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MCLAB/Cas9 Nuclease (wt)/CAS9-100/250 pmol, 50 µl
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MCLAB/Cas9 Nuclease (wt)/CAS9-100/250 pmol, 50 µl
品牌 / 
MCLab
货号 / 
CAS9-100
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Cas9Nuclease,Streptococcuspyogenes,isanRNA-guidedendonucleasethatcatalyzessite-specificcleavageofdoublestrandedDNA.

Introduction:
Cas9(CRISPRassociatedprotein9)isaRNA-guidedDNAendonucleaseenzymeassociatedwiththeCRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)adaptiveimmunitysystemin Streptococcuspyogenes.TheCRISPR/Cas9systemisthelatestRNA-guided,endonucleasetoolingenomeeditingwhichallowsforveryspecificgenomicdisruptionandreplacement.Guidedbyatarget-specific,singleguideRNA(sgRNA),theCas9nucleaseproteinservestounwindthegenomicDNAduplexandcleavebothstrandsuponrecognitionofthetargetsequencebythesgRNA,resultingindouble-strandedbreaks.Theresultingdouble-strandedbreakgetsrepairedbythenon-homologousendjoining(NHEJ)pathway,leADIngtoadisruptionintheopenreadingframeofthetargetedgene.

CRISPR-Cas9 System

Description:
RecombinantCas9-NLScomprisestheentireCas9proteinsequence(1368aminoacids)fusedtoaproprietarynuclearlocalizationsequence(NLS)anda6XHistagattheC-terminus.Theproteinhasanapparentmolecularweightof162kDaonSDS-PAGE.

Cas9variantsforvariousgenomemanipulationsareavailablein8forms:

  • Cas9(WT)
  • Cas9withnuclearlocalizationsignal(NLS)
  • Cas9with3NLS(onC-terminus)forbetternuclearlocalization
  • NickaseCas9(D10A)fornicking
  • dCas9(D10A/H840A)forsimplebinding
  • Hi-Fi1Cas93NLS(K848A,K1003A,R1060A)andHi-Fi2Cas93NLS(N497A,R661A,Q695A,Q926A)forreducinggenome-wideoff-targeteffects
  • dCas9-biotinylatedforimmunoprecipitation

Features:
LowendotoxinLevel
HighBIOLOGicalactivity
Consistentfromlottolot

Application:
Genomeediting

Source:
Cas9genefromStreptococcuspyogenesexpressedinE.coli

Purity:
Greaterthan97%asdeterminedbySDS-PAGE.

Activity:
96%ofPCRproductdigestionafter30minutesat37°C.Thereactionisperformedasfollow;20µlreaction,including100nMCas9protein,200nMtracrRNA,200nMEMX1-specificcrRNA,200ngEMX1-specificPCRproductand1xdigestionbuffer(20mMHEPES,100mMNaCland5mMMgCl2,pH6.5).Incubate30minutesat37°C,andstopreactionwith1µlRNAseA(1mg/ml).

