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Clontech/Yeast two-hybrid media sets/Each/630494
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Clontech/Yeast two-hybrid media sets/Each/630494
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Clontech
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Our yeast two-hybrid media sets contain all of the yeast media pouches you will need for the Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System protocols. The media is sold aliquoted in highly convenient pouches. Simply empty the contents of each pouch into your media flask/bottle, add 0.5 L of dH20, and sterilize. No weighing, combining, or pH adjustment is required. The Yeast Media Set 2 Plus also contains Aureobasidin A and our largest aliquot of X-alpha-Gal, two reagents that are integral to the Matchmaker Gold Protocol.

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上海海科生物技术有限公司在发布的均一化酵母双杂交(酵母单杂交)文库供应信息,浏览与均一化酵母双杂交(酵母单杂交)文库相关的产品或在搜索更多与均一化酵母双杂交(酵母单杂交)文库相关的内容。 查看更多>
Histologic analysis of murine BM is a necessary complement to flow cytometric or in vitro analysis. Techniques to do this are well established in human hematop 查看更多>
侯云德(1929.7.13~)医学病毒学专家,江苏省常州市人,中国工程院院士。因研究仙台病毒方面的突出成就获苏联医学科学博士学位。研究过干扰素和中药黄芪的抗病毒感染作用,在国内首先研制成功临床级人白细胞干扰素,建立人白细胞干扰素基因无性繁殖系,研制成功人α1型基因工程干扰素,并将其... 查看更多>
上海欧易生物医学科技有限公司在发布的酵母双杂交文库筛选-欧易生物供应信息,浏览与酵母双杂交文库筛选-欧易生物相关的产品或在搜索更多与酵母双杂交文库筛选-欧易生物相关的内容。 查看更多>
1、 酵母单杂能不能用mating的方法?不能,因为Y1HGold和Y187都是α型,不能融合生长。2、 细胞质蛋白用哪种方法筛库?可以用核体系也可以用膜体系,最好用膜体系。3、 共转是把AD转到带有BD的Y2HGold还是BD、AD一起转到Y2HGold?都可以,如果是AD转到带有BD的酵母菌用SD-trp的培养基摇菌。4、 筛到的蛋白经测序后,从AAA AAA后翻译的结果有好多都移码?三框文库不是不移码,而是保证您的文库中的每个... 查看更多>
BacterioMatch 双杂交系统:在大肠杆菌中进行蛋白质相互作用分析,简便快速。CytoTrap 双杂交系统:酵母细胞质中检测蛋白相互作用,允许翻译后修饰和筛查转录激活因子/抑制因子HybriZAP 2.1酵母细胞核双杂交系统 :采用l载体制备插入片段比率高,代表性好的cDNA/基因组文库,易于转化成质粒文库用 查看更多>
法国巴黎Hybrigenics公司ULTImate酵母双杂交互作蛋白筛查服务文库目录, 查看更多>
酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列, 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游, 转录激... 查看更多>
酵母整合型质粒是不能再染色体外能够进行自主复制的遗传单位,必须整合到酵母染色体上才能进行复制。... 查看更多>
1)取10ul待测DNA,于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)2) 凝胶用溴化乙锭染色,切掉凝胶四周多余部分,并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A.将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15mi 查看更多>
深圳市伟通生物科技有限公司在发布的酵母双杂交载体系统pGBKT7载体 pGADT7载体 pCL1载体 pGBKT7-53载体 pGADT7-T载体 pGBKT7-Lam载体 pACT2 AD载体 AH109菌株 pSos载体 pMyr载体 pSos MAFB载体供应信息,浏览与酵母双杂交载体系统pGBKT7载体 pGADT7载体 pCL1载体 pGBKT7-53载体 pGADT7-T载体 pGBKT7-Lam载体 pACT2 AD载体 AH109菌株 pSos载体 pMyr载体 pSos MAFB载体相关 查看更多>
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酵母双杂交系统 123
我了个2362017-10-12
酵母双杂交系统能体内测定蛋白质结合作用具高度敏性
主要由于:
①采用高拷贝强启表达载体使杂合蛋白量表达
②信号测定自平衡浓度条件进行 免疫共沉淀等物理达条件需进行洗涤降低信号强度
③杂交蛋白间稳定度激结构域结合结构域结合形转录起始复合物增强者与启DNA结合 三元复合体使其各组结合趋于稳定
④通mRNA产种稳定酶使信号放同 酵母表型 X-Gal及HIS3蛋白表达等检测均敏图" class="ikqb_img_alink">
