
CAS No.: 115144-35-9Molecular Formula: C11H7N2O3S2.KMolecular Weight: 318.42Purity >99% (chemical and optical purity)
Luciferin, the small molecule substrate, and the enzyme Luciferase are present in a variety of bioluminescent organisms including fireflies. Light can be generated by oxidation of D-luciferin but the reaction rate is extremely slow in absence of the enzyme luciferase and the cofactor ATP. Luminometers and optical microscopes have been developed to detect light emitted from the two-step luciferase-catalyzed reaction. The protein Luciferase can be transiently or stably expressed in cells and organisms. Thus, luciferase and luciferin have been widely used in in vitro and in vivo luciferase reporter assays detecting gene expression and detecting the level of cellular ATP in cell viability assays or for kinase activity assays. The applications of luciferase and luciferin including in vivo imaging are still expanding.
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tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
②成熟的tRNA分子中有许多的稀有碱基,因此tRNA在甲基转移酶催化下,某些嘌呤生成甲基嘌呤如A→mA,G→mA。有些尿嘧啶还原为双氢尿嘧啶。尿嘧啶核苷转变不假尿嘧啶核苷。某些腺苷酸脱氨基为成为次黄嘌呤核苷酸(Ⅰ)
③3’末端加上CCA:在核苷酸转移酶作用下,3’--末端除去个别碱基后,换上tRNA分子统一的CCA-OH末端,完成tRNA分子中的氨基酸臂结构。
成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂的毒性,看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的转染和DNA的转染不一样,DNA的转染是过量表达,死亡一些细胞对过量表达的蛋白本身来说影响不大,但siRNA的转染,死亡的细胞所有的基因表达(包括特定目标基因)都下降,将与siRNA造成的特定目标基因的表达下降现象是一致的,将大大影响实验结果。选用低细胞毒性的转染试剂其实很重要,比如engreen的Entranster-R4000.
由于siRNA沉默时效性的影响,转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测,转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高,细胞一方面转染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,48小时甚至更长时间后,沉默检测最佳点时,过于密集的细胞将影响细胞状态,从而影响实验结果。
编码线虫的氨基酰tRNA合成酶是否和编码大鼠的氨基酰tRNA合成酶的基因相同?
n.[医] (对伤处等的) 针探,探查; [医] 探针,取样器; 探测仪;探头;
vt.探索,调查; 用探针(或探测器等)探查,探测;
vt.盘问; (用试探性袭击等)侦察(敌情) ; 用尖物刺穿(物件); 用力使向前推进;
The more they probed into his background, the more inflamed their suspicions would become
他们越调查他的背景,疑团就越多。
最近用TaqMan探针做已知位点的SNP分型,用FAM和VIC分别标记对应探针,试验中发现纯合子中不配对的探针信号也会上升(如图一,GG型只允许FAM上升,结果VIC也上升;图三只允许VIC上升,结果FAM同时上升。。),想问一下是什么原因?怎么解决?谢谢大家!
国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。
第一部分
siRNA理论知识
siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛
细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛
回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛
关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。
第二部分
siRNA的设计
siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛
siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛
回复:【共享】SiRNA序列的设计方法-蚂蚁淘论坛
请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛
第三部分
siRNA转染效率
FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛
荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛
回复:siRNA效率-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】为何siRNA转染效果不佳-蚂蚁淘论坛
回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛
关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。
第四部分
siRNA动物体内转染
RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛
tRNA(转运RNA)可以转运氨基酸。
mRNA(信使RNA)是由细胞核内的DNA转录来的,相当于蛋白质的设计图纸。
翻译的过程:核糖体附着在mRNA上,然后tRNA搬运氨基酸,运往到核糖体上,从而拼合成蛋白质。

