1．质粒快速鉴定 试剂： Protoplastingbuffer: 30mMTris-HCl,pH8.00.33ml/1.0M 5mMEDTA0.1ml/0.5M 50mMNaCl0.1ml/5.0M 20%Sucrose5ml/40% 50µg/mlRNAseI50ul/10mg/ml 50µg/mllysozyme50ul/10mg/ml 补水至10ml，-20℃分装保存。 Lysisbuffer: 89mMTris-HCl,pH8.0 89mMboricacid2mlof5×TBE 2.5mMEDTA 2%SDS2mlof10% 5%sucrose1.25mlof40% 0.04%bromphenolblue4mg 补水至10ml，-20℃分装保存。 步骤： 1．将转化后的菌液铺平板，37℃过夜培养。 2．配制0.6--0.7%的琼脂糖TBE胶。 3．用连续加样枪在96孔板中每孔加入10µlPhotoplastingBuffer。 4．用灭过菌的10ul小枪头挑取单克隆白斑至含有PhotoplastingBuffer的96孔板中，振荡混匀。 5．用连续加样枪将LysisBuffer上样于凝胶中，每孔4µl，用排枪将细胞与Protoplastingbuffer混合液上样于凝胶中（细胞在Protoplastingbuffer中不宜超过30-40min），并点上Marker。 6．调节电压为20V（小槽）或40V（大槽），电泳15min，使细胞充分裂解，将电压调高到200V，继续电泳1hr，照相。 7．根据胶图粗略鉴定插入片段的大小及小片段率。 2．菌落PCR 1．取适量PCR薄壁管，置于冰上，每管先加入17.3ul的灭菌水。 2．用灭过菌的10ul小枪头挑取单克隆白斑至灭菌水中，振荡混匀。 3．依次加入： 10xbuffer2.5 Mgcl2(25mM)1.8 DNTP(2.5mM)1 T3引物（10pmol）1 T7引物（10pmol）1 Taq酶0.4 total25ul 4．94℃，2min。 5．94℃4分钟 94℃40秒 53.6℃40秒35个循环 72℃4分钟 72℃10分钟 4℃24小时 6．待PCR反应进入4℃后，取下PCR薄壁管，取7ulPCR产物加入3ul溴芬兰跑电泳，同时上1KbDNAladder。半小时后照相，观察胶图，根据胶图粗略鉴定插入片段的大小及小片段率。 7．将快速鉴定和菌落PCR检测合格的文库送检。
