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MCLAB/Cas9 Nuclease (wt)/CAS9-200/1 nmol, 50 µl
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MCLAB/Cas9 Nuclease (wt)/CAS9-200/1 nmol, 50 µl
品牌 / 
MCLab
货号 / 
CAS9-200
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Cas9Nuclease,Streptococcuspyogenes,isanRNA-guidedendonucleasethatcatalyzessite-specificcleavageofdoublestrandedDNA.

Introduction:
Cas9(CRISPRassociatedprotein9)isaRNA-guidedDNAendonucleaseenzymeassociatedwiththeCRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)adaptiveimmunitysystemin Streptococcuspyogenes.TheCRISPR/Cas9systemisthelatestRNA-guided,endonucleasetoolingenomeeditingwhichallowsforveryspecificgenomicdisruptionandreplacement.Guidedbyatarget-specific,singleguideRNA(sgRNA),theCas9nucleaseproteinservestounwindthegenomicDNAduplexandcleavebothstrandsuponrecognitionofthetargetsequencebythesgRNA,resultingindouble-strandedbreaks.Theresultingdouble-strandedbreakgetsrepairedbythenon-homologousendjoining(NHEJ)pathway,leADIngtoadisruptionintheopenreadingframeofthetargetedgene.

CRISPR-Cas9 System

Description:
RecombinantCas9-NLScomprisestheentireCas9proteinsequence(1368aminoacids)fusedtoaproprietarynuclearlocalizationsequence(NLS)anda6XHistagattheC-terminus.Theproteinhasanapparentmolecularweightof162kDaonSDS-PAGE.

Cas9variantsforvariousgenomemanipulationsareavailablein8forms:

  • Cas9(WT)
  • Cas9withnuclearlocalizationsignal(NLS)
  • Cas9with3NLS(onC-terminus)forbetternuclearlocalization
  • NickaseCas9(D10A)fornicking
  • dCas9(D10A/H840A)forsimplebinding
  • Hi-Fi1Cas93NLS(K848A,K1003A,R1060A)andHi-Fi2Cas93NLS(N497A,R661A,Q695A,Q926A)forreducinggenome-wideoff-targeteffects
  • dCas9-biotinylatedforimmunoprecipitation

Features:
LowendotoxinLevel
HighBIOLOGicalactivity
Consistentfromlottolot

Application:
Genomeediting

Source:
Cas9genefromStreptococcuspyogenesexpressedinE.coli

Purity:
Greaterthan97%asdeterminedbySDS-PAGE.

Activity:
96%ofPCRproductdigestionafter30minutesat37°C.Thereactionisperformedasfollow;20µlreaction,including100nMCas9protein,200nMtracrRNA,200nMEMX1-specificcrRNA,200ngEMX1-specificPCRproductand1xdigestionbuffer(20mMHEPES,100mMNaCland5mMMgCl2,pH6.5).Incubate30minutesat37°C,andstopreactionwith1µlRNAseA(1mg/ml).

