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MCLAB/RCA DNA Amplification Kit/PPK-OEM/1 Ea
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MCLAB/RCA DNA Amplification Kit/PPK-OEM/1 Ea
品牌 / 
MCLab
货号 / 
PPK-OEM
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RCADNAamplificationkitsarenovelproductsdevelopedspecificallytopreparetemplatesforDNAsequencing.TheRCAmethodutilizesbacteriophagephi29DNApolymerasetoexponentiallyamplifysingle-ordouble-strandedcircularDNAtemplatesbyrollingcircleamplification(RCA).ThisisothermalamplificationmethodproducesmicrogramquantitiesofDNAfrompicogramamountsofstartingmaterialinafewhours.

Description:
RCADNAamplificationkitsarenovelproductsdevelopedspecificallytopreparetemplatesforDNAsequencing.AsillustratedinFigure1,theRCAmethodutilizesbacteriophagephi29DNApolymerasetoexponentiallyamplifysingle-ordouble-strandedcircularDNAtemplatesbyrollingcircleamplification(RCA)(1,2).ThisisothermalamplificationmethodproducesmicrogramquantitiesofDNAfrompicogramamountsofstartingmaterialinafewhours.

AmplificationinvitroofverysmallamountsoftemplateDNAeliminatestheneedforovernightcellcultureandconventionalplasmidorM13DNApurification.TheproofreADIngactivityofphi29DNApolymeraseensureshighfidelityDNAreplication.(3)

Thestartingmaterialforamplificationcanbeasmallamountofbacterialcellscontainingaplasmid,anisolatedplasmid,intactM13phage,oranycircularDNAsample.BacterialcoloniescanbepickedfromagarplatesandaddeddirectlytotheRCAreaction.Alternatively,microliterquantitiesofasaturatedbacterialcultureoraglycerolstockcanserveasstartingmaterial.Dependingonthesourceofstartingmaterial,amplificationiscompletedin4–18hoursat30˚Cwithnoneedforthermalcycling.TheproductoftheRCAreactionishighmolecularweight,double-strandedconcatemersofthecirculartemplate.

NotethatwhenstartingwithM13clones,theRCAproductisdouble-strandedDNAandcanbesequencedwithforwardandreverseprimers.DNAamplifiedbytheRCAmethodcanbeuseddirectlyincyclesequencingreactionswithoutanypurification.

Figure:
MCRCA DNA Amplification Kit figure 1.png
Figure1,SchematicdiagramoftheRCAprocess.RandomhexamerprimersannealtothecirculartemplateDNAatmultiplesites.Phi29DNApolymeraseextendseachoftheseprimers.WhentheDNApolymerasereachesadownstreamextendedprimer,stranddisplacementsynthesisoccurs.Thedisplacedstrandisrenderedsingle-strandedandavailabletobeprimedbymorehexamerprimer.Theprocesscontinues,resultinginexponential,isothermalamplification.

MCRCA DNA Amplification Kit figure 2.png
Figure2.
 

Components:

RCADNAAmplificationKit(100reactions)
Cat#:PPK-100
Phi29DNAPolymerase,20µl,(10,000units/ml)
2xMCRCAmix,1ml
CellLysisBuffer,1ml

RCADNAAmplificationKit(500reactions)
Cat#:PPK-200
Phi29DNAPolymerase,100µl,(10,000units/ml)
2xMCRCAmix,5ml
CellLysisBuffer,5ml

References:
1.Dean,F.etal.,GenomeResearch11,1095–1099(2001).
2.Lizardi,P.etal.,Nat.Genet.19,225–232(1998).
3.Estaban,J.A.etal.,J.Biol.Chem.268,2719–2726(1993).

 

