TotalRNAfromCulturedSubcutaneous
ADIpocytes,BMI25.0-29.99

HighqualityRNAisavailablefromculturedadipocytes,preadipocytes,wholeadiposetissue,adipocyte("floaters"),primaryhepatocytesandvariousotherhumantissues.TheRNAisfromhealthyortypeIIdiabeticdonors.Donorinformationincludingage,sex,andbodymassindexwillbeincludedwithyourorder.Wecanaccommodatemanyspecialrequests.
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蛋白产物的检测一、组织蛋白的裂解提取:1.分别取-70℃保存的各组动物的样品(半个脑、0.5g肌肉),放入小离心管中,在冰浴上以PBS充分洗涤2次,除去残留血液。2.用无菌手术剪和镊子将大鼠肌肉剪碎(脑样品不用剪碎),放入另一小离心管中,于0℃以PBS充分洗涤,4℃,3000 rpm离心5分钟。3.吸出上清夜
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一、 材料准备:1.细胞爬片:细胞爬片经固定液-4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC,固定15min。经无水乙醇、95%、85%和75%乙醇各2min脱水。2.探针: 多聚寡核苷酸探针-FITC 2ug/ml二、 FISH操作流程 暴露mRNA 核酸片段:细胞爬片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2 滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃消化5 分钟。 ...
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Plasmid stability testImmediately before indcution, it is advisable to test the culture to determine the fraction of cells that still carry the target plasmid.
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In Situ Cell Death (Apoptosis) Detection by TUNEL labelingby Boehringer Mannheim (Catalog No. 1684809), modified by Josiah N. Wilcox andJosé C. Rodriguez - Emo
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Attachment of the ubiquitin peptide to proteins targets them for proteolytic degradation by a complex cellular structure, the proteasome. The regulated proteol
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摘要对单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的研究分析近几年被广泛应用于生物及医学研究的诸多领域,筛查SNPs的方法很多,各具特色,并一直不断地发展.本文对筛查SNP的几种常用及最新方法做一简要介绍,其中包括PCR-RFLP,分子信标等.细胞外基质的降解和改变是肿瘤
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•PCR反应的成分和作用 总体积:一般为25μl~100 μl (一)无Mg2 buffer:由纯水、kcl、Tris组成。Tris用于调节反应体系pH值,使Taq酶在偏碱性环境中反挥活性。kcl可降低退火温度,但不能超过50 mmol/L,否则会抑制DNA聚合酶活性。 (二)Mg2 :终浓度为1.5~2
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上海熹垣生物科技有限公司在发布的人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒供应信息,浏览与人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒相关的产品或在搜索更多与人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒相关的内容。
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深圳市美凯特科技有限公司在发布的NADH(二磷酸吡啶核苷酸(还原型))I 级供应信息,浏览与NADH(二磷酸吡啶核苷酸(还原型))I 级相关的产品或在搜索更多与NADH(二磷酸吡啶核苷酸(还原型))I 级相关的内容。
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1 主要试剂STR Pvimer Postive Control DNASTR Buffer Allele LadderGold Taq DNA Polymerase Rox-3502 主要仪器DNA扩增仪(PE9700)自动测序仪(PE377)微型高速离心机GeneScan软件Geneotyper软化3 操作步骤3.1 基因组DNA提取——盐析法3.1.1 操作流程用方框图形式,按照GeneScan技术的先后顺序和技术要求、分割形成7个相对独立的实验阶段,以便合理安排分配试验时间,提高工作效经。3.1.
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1993年第一种microRNA(miRNA) lin-4在线虫(C. elegans)中被发现,至今已有二十年了。这一发现,揭开了人类深入认识生物体内源性非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)功能的序幕。近十年来,对以miRNA和long non-coding RNA(lncRNA)为代表的非编码RNA的研究突飞猛进。ncRNA已成为分子生物学和分子医学研究的重要热点领域之一,miRNA和lncRNA的研究成果不断涌现,它们已成为生命科学研究领域的“富
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聚合酶链反应即PCR技术,因为其对基因或特定核酸序列在短时间内的极大的扩增效率,已在感染性疾病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等的诊断和研究中得到了广泛的应用,并在某些方面几乎是难以替代的。但是,像自然界的任何事物一样,PCR也有其局限性,稍不注意,就很容易造成
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rRNA(核糖体RNA)是核糖体的组成成分,它和蛋白质共同组成了核糖体。
tRNA(转运RNA)可以转运氨基酸。
mRNA(信使RNA)是由细胞核内的DNA转录来的,相当于蛋白质的设计图纸。
翻译的过程:核糖体附着在mRNA上,然后tRNA搬运氨基酸,运往到核糖体上,从而拼合成蛋白质。
四种核苷酸或脱氧核苷酸按照一定的排列顺序以3’,5’磷酸二酯键(phosphodiester linkage)相连形成的多聚核苷酸链或脱氧核苷酸(polydeoxynucleotides), 称为核苷酸序列(也称为碱基序列)。
有问题要请教实验前辈!
用SiRNA抑制蛋白A的表达,SiRNA转染48小时后可观察到蛋白A表达明显下降.
现在想检测SiRNA抑制A蛋白表达后对凋亡蛋白、迁移蛋白及周期蛋白的影响,应该在SiRNA干扰后多长时间检测这些蛋白的变化?48小时?72小时?96小时?
望高手解答,我的理解是转染48小时后A蛋白表达下降,如果要观察A蛋白对以上蛋白的影响,应该在转染后超过48小时再检测这些蛋白的变化,比如72小时或96小时,不知道我的理解对不对?
