时构建两个以上针对同一基因不同靶区域的dsRNA表达载体
还要充分考虑siRNA的结构特征
siRNA与mRNA的同源程度对RNAi有明显影响
启动子区或者编码区与siRNA同源的基因受siRNA抑制
但siRNA在动物细胞中对mRNA的前体没有影响
所以含非编码区序列的dsRNA不会引起RNAi
而且在构建表达载体时
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最后将其转入到质粒中
这里说的只是一个简单的过程
总的来说构建表达载体是个比较复杂的过程
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【求助】植物双元表达载体pBI121的GUS基因是瞬时表达的吗? ...123
到底是怎样的∮2017-11-06
pCAMBIA系列载体是常用的植物表达双源载体，载体的骨架是pUC18。其中 pCAMBIA1300， pCAMBIA2300均无gus报告基因，pCAMBIA系列载体均含有卡那霉素抗性基因。
pCAMBIA2300特点：
大肠杆菌筛选抗性：卡那霉素。
植物筛选抗性：卡那霉素。
pCAMBIA2300特点：
大肠杆菌筛选抗性：卡那霉素。
植物筛选抗性：卡那霉素。
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