

excitation and emission spectrum of 5/6-TAMRA
For research use only!
Shipping: shipped on blue ice
Storage Conditions: store at -20 °C
Short term exposure (up to 1 week cumulative) to ambient temperature possible.
Shelf Life: 12 months after date of delivery
Molecular Formula: C41H46N9O10P (free acid)
Molecular Weight: 855.84 g/mol (free acid)
Purity: ≥ 95 % (HPLC)
Form: clear aqueous solution
Concentration: 1.0 mM - 1.1 mM
pH: 7.5 ±0.5
Spectroscopic Properties: λexc 545 nm, λem 575 nm, ε 90.0 L mmol-1 cm-1 (Tris-HCl pH 7.5)
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n.[医] (对伤处等的) 针探,探查; [医] 探针,取样器; 探测仪;探头;
vt.探索,调查; 用探针(或探测器等)探查,探测;
vt.盘问; (用试探性袭击等)侦察(敌情) ; 用尖物刺穿(物件); 用力使向前推进;
The more they probed into his background, the more inflamed their suspicions would become
他们越调查他的背景,疑团就越多。
大家好,近期在用lipo2000做悬浮细胞HL-60的siRNA转染,siRNA是由公司合成的三个siRNA,但是敲除效率很低,并且每次qPCR后做出来的结果都不一样:有时是第一个siRNA敲除作用好点,但有时是第二个或第三个siRNA效果好。由于结果不稳,并且细胞不好转我就将细胞换成了A549,但是换成了贴壁细胞后发现每次转染后进行qPCR检测时结果还是不稳,另外,我还设置了不同siRNA的组合,有时结果显示siRNA1+siRNA3效果好,但有时显示siRNA1+2+3效果好。光做这个siRNA转染已经几个月了,到现在都没有确定具体哪个片段起作用或效果最好,也没有一个稳定的趋势。请问造成这种敲除效率不稳定的原因到底是为什么?急切等待回复,谢谢!
tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
线粒体tRNA赖氨酸基因上发生1个A8344G突变,该基因与MERRF(伴破碎红纤维的肌阵挛性癫痫)相关。
谢谢,有人知道的吗?
成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂的毒性,看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的转染和DNA的转染不一样,DNA的转染是过量表达,死亡一些细胞对过量表达的蛋白本身来说影响不大,但siRNA的转染,死亡的细胞所有的基因表达(包括特定目标基因)都下降,将与siRNA造成的特定目标基因的表达下降现象是一致的,将大大影响实验结果。选用低细胞毒性的转染试剂其实很重要,比如engreen的Entranster-R4000.
由于siRNA沉默时效性的影响,转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测,转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高,细胞一方面转染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,48小时甚至更长时间后,沉默检测最佳点时,过于密集的细胞将影响细胞状态,从而影响实验结果。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。
siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
各种系统都可以使用,AlleleID7.0没搞的定
本软件只作为学习研究之用,研究完后马上删除,支持正版。。。
感谢ddd198599及其他司机的信息及启发
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