【求助】慢病毒pLenti7.3/V5TOPO表达系统的克隆
2021-08-12
问题描述：
大家好！请问哪位高人利用慢病毒载体做过克隆？我有一些问题请教,急需各位的帮助！我最近在做有关慢病毒表达系统的实验，购买的是Invitrogen 的TOPO克隆试剂盒，将目的基因600bp连在载体pLenti7.3/V5-TOPO载体上，转化后的第二天挑的单克隆，五个克隆中通过菌落PCR鉴定目的片段连上的只有一个克隆，提质粒后做了酶切鉴定，发现载体在LTR没有重组，但测序后发现是反向连接。两周后我重新挑克隆，菌落PCR 后发现目的片段均能扩增出来，但提质粒后酶切电泳后，发现所有我挑的十几个克隆载体的大小与原来不一样，原来是8.9Kb,现在小于4.5Kb，双酶切原来得到三条片段，现在只有一条.....难道全是重组的质粒吗？重组效率这么高吗？
请各位大侠帮忙分析一下原因！！万分感谢！！！
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immuno05
用户
你所用的菌种是stbl系列吗?因为LV载体所含的两段LTR容易在一般宿主菌同源重组而导致丢失.
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genomegao
用户我用的感受态菌种是试剂盒里的，Stb13......
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jiguizhang
用户斑竹是不是慢病毒载体必须要Stb13啊 我用普通的感受态不行吗最近做这个载体转化也没有Stb13这菌 望能给于帮助
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