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克隆启动子的方法实验方法

来自 : mayitao

我要做酵母双杂交，有战友在做吗，交流一下，我的QQ446357706，现在我先把我的资料给大家看看吧，我自己写的程序
酵母培养：
YPD:蛋白胨20g,酵母提取物10g,琼脂20g
葡萄糖20g或灭菌后加入葡萄糖（40%50ml；过滤除菌/121℃,15min）,使终浓度为2%.
YPDA:YPD+adeninhemisulfate(0.2%15ml;对热不稳定，不能高温高压灭菌)，使终浓度为0.003%.
SD/:（SD/完全，SD/-./././.）
无氨基酸酵母氮源6.7g,琼脂20g,
缺相应氨基酸的培养基所要求的质量（-Ade/-His/-Leu/-TrpDOSupplement:0.6g;
-Leu/-TrpDOSupplement:0.64g;
DH2O850ml，-LeuDOSupplement:0.69g）
超净台内加入所要补充的氨基酸（Ade，His，Leu，Trip）10×Dropoutsolution100ml,
葡萄糖20g或灭菌后加入葡萄糖（40%50ml；过滤除菌/100~110℃,30min）,使终浓度为2%.
成分  10×贮存液浓度（g/L;mg/100ml）  1L培养基所需贮存液体积(ml)
腺嘌呤硫酸盐（adeninehemisulfatesalt）  0.2;20  100ml
注：
1．高压灭菌，4℃保存一年
2．丝氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，酵母可内源性合成。
但AH109在-Met上时，应加入天冬氨酸（10×天冬氨酸，1000mg/L
L-精氨酸LiCL（ArgHCL）  0.2;20
L-组氨酸HCL（HisHCLmonohydrate）  0.2;20
L-异亮氨酸（Isolwucine）  0.3;30
L-亮氨酸（Leucine）  1;100
L-赖氨酸HCL（LysineHCL）  0.3;30
L-甲硫氨酸（Methionine）  0.2;20
L-苯丙氨酸（Phenylalanine）  0.5;50
L-苏氨酸（Threonine）  2;200
L-色氨酸（Tryptophan）  0.2;20
L-酪氨酸（Tyrosine）  0.3;30
尿嘧啶（Uracil）  0.2;20
L-缬氨酸（Valine）  1.5;150

还有一些资料我总结的大家看看

编辑：wudihero007

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发布于： 2019-03-20 阅读（318）

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