减肥必知的脂肪体内代谢过程
来自 : 蚂蚁淘
YeastChromosomalDNAPrep
- use25mlcellspertimepoint/sample
- addcellsto25ml100%Ethanol(at-20°C),add1ml0.5MEDTA
- storeat-20°C
- thawcells,washoncewithH2O,resUSPendin0.5mlShperoplastbuffer
- incubatefor30minat37°C
- add0.5mlProteinaseKbuffer
- incubatefor30minat65°C
- add0.2ml5MKAc,incubateonicefor10min
- spinat10,000rpmfor15min
- takesupernatantandEthanolprecipitatetheDNA
- resuspendDNAin500µlTE
- RNaseIdigestfor30minat37°C
- extractwithPhenol/Chloroform
- EthanolprecipitateDNA
- dissolveDNAinTEandmeasureconcentration
- use2-5µgforSouthernblot
Buffers:Shperoplastbuffer:1.2Msorbitol;0.1MEDTA;1%b-Mercaptoethanol;0.1%Zymolyase.[for10ml:6ml2Msorbitol;2ml0.5MEDTA;100µlb-Mercaptoethanol;10mgZymolyase]42°CProteinaseKbuffer:50mMEDTA;0.3%SDS;0.01%proteinaseK.[for10ml:1ml0.5MEDTA;300µl10%SDS;1mgproteinaseK]
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