本人学生狗,要做CDNA文库构建,买了clontech的酵母双杂交系统但是没有中文说明书,**大神给一个中文的说明书

630489MatchmakerGoldYeastTwo-HybridSystemUs.pdf(1780.44k)
酵母双杂交系统123
nothing2021-08-06
需要:酵母双杂交RRS系统
用pGBKT7酵母双杂交系统交换
酵母ah109 ura缺失培养基
  发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激(述Gal4蛋白)激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
  双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型:a接合型α接合型两种单倍体间接合(mating)能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔(lawn)再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率展开
酵母双杂交系统析蛋白-蛋白间相互作用效快速 面应用 仍存些局限性⑴双杂交系统析蛋白间相互作用定位于细胞核内 许蛋白间相互作用依赖于翻译加工糖基化、二硫键形等 些反应核内进行另外些蛋白确折叠功能赖于其非酵母蛋白辅助 限制某些细胞外蛋白细胞膜受体蛋白等研究⑵酵母双杂交系统重要问题假阳性由于某些蛋白本身具激转录功能或酵母表达发挥转录激作用 使DNA结合结构域杂交蛋白特异激结构域情况激转录另外某些蛋白表面含种蛋白质低亲力区域 能与其蛋白形稳定复合物 引起报告基表达 产假阳性结
许研究者双杂交系统进行改进发展例采用假阳性显示析双筛选系统减少假阳性发;发展哺乳物双杂交系统更研究蛋白间相互作用其双筛选系统用二种同报告基(用lacZHIS3)优势vii:⑴ 用同启表达位于酵母二染色体报告基 明显减少假阳性⑵ 通营养型筛选增强筛选能力 尤其适用于较库容量选蛋白较少情况筛选
哺乳物双杂交系统Ⅷ种基水平重建转录功能基础体内析系统种兴趣蛋白与Gal4--DNA结合结构域构融合蛋白另种蛋白与单纯疱疹病毒VP16蛋白激结构域融合蛋白表达表达些融合蛋白载体与报道载体(CAT)共同转染哺乳物细胞系报道质粒含Gal4结合位点游cat基假两融合蛋白相互作用则cat报道基表达水平明显增高用系统证实P53蛋白与T抗原相互作用 酵母双杂交系统相同结且较酵母双杂交系统更快速转染48h内结并且哺乳物细胞能更模仿体内蛋白-蛋白相互作用哺乳物双杂交系统作酵母双杂交系统辅助手段图" class="ikqb_img_alink">
、酵母双杂交系统:酵母双杂交系统前广泛用于蛋白质相互作用组研究种重要其原理靶蛋白诱饵蛋白特异结合诱饵蛋白结合于报道基启启报道基酵母细胞内表达检测报道基表达产物则说明两者间相互作用反则两者间没相互作用种技术微量化、阵列化则用于规模蛋白质间相互作用研究实际工作根据需要发展单杂交系统、三杂交系统反向杂交系统等Angermayr等设计SOS蛋白介导双杂交系统研究膜蛋白功能丰富酵母双杂交系统功能外酵母双杂交系统作用已扩展至蛋白质鉴定
  二、噬菌体展示技术:编码噬菌体外壳蛋白基连接单克隆抗体DNA序列噬菌体表面表达相应单抗再噬菌体柱柱若含目蛋白与相应抗体特异性结合称噬菌体展示技术技术主要用于研究蛋白质间相互作用仅高通量及简便特点具直接基、高选择性筛选复杂混合物、筛选程通适改变条件直接评价相互结合特异性等优点目前用优化噬菌体展示技术已经展示鼠两种特殊细胞系cdna文库并离皮信号传导途径信号
  三、等离共振技术:表面等离共振技术(Surface Plasmon ResonanceSPR)已蛋白质相互作用研究新手段原理利用种纳米级薄膜吸附诱饵蛋白待测蛋白与诱饵蛋白结合薄膜共振性质发改变通检测便知两种蛋白结合情况SPR技术优点需标记物或染料反应程实监控测定快速且安全用于检测蛋白核酸及其物间相互作用
  四、荧光能量转移技术:荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究间距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合定量获取关物体内蛋白质、脂类、DNA RNA 空信息随着绿色荧光蛋白(GFP)发展FRET 荧光显微镜能实测量体细胞内态性质提种定量测量FRET效率及供体与受体间距离简单仅需使用组滤光片测量比值利用供体受体发射谱消除光谱间串扰该简单快速实定量测量FRET 效率供体与受体间距离尤其适用于基于GFP 供体受体
  五、抗体与蛋白质阵列技术:蛋白芯片技术现给蛋白质组研究带新思路蛋白质组研究主要内容研究同理状态蛋白水平量变微型化集化高通量化抗体芯片非研究工具芯片发展快芯片且技术已经益熟些抗体芯片已经向临床应用发展比肿瘤标志物抗体芯片等已经应用再眼各领域
  六、免疫共沉淀技术:免疫共沉淀主要用研究蛋白质与蛋白质相互作用种技术其基本原理细胞裂解液加入抗兴趣蛋白抗体孵育再加入与抗体特异结合结合于Pansobin珠金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)若细胞与兴趣蛋白结合目蛋白形种复合物:目蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|PansobinSPA|Pansobin比较复合物离离经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳复合物四组经Western blotting用抗体检测目蛋白否预测蛋白种目蛋白细胞内与兴趣蛋白结合符合体内实际情况蛋白信度高种两缺陷:两种蛋白质结合能直接结合能第三者间起桥梁作用;二必须实验前预测目蛋白选择检测抗体所若预测确实验结本身具冒险性
  七、pull-down技术:蛋白质相互作用类型牢固型相互作用暂型相互作用两种牢固型相互作用亚基蛋白复合体见通免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western研究Pull-down技术用固相化、已标记饵蛋白或标签蛋白(物素-、PolyHis-或GST-)细胞裂解液钓与相互作用蛋白通Pull-down技术确定已知蛋白与钓蛋白或已纯化相关蛋白间相互作用关系体外传路或翻译体系检测蛋白相互作用关系
酵母双杂交实验知多少?123
求是寻源2021-07-26
哪位老师使用过cytotrypstratagene双杂交酵母系统啊,我在使用这一系统时,其中的cdc25H酵母菌摇菌时总是突变.哪位老师帮我解答一下,万分感谢!!