Storagecondition:-20°C

10XCas9ReactionBuffer:
200mMHEPES,50mMMgCl2,1MNaCl,1mMEDTA,pH6.5

StorageBuffer:
50mMTris-HCl
50MKCl
1mMDTT
1mMEDTA
50%Glycerol
pH7.5

ExperimentalData
Cas9-IMAGE-001.pngCas9-IMAGE-002.png

References

  • JinekM,ChylinskiK,FonfaraI,HauerM,DoudnaJA,CharpentierE.(2012)Aprogrammabledual-RNA-guidedDNAendonucleaseinadaptivebacterialimmunity.Science.Aug17;337(6096):816-21.
  • MaliP,YangL,EsveltKM,AachJ,GuellM,DiCarloJE,NorvilleJE,ChurchGM.(2013)RNA-guidedhumangenomeengineeringviaCas9.Science.Feb15;339(6121):823-6. 
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下列关于DNA连接酶的叙述.正确的是A.不能恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键B.E·coliDNA连接酶只能缝合黏性末端.T4DNA连接酶黏性末端与平末端都可以... 查看更多>
生物素酰化探针的制备实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。在标准的切口平移实验体系中,生物素-11-dNTP取代了dNTP,DNA酶I 的浓度调整到可生成长100~500个核苷酸的范围,... 查看更多>
关键词:寡核苷酸;优化设计中图分类号:Q524 在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中,都需要使用寡核苷酸作为探针或引物,而对这些反应的质量起最重要影响作用的,就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好的结果,而用不够合适的寡核苷酸时, 查看更多>
PCR定义PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克 查看更多>
This was probably derived from Birnboim and I"ve used it since 1984 for isolation of recombinant plasmids from E. coli for routine screening. All solutions are 查看更多>
寡核苷酸,是一类只有20个以下碱基的短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA内的核苷酸),寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对连结,所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构,经常用于基因芯片、电泳、荧光原位杂交等过程中。... 查看更多>
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统BillClinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerasechainreaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的 查看更多>
一些间质性肺疾病(ILD)需要有选择地进行经支气管镜肺活检(TBLB)检查。然而,组织病理学评估对此类疾病的诊断率变异性很大,而且较易受到以下因素的影响,如样本的大小,以及存在常规活检钳所致的破碎伪像等。为了比较采用冷冻探针取样与传统活检钳取样进行 TBLB 时的诊断率及安全性,来自西班牙巴塞罗那自治大学内科的 Pajares V 等进行了一项研究,提示在诊断 ILD 查看更多>
加拿大的生物化学家M·史密斯1978年发明了寡聚核苷酸定点诱变技术,因此而获得了1993年诺贝尔化学奖。这一方法被用来在体外对已知的DNA片断内的核苷酸进行转换、增删的突变。这就改变了以往的对跗物质DNA进行诱变时的盲目性和随机性,可以根据实验者的设计而有目的地得到突变体。该技术能够改... 查看更多>
所有样本的光谱资料 为探讨尿肽能否作为一种生物标志物从健康对照者中区分出 2 型糖尿病患者(T2DM),北京大学第九临床医学院张曼教授及其团队进行了一项研究(Identification of urinary biomarkers for type 2 diabetes using bead-based proteomic approach),研究发现组氨酸三聚体核苷酸结合蛋白 1、双功能氨酰 tRNA 合成酶和聚集素前体蛋白可作为从健康对照者中区分 2 型糖尿病患者的潜在 查看更多>
Purification of Plasmid from 50 ml-culture1. Shake E. coli harboring plasmid at 37 C overnight in 50 ml of TB containing appropriate antibiotics. (when using a 查看更多>
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真核生物tRNA的转录后后加工123
桃妖夭shine2021-08-06
①tRNA前体在tRNA剪切酶的作用下,切成一定在小的tRNA分子。大肠杆菌RNase P可特异剪切tRNA前体的5’旁顺序,因此,该酶被称为tRNA5’成熟酶。除了RNaseP外,tRNA前体的剪切尚需要一个3’-核酸内切酶,这可将tRNA前体3’端的一段核苷酸序列切下来。此外RNaseD是tRNA3’端成熟酶。近年来的研究表明大肠杆菌RNaseP是一种非常特殊的酶分子,它是由RNA和蛋白质组成,最近发现RNAaseP分子中的RNA部分在某些条件下,可以单独地催化tRNA前体的加工成熟,这个发现和四膜虫tRNA能自我拼接被认为是近十年来生化领域内最令人鼓舞的发现之一。说明RNA分子确具有酶的催化活性。经过剪切后的tRNA分子还要在拼接酶作用下,将成熟tRNA分子所需的片段拼起来。

  ②成熟的tRNA分子中有许多的稀有碱基,因此tRNA在甲基转移酶催化下,某些嘌呤生成甲基嘌呤如A→mA,G→mA。有些尿嘧啶还原为双氢尿嘧啶。尿嘧啶核苷转变不假尿嘧啶核苷。某些腺苷酸脱氨基为成为次黄嘌呤核苷酸(Ⅰ)