先谢了!
最近用TaqMan探针做已知位点的SNP分型,用FAM和VIC分别标记对应探针,试验中发现纯合子中不配对的探针信号也会上升(如图一,GG型只允许FAM上升,结果VIC也上升;图三只允许VIC上升,结果FAM同时上升。。),想问一下是什么原因?怎么解决?谢谢大家!
不会,siRNA识别靶序列是有高度特异性的,因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生,所以这些中央的碱基位点就显得极为重要,一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。
①tRNA前体在tRNA剪切酶的作用下,切成一定在小的tRNA分子。大肠杆菌RNase P可特异剪切tRNA前体的5’旁顺序,因此,该酶被称为tRNA5’成熟酶。除了RNaseP外,tRNA前体的剪切尚需要一个3’-核酸内切酶,这可将tRNA前体3’端的一段核苷酸序列切下来。此外RNaseD是tRNA3’端成熟酶。近年来的研究表明大肠杆菌RNaseP是一种非常特殊的酶分子,它是由RNA和蛋白质组成,最近发现RNAaseP分子中的RNA部分在某些条件下,可以单独地催化tRNA前体的加工成熟,这个发现和四膜虫tRNA能自我拼接被认为是近十年来生化领域内最令人鼓舞的发现之一。说明RNA分子确具有酶的催化活性。经过剪切后的tRNA分子还要在拼接酶作用下,将成熟tRNA分子所需的片段拼起来。
②成熟的tRNA分子中有许多的稀有碱基,因此tRNA在甲基转移酶催化下,某些嘌呤生成甲基嘌呤如A→mA,G→mA。有些尿嘧啶还原为双氢尿嘧啶。尿嘧啶核苷转变不假尿嘧啶核苷。某些腺苷酸脱氨基为成为次黄嘌呤核苷酸(Ⅰ)
③3’末端加上CCA:在核苷酸转移酶作用下,3’--末端除去个别碱基后,换上tRNA分子统一的CCA-OH末端,完成tRNA分子中的氨基酸臂结构。
本人,大学本科生小白,想问一下各位老师,sirna设计出来之后,用snapgene吧sirna与靶mrna进行序列对比为什么没有同源序列,还有如果我想检验sirna是不是脱靶,是不是可以将sirna序列与相关影响的非靶基因序列对比确定哪。
tRNA(转运RNA):多数tRNA由70-90个左右的核糖核苷酸组成并折叠成三叶草形,作用是在蛋白质合成过程中运输氨基酸;
mRNA(信使RNA):是由细胞核内的DNA转录来的,它携带遗传信息,在蛋白质合成时充当模板,决定肽链的氨基酸排列顺序;mRNA存在于原核生物和真核生物的细胞质及真核细胞的某些细胞器(如线粒体和叶绿体)中;
rRNA(核糖体RNA):是核糖体的组成成分,它是3类RNA中相对分子质量最大的一类RNA,与蛋白质结合而形成核糖体,其功能是作为mRNA的支架,使mRNA分子在其上展开,实现蛋白质的合成。
三到五小时。
siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
本人最近一直做探针法,可是阴性对照也出峰,排除污染,还有什么原因呢?怎么解决呢?新手求指教!!!
看有的文献上把tRNA和rRNA列入了ncRNA的范围,而有些则分开来讨论,到底哪种分类比较准确呢?
另外,最近测了些tRNA的二级结构,发现有部分不是三叶草结构,但是以前看文献上说tRNA都可以形成三叶草结构的,所以有些不解,望指点,非常感谢!
PNA是一种人工合成的核酸的类似物,与核酸相似,它也是由携带ATGC四种碱基的四种单体首尾相连所构成的链状结构,从而保证这种物质能够像核酸一样靠碱基堆积力形成Watson-Crick碱基对,与DNA、RNA形成杂交分子PNA/DNA或PNA/RNA这就是PNA作为杂交探针的理论基础。所不同的是构成PNA骨架的单体不是通常的带负电的磷酸核糖而是N-(2-氨已基)-甘氨酸,单体之间靠酰胺键连接成长链。这种电中性的骨架结构赋予肽核酸探针优良的杂交特性。
首先PNA/DNA杂交分子的性质很稳定,从化学动力学角度看,PNA/DNA的结合常数有明显提高,一旦形成了双链,即使加入上百倍的寡核苷酸也不能使它解离。据报道,对于含有高度反向重复序列的超螺旋DNA,PNA/DNA杂交分子比DNA/DNA双链的结合常数提高了五万倍;从热力学角度看,PNA/DNA杂交分子的Tm也高于相同序列的DNA/DNA双链,通常,在100mmol/L的NaCl溶液中,PNA/DNA杂合子与相应的DNA/DNA双链相比,每个碱基对的Tm值要高出1℃。也就是说,15个碱基对的PNA/DNA平均Tm值约为70℃,比同样的DNA/DNA要高出15℃。从而使检测过程中的灵敏度大为提高。此外,中性骨架还使PNA与DNA的杂交摆脱了对杂交液盐度的依赖,这一重要性质不仅意味着杂交过程中省去了提高盐浓度的操作,更有意义的是,只要保证杂交体系足够低的离子强度,就能抑制非特异性的杂交和靶DNA序列的自身复性对灵敏度的损害。
不但如此,这种高度的灵敏度并没有像其他种类的探针一样引起特异性的下降,相反它对于碱基错配的容纳力更小。在16bp的PNA/DNA杂合子中,一个碱基的错配会导致Tm值下降15℃,而对于同样的DNA双链,Tm值只下降11℃
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