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为什么用无缝克隆试剂盒转化以后不长菌_蚂蚁淘商城
为什么用无缝克隆试剂盒转化以后不长菌
2021-08-14
问题描述:

最近用无缝克隆试剂盒构建CRISPR载体完全不长菌,以前都是长菌的啊,而且成功率很高,这是怎么回事?换过别的牌子的无缝克隆试剂盒还是一样不长菌,我好崩溃啊,为什么会这样呢。一样的方法做的,比例也是按说明书上来的,为什么会不长菌呢。求高手指点。

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kangaroo0513
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形成了高级结构。我也遇到过,当时连的是3Flag,就是连不上
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小胖0614
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kangaroo0513形成了高级结构。我也遇到过,当时连的是3Flag,就是连不上原来是这样,后来你怎么解决的呢?我做的是两个片段重组,一般情况下都不会有这种问题,现在真的是好头痛。
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kangaroo0513
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用普通酶切连接搞定的。
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小胖0614
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kangaroo0513用普通酶我试着切过和连接了,但是感觉两个靶标连不上欸,我就怕酶切不开。
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kangaroo0513
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如果两个酶切位点不是紧挨着的话,一般都切的开。
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小胖0614
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kangaroo0513如果两个酶切位点不是紧挨着的话,一般都切的开。这就完了,我其中的一段序列酶切位点就是挨着的,怪不得切不动。我要重新设计引物了。
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