DNA文库构建后TaqMan试剂盒QPCR定量不足

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2021-07-30

问题描述：

各位好，希望能得到你的建议与帮助！

从人的冰冻组织提取DNA，Nanodrop定量纯度a260/a280在1.86左右，qubit2.0定量浓度达到了100ng/ul以上，按照Thermo的建库试剂盒操作，建库完成后，利用qPCR进行文库定量，有几个文库定量值只有20pM，问题在哪呢？

我试着更换Barcode重新建库，部分文库定量居然达到了600多pM，问了技术支持，他们也没有相关经验，请问群里的大神可否遇到过？

建库试剂盒是在保质期内IONAmpliseqlibrarykit2.0，引物是2013年自己定制的panel，一直储藏在-20℃冰箱，Barcode超出保质期半年。

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梦见宾

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我们建库没有用这个产品

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富家子弟

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梦见宾我们建库没有用这个产品因为我们用的是ionpgm仪器，一直以来都是使用的这个建库试剂盒。请问，你们使用的是什么产品？

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梦见宾

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富家子弟因为我们用的是ionpgm仪器，一直以来都是使用的这个建库试剂盒。请问，你们使用的是什么产品？我们用的是clontech。

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jiandanai_008

用户

富家子弟因为我们用的是ionpgm仪器，一直以来都是使用的这个建库试剂盒。请问，你们使用的是什么产品？Qiagen的建库试剂盒

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