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2021-08-24
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1、目标序列靶向测序是一种对感兴趣的基因组区域进行富集测序的研究策略。目标区域测序的主要优势在于可针对特定区域进行测序,有效降低了测序成本,提高了测序深度,能够更为经济有效地研究特定区域的遗传变异。
2 单细胞测序是指单个细胞水平上对基因组进行测序。
3、靶向测序步骤为 样品准备、探针/引物设计、目标序列捕获、文库制备、上机测序、数据分析。
4、单细胞的分离--DNA/RNA的提取和扩增(全基因组扩增和全转录组扩增)---测序以及后续的分析和应用。
相同:使用二代测序
不同:样本处理,文库构建,检测的区域,数据分析流程
看下neb的二代测序试剂盒的试剂盒说明书 上面一般针对这块都会有详细解答的 是在不行也可以找厂家寻求技术支持!
DNA提取试剂盒是根据氯化芐法构建的,能够从样本中提取基因组DNA的试剂盒。氯化苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化,从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化苄的这一特性,将植物样品冻结融解后,再使用Pipet Tip的尖端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比,省去了液氮研磨等烦琐步骤,有利于一次性处理大量样品。而且,本制品经过了改良,热处理时间只需15分钟,使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。
试剂盒提DNA的原理123
孙叔▲豆司312021-07-24
碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法,其原理为:染色体DNA比质粒DNA分子大得多,且染色体DNA为线状分子,而质粒DNA为共价闭合环状分子;当用碱处理DNA溶液时,线状染色体DNA容易发生变性,共价闭环的质粒DNA在回到中性时即恢复其天然构象;变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中,离心去除沉淀后,就可从上清中回收质粒DNA。
目前,市面上质粒提取试剂盒大多数都是采取上述的碱裂解方法,不同之处在于纯化方式。目前比较常用的纯化系统是硅基质吸附材料,其原理为在高盐环境下质粒DNA能够结合到硅基质上,然后用低盐缓冲液或水将质粒DNA从硅基质上洗脱下来。得到的质粒可以用于酶切、PCR、测序、细菌转化、转染等分子生物学实验。
1.bigdye测序反应试剂盒 主要试剂是bigdye mix,内含pe专利四色荧光标记的ddntp和普通dntp,amplitaq dna polymerase fs,反应缓冲液等。
2.pgem-3zf (+) 双链dna对照模板 0.2g/l,试剂盒配套试剂。
3.m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt,3.2μmol/l,即3.2pmol/μl,试剂盒配套试剂。
4.dna测序模板 可以是pcr产物、单链dna和质粒dna等。模板浓度应调整在pcr反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒dna,浓度为0.2g/l,即200ng/μl。
5.引物 需根据所要测定的dna片段设计正向或反向引物,配制成3.2μmol/l,即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物,如m13(-21)引物,t7引物等。
6.灭菌去离子水或三蒸水。
7.0.2ml或和0.5ml的pcr管 盖体分离,pe公司产品。
8.3mol/l 醋酸钠(ph5.2) 称取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸馏水中,冰醋酸调ph至5.2,定容至100ml,高压灭菌后分装。
9.70%乙醇和无水乙醇。
10.naac/乙醇混合液 取37.5ml无水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混匀,室温可保存1年。
11.pop 6测序胶 abi产品。
12.模板抑制试剂(tsr) abi产品。
13.10×电泳缓冲液 abi产品。
14.abi prism 310型全自动dna测序仪。
15.2400型或9600型pcr仪。
16.台式冷冻高速离心机。
17.台式高速离心机或袖珍离心机。向左转|向右转
基于靶向药指征的肿瘤基因检测、二代和三代基因测序的应用。
微生物16S测序解决方案—样品提取篇123
一男一女丶燲掛2017-11-26
离心都要4度离心。 离心管是否需要灭菌看你样品下游应用和整个实验目的。对于你这个似乎是检测肉储藏时间和其上细菌分布的实验,离心管是要灭菌的。根据塑料材质,离心管有可高压灭菌不可高压灭菌。
不可以,测序用的酶和Taq酶是有区别的。
你用来干嘛都不讲,怎么给你推荐试剂盒?

亲子鉴定?

ID,promega.我们实验室主要用的是这两种,由于怕有突变还会备有凯杰的。

如果测序的话,那么就是AB的bigdye吧?

有什么问题我们可以交流。
医学僧jiangjiang的丁香客123
猪八戒他二姨2021-07-23

数据分析的小白一枚,最近开始学习二代测序仪IONTORRENT出来的靶向基因检测位点的数据分析。由于完全没有涉猎过这个领域,会有很多不懂得地方,望大神们不吝赐教!

比如上面这个搜索结果,就是根据一起出来的数据,也就是一个位点的rs号进行检索出来的界面,但是完全不知道如何下手,也不是很清楚具体模块的作用,我能得到什么结果。虽然在网上能看到一些说明,但是仍然一知半解的!

最后,还是想说,大神们快快带我入门吧,非常迫切!跪谢!

BigDye Terminator v3.1简称BDT,是ABI公司的测序专用kit,成分包含了taq酶,标记了大荧光染料的ddNTP等,是类似PCR扩增试剂的Mix,进行的是线性扩增得到碱基的排序。
我想问一下目前有商业化的应用于二代测序平台的试剂盒吗?