  ③3’末端加上CCA:在核苷酸转移酶作用下,3’--末端除去个别碱基后,换上tRNA分子统一的CCA-OH末端,完成tRNA分子中的氨基酸臂结构。
cpi探针与牙周探针的区别123
dingxiang1212122021-07-30
相关疾病:牙周炎牙周炎轻度牙周袋小于4mm中度小于6mm重度大于6mm但是牙周探针刻度在3.5mm5.5mm处...
siRNA screen:是指小RNA分子(~21-25核苷酸)扫描,是分子生物学中对RNA研究的一种技术。shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA,从而引发基因沉默或者表达抑制。现在有多个报道说通过质粒表达siRNAs同样可以抑制特定基因的表达。

siRNA:Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。

siRNA有如下特点:
1. 长度约在22nt左右。
2. 依赖Dicer酶的加工,是Dicer的产物,所以具有Dicer产物的特点。
3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。
4. 是RISC组分。
5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。
6. siRNA一般是人工体外合成的,通过转染进入人体内,是RNA干涉的中间产物;植物体内也存在内源的siRNA。
7. 结构上, siRNA是双链RNA。
8. 在Dicer酶的加工过程中, siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。
9. 在作用位置上, siRNA可作用于mRNA的任何部位,并与mRNA完全互补。
10. 在作用方式上, siRNA只能导致靶标基因的降解,即为转录水平后调控。
11. siRNA不参与生物生长,是RNAi的产物,原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。

补充,还有说常见的有丝氨酸水解酶家族,有文献提及赖氨酸。请问这些是如何选择的

一:结构特点:①含有稀有碱基较多,达核苷酸总量的5%-20%。②不同的tRNA尽管核苷酸组分和排列顺序各异,但其3’端都含有CCA序列,是所有tRNA接受氨基酸的特定位置。③所有的tRNA分子都折叠成紧密的三叶草二级结构和L型立体构象,结构较稳定,半衰期均在24小时以上。
  二:主要功能:①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。

请问大神,siRNA一定是瞬转;如果瞬转,比如只能维持个2-3天,那么如果我想观察药物A作用于siRNA干预的细胞的效果,但是这个药物A需要作用10天,那么我间隔2-3天加一点SIRNA,这样可以吗,谢谢大神了

tRNA中是有氢键的。
tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
小弟最近买了sigma的tRNA干粉,技术说可以用水直接溶解,不知道需不需要DEPC处理,多少度保存?
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成.SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默.
与小分子siRNAs相比,尽管两者在分子特性、生物起源等方面是相似的,但也存在不少的差异.siRNAs是由dsDNA在Dicer酶切割下产生,而成熟miRNAs的产生要复杂一些,首先pri-miRNA在核内由一种称为Drosha酶处理后成为大约70nt的带有茎环结构的Precursor miRNAs (pre-miRNAs)(Denli et al.,2004; Gregory et al.,2004; Han et al.,2004);这些pre-miRNAs在Exportin-5帮助下转运到细胞核外之后再由胞质Dicer酶进行处理,酶切后成为成熟的miRNAs(Lund et al.,2004; Yi et al.,2003).两者的作用机制上也存在差别,成熟的miRNAs则是通过与miRNP核蛋白体复合物结合,识别靶mRNA,并与之发生部分互补,从而阻遏靶mRNA的翻译.在动物中,成熟的单链miRNAs与蛋白质复合物miRNP结合,引导这种复合物通过部分互补结合到mRNA的3′UTR(非编码区域),从而阻遏翻译.而在siRNA通路中,单链的siRNA结合到RISC复合物中,引导复合物与mRNA完全互补,通过其自身的解旋酶活性,解开siRNAs,通过反义siRNA链识别目的mRNA片段,通过内切酶活性切割目的片段,接着再通过细胞外切酶进一步降解目的片段.除此之外,miRNA也可以切割完全互补的mRNA,而siRNA也可以阻遏3′UTR具有短片断互补的mRNA的翻译.
【求助】siRNA转染讨论123
心碎在黄昏3822017-11-04
三到五小时。
siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
【共享】siRNA对照解析123
白堤8544539862021-08-18
不会,siRNA识别靶序列是有高度特异性的,因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生,所以这些中央的碱基位点就显得极为重要,一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。