双杂交系统建立力于真核物调控转录起始程认识细胞起始基转录需要反式转录激参与80代工作表明转录激结构组件式(modular), 即些往往由两或两相互独立结构域构, 其DNA结合结构域(DNA binding domain简称BD)转录激结构域(activation domain简称AD)转录激发挥功能所必需前者识别DNA特异序列并使转录激结构域定位于所调节基游转录激结构域同转录复合体其作用启所调节基转录两结构域其连接区适部位打 仍具各自功能且同两结构域重建发挥转录激作用酵母双杂交系统利用杂交基通激报道基表达探测蛋白-蛋白相互作用单独BD虽能启结合能激转录同转录激BDAD形杂合蛋白仍具激转录功能酵母细胞Gal4蛋白BD与肠杆菌酸性激结构域B42融合杂合蛋白仍结合Gal4结合位点并激转录主要二类载体: a 含DNA -binding domain载体; b 含DNA-activating domain载体般编码蛋白基融合明确转录调控DNA-结合结构域(GAL4-bd LexA-bd); 另蛋白基融合转录激结构域(GAL4-ad VP16)述二类载体构建融合基 测试蛋白基与结构域基必须阅读框内融合融合基报告株表达 其表达产物定位于核内才能驱报告基转录例GAL4-bd具核定位序列(nuclear-localization sequence) GAL4-ad没 GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆自SV40T-抗原段序列作核定位序列目前研究用binding-domain基:GAL4(1-147); LexA (E coli转录抑制)DNA-bd编码序列用activating-domain基:GAL4(768-881)疱疹病毒VP16编码序列等
双杂交系统另重要元件报道株报道株指经改造、含报道基(reporter gene)重组质粒宿主细胞用酵母细胞 酵母细胞作报道株酵母双杂交系统具许优点: 〈1〉 易于转化、便于收扩增质粒〈2〉具直接进行选择标记基特征性报道基〈3〉酵母内源性蛋白易同源于哺乳物蛋白结合激结构域融合基转入表达结合结构域融合基酵母细胞系 蛋白间作用使转录重建导致相邻报道基表达(lacZ) 析蛋白间结合作用
酵母双杂交系统能体内测定蛋白质结合作用 具高度敏性主要由于:①采用高拷贝强启表达载体使杂合蛋白量表达②信号测定自平衡浓度条件进行 免疫共沉淀等物理达条件需进行洗涤降低信号强度③杂交蛋白间稳定度激结构域结合结构域结合形转录起始复合物增强 者与启DNA结合 三元复合体使其各组结合趋于稳定④通mRNA产种稳定酶使信号放同 酵母表型 X-Gal及HIS3蛋白表达等检测均敏图" class="ikqb_img_alink">
酵母双杂交系统应用遇问题假阳性较二转化效率偏低所谓假阳性:待研究两蛋白间没发相互作用情况报告基激主要原由于BD融合诱饵蛋白单独激作用或者种融合蛋白激作用外蛋白激另外AD融合靶蛋白DNA特异性结合则单独激报告基表达排除假阳性需要作严格照试验应诱饵靶蛋白别作单独激报告基鉴定目前几公司推酵母双杂系统都采用报告基且每报告基游调控区各相同减少量假阳性另外报告基通整合染色体使基表达水平稳定消除由于质粒拷贝数变化引起基表达水平波造假阳性
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