Storagecondition:-20°C

10XCas9ReactionBuffer:
200mMHEPES,50mMMgCl2,1MNaCl,1mMEDTA,pH6.5

StorageBuffer:
50mMTris-HCl
50MKCl
1mMDTT
1mMEDTA
50%Glycerol
pH7.5

ExperimentalData
Cas9-IMAGE-001.pngCas9-IMAGE-002.png

References

  • JinekM,ChylinskiK,FonfaraI,HauerM,DoudnaJA,CharpentierE.(2012)Aprogrammabledual-RNA-guidedDNAendonucleaseinadaptivebacterialimmunity.Science.Aug17;337(6096):816-21.
  • MaliP,YangL,EsveltKM,AachJ,GuellM,DiCarloJE,NorvilleJE,ChurchGM.(2013)RNA-guidedhumangenomeengineeringviaCas9.Science.Feb15;339(6121):823-6. 
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在近期 Anesthesiology 杂志上,来自美国华盛顿大学圣路易斯分校麻醉学系的 Athiraman 教授等报道了 1 例手术期间用核磁共振成像评估脑实质内温度探针的病例,现介绍如下。基本病史患者,26 周岁男性,因右侧额叶患少突星形细胞瘤、累及至蝶窦,行颅内根治术。在术中核磁共振成像(MRI)显示一线性低信号图像,沿右侧蝶窦延伸至颅内(如图所示)。研究人员分析认为,为一 查看更多>
磁珠寡核苷酸纯化试剂盒Mag-BindOligonucleotidePurificationKit(50)263231北京智杰方远科技有限公司磁珠寡核苷酸纯化试剂盒 查看更多>
随机引物法(在融化琼脂糖存在下利用随机寡核苷酸延伸进行DNA的放射标记) 的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。此法系可用于从低熔点琼脂糖凝胶中回收 DNA 的放射性标记 ( Feinber... 查看更多>
Programmed Cell Death In Situ Detection Using Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) Terminal deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP nick end labeling 查看更多>
•PCR反应的成分和作用 总体积:一般为25μl~100 μl (一)无Mg2 buffer:由纯水、kcl、Tris组成。Tris用于调节反应体系pH值,使Taq酶在偏碱性环境中反挥活性。kcl可降低退火温度,但不能超过50 mmol/L,否则会抑制DNA聚合酶活性。 (二)Mg2 :终浓度为1.5~2 查看更多>
Detection of Apoptosis in Paraffin-embedded tissues by ISEL (In Situ End Labeling)The ISEL technique identifies morphologically apparent karyorrhetic cells and 查看更多>
上海杰美基因医药科技有限公司在发布的寡核苷酸探针非同位素HRP-DAB显色法RNA供应信息,浏览与寡核苷酸探针非同位素HRP-DAB显色法RNA相关的产品或在搜索更多与寡核苷酸探针非同位素HRP-DAB显色法RNA相关的内容。 查看更多>
B 族链球菌正常寄居于阴道和直肠,属于条件致病菌。早在 20 世纪 70 年代,GBS 已被证实为围产期母婴感染的主要致病菌之一,在围产医学中占有不可忽视的地位,同时它也是婴幼儿败血症和脑膜炎最常见的原因。据美国疾病控制中心(CDC)统计,大概 10%—30% 的孕妇感染 GBS,其中 40% ~ 70% 在生产过程中会传递给孩子。带菌的婴儿中有相当部分 (1% ~3%) 早期出现侵入性感染, 查看更多>
1 主要试剂STR Pvimer Postive Control DNASTR Buffer Allele LadderGold Taq DNA Polymerase Rox-3502 主要仪器DNA扩增仪(PE9700)自动测序仪(PE377)微型高速离心机GeneScan软件Geneotyper软化3 操作步骤3.1 基因组DNA提取——盐析法3.1.1 操作流程用方框图形式,按照GeneScan技术的先后顺序和技术要求、分割形成7个相对独立的实验阶段,以便合理安排分配试验时间,提高工作效经。3.1. 查看更多>
上海研生实业有限公司所提供的CD73 (5´-nucleotidase cytosolicⅡ)  胞浆-5´-核苷酸酶-Ⅱ 抗原质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息! 查看更多>
Contributor: Suprya JayadevDate: July 13, 1994Fixation1) Collect 2 X 106 cells.2) Pellet cells by spinning at 1,000 rpm, 4°C for 5 minutes.3) Resuspend cell pe 查看更多>
1 导论 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是美国Perkin-Elmer/Cetus公司人类遗传研究室Mullis K. B.等人于1985年发明的一种快速体外DNA片段扩增技术,是八十年代分子生物学资源领域的一项革命性突破,被誉为分子生物学资源发展史上的又一里程碑。该技 查看更多>
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当探针压缩到最大行程的2/3时就达到它的工作行程,此时弹力就和它型号中所标明的弹力相同的。具体可以看一下京伟科技官网上面有详细介绍!
但tRNA上不只有反密码子。
tRNA也是一段长的核糖核苷酸链,而且具有局部双链结构,反密码子位于一端。
所以它和mRNA、rRNA一样都含有四种含氮碱基。

补充,还有说常见的有丝氨酸水解酶家族,有文献提及赖氨酸。请问这些是如何选择的

我想要定量血浆miRNA,目前用的方法就是Qiagen公司的血浆提取、逆转、SYBGreenPCR试剂盒引物也是qiagen,目前做出来的结果不是很理想,公司不提供引物序列,只有miRbase上的参考序列,想要证明引物序列、扩增产物是否是我们想要的,有人推荐设计Tapman探针,再做PCR,对比SYBGreenPCR结果,从而来看引物特异性。我的问题是:这样对比有意义吗?我问过很多公司做tapman只合成不设计,要自己提供序列,可我只有数据库中的参考序列,如果我自己有序列了不就可以合成特异引物,为啥要用tapman探针来验证呢?求专业人士答疑解惑!谢谢

看有的文献上把tRNA和rRNA列入了ncRNA的范围,而有些则分开来讨论,到底哪种分类比较准确呢?

另外,最近测了些tRNA的二级结构,发现有部分不是三叶草结构,但是以前看文献上说tRNA都可以形成三叶草结构的,所以有些不解,望指点,非常感谢!
tRNA中是有氢键的。
tRNA不是一条直的单链,而是弯曲的,呈现一个三叶草的形状。在弯曲的部位,tRNA自己的碱基跟自己的碱基互补配对连起来,碱基对中存在氢键。
其他的RNA一般为单链不存在氢链,但双链的由于碱基互补配对存在氢键。
急!tRNA和rRNA到底是如何在翻译中起作用的,有什么作用,如何进行的,翻译时的四叶草形的东西是tRNA吗?请详细一点
那里能够检查

线粒体tRNA赖氨酸基因上发生1个A8344G突变,该基因与MERRF(伴破碎红纤维的肌阵挛性癫痫)相关。

谢谢,有人知道的吗?
你好,很高兴回答你的问题。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。

有问题要请教实验前辈!

用SiRNA抑制蛋白A的表达,SiRNA转染48小时后可观察到蛋白A表达明显下降.

现在想检测SiRNA抑制A蛋白表达后对凋亡蛋白、迁移蛋白及周期蛋白的影响,应该在SiRNA干扰后多长时间检测这些蛋白的变化?48小时?72小时?96小时?

望高手解答,我的理解是转染48小时后A蛋白表达下降,如果要观察A蛋白对以上蛋白的影响,应该在转染后超过48小时再检测这些蛋白的变化,比如72小时或96小时,不知道我的理解对不对?

先谢了!

【求助】siRNA转染讨论123
心碎在黄昏3822017-11-04
三到五小时。
siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
求助:
编码线虫的氨基酰tRNA合成酶是否和编码大鼠的氨基酰tRNA合成酶的基因相同?