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2021-07-30
1.技术原理及背景介绍随着分子生物学研究尤其是人类基因组计划的迅速发展，为适应对众多基因或蛋白进行功能研究的发展趋势，已出现了很多新技术。其中酵母双杂交技术以其简便，灵敏，高效以及能反映不同蛋白质之间在活细胞内的相互作用等特点在基因功能的研究中得到了广泛的应用。 酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的认识。酵母转录因子GAL4含两个结构域：DNA结合功能域和转录激活结构域，前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构... 查看更多
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2021-09-18
BacterioMatch 双杂交系统：在大肠杆菌中进行蛋白质相互作用分析,简便快速。CytoTrap 双杂交系统：酵母细胞质中检测蛋白相互作用,允许翻译后修饰和筛查转录激活因子/抑制因子HybriZAP 2.1酵母细胞核双杂交系统 ：采用l载体制备插入片段比率高，代表性好的cDNA/基因组文库，易于转化成质粒文库用 查看更多
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2021-07-21
年初，27 岁女学霸陆盈盈成为浙大博导一度成为热点，让大众开始关注 80 后博导。不理不知道，一理吓一跳。 80 后的博士生导师都开始登上科研舞台，成为中坚力量。让我们阅完兵，一起来看看那些 80 后博导。陆盈盈个人简介陆盈盈博士，女，特聘研究员。2010 年 6 月毕业于浙江大学化学工程与生物工程学院，获得学士学位，2014 年 6 月获得美国康奈尔大学（Cornell University） 查看更多
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2021-07-29
Nanocs Nanolight Neogen Nexcolm Niomech Sanbio Ricca Rieke Roboz Rossix SAI oetltd OlChemIm Organotechnie Orgentec Panagene PANATec... 查看更多
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2021-07-16
酵母双杂交服务目前天津赛尔生物可提供适用于浆蛋白、核蛋白及膜蛋白酵母双杂交实验服务的两套系统，可以为客户免费提供配套的人胚脑和人胚肺文库，省去了文库构建的巨大费用，全程服务都会由本公司的酵母双杂交技术专家操作，每位技术专家均有着丰富的酵母双杂交技术服务的经验，可以很好的帮助客户分析并解决在实验过程中遇到的各种问题。 1.技术原理及背景介绍随着分子生物学研究尤其是人类基因组计划的迅速发展，为适应对众多基因或蛋白进行功能研究... 查看更多
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2019-03-21
上海玉华生命科技发展有限公司在发布的酵母双杂交文库筛选供应信息，浏览与酵母双杂交文库筛选相关的产品或在搜索更多与酵母双杂交文库筛选相关的内容。 查看更多
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2021-08-09
酵母双杂交系统载体杂交系统是由深圳市伟通生物公司代理或销售的Stratagene品牌的试剂，产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的酵母双杂交系统载体杂交系统试剂销售服务商之一，在深圳等地方销售酵母双杂交系统载体杂交系统试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业酵母双杂交系统载体杂交系统仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的酵母双杂交系统载体杂交系统产品 查看更多
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2021-08-03
酵母整合型质粒是不能再染色体外能够进行自主复制的遗传单位，必须整合到酵母染色体上才能进行复制。... 查看更多
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酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 查看更多
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2019-04-25
通过DUALmembrane酵母双杂交系统筛选APP互作蛋白 来源： 查看手机网址扫一扫!扫一扫! ... 查看更多
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2021-08-17
· Yeast Two-Hybrid System (Finley Lab)This is one of the most comprehensive and detailed guide to yeast two-hybrid system te 查看更多
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2021-09-10
酵母双杂交系统酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够 查看更多
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酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有_问答详情_...123
元大师2162017-10-02
酵母双杂交营养缺陷培养基菌落提质粒
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率
怎样查一个蛋白的受体123
红颜17272017-10-02
、酵母双杂交系统：酵母双杂交系统前广泛用于蛋白质相互作用组研究种重要其原理靶蛋白诱饵蛋白特异结合诱饵蛋白结合于报道基启启报道基酵母细胞内表达检测报道基表达产物则说明两者间相互作用反则两者间没相互作用种技术微量化、阵列化则用于规模蛋白质间相互作用研究实际工作根据需要发展单杂交系统、三杂交系统反向杂交系统等Angermayr等设计SOS蛋白介导双杂交系统研究膜蛋白功能丰富酵母双杂交系统功能外酵母双杂交系统作用已扩展至蛋白质鉴定
二、噬菌体展示技术：编码噬菌体外壳蛋白基连接单克隆抗体DNA序列噬菌体表面表达相应单抗再噬菌体柱柱若含目蛋白与相应抗体特异性结合称噬菌体展示技术技术主要用于研究蛋白质间相互作用仅高通量及简便特点具直接基、高选择性筛选复杂混合物、筛选程通适改变条件直接评价相互结合特异性等优点目前用优化噬菌体展示技术已经展示鼠两种特殊细胞系cdna文库并离皮信号传导途径信号
三、等离共振技术：表面等离共振技术(Surface Plasmon ResonanceSPR)已蛋白质相互作用研究新手段原理利用种纳米级薄膜吸附诱饵蛋白待测蛋白与诱饵蛋白结合薄膜共振性质发改变通检测便知两种蛋白结合情况SPR技术优点需标记物或染料反应程实监控测定快速且安全用于检测蛋白核酸及其物间相互作用
四、荧光能量转移技术：荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究间距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合定量获取关物体内蛋白质、脂类、DNA RNA 空信息随着绿色荧光蛋白(GFP)发展FRET 荧光显微镜能实测量体细胞内态性质提种定量测量FRET效率及供体与受体间距离简单仅需使用组滤光片测量比值利用供体受体发射谱消除光谱间串扰该简单快速实定量测量FRET 效率供体与受体间距离尤其适用于基于GFP 供体受体
五、抗体与蛋白质阵列技术：蛋白芯片技术现给蛋白质组研究带新思路蛋白质组研究主要内容研究同理状态蛋白水平量变微型化集化高通量化抗体芯片非研究工具芯片发展快芯片且技术已经益熟些抗体芯片已经向临床应用发展比肿瘤标志物抗体芯片等已经应用再眼各领域
六、免疫共沉淀技术：免疫共沉淀主要用研究蛋白质与蛋白质相互作用种技术其基本原理细胞裂解液加入抗兴趣蛋白抗体孵育再加入与抗体特异结合结合于Pansobin珠金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)若细胞与兴趣蛋白结合目蛋白形种复合物：目蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|PansobinSPA|Pansobin比较复合物离离经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳复合物四组经Western blotting用抗体检测目蛋白否预测蛋白种目蛋白细胞内与兴趣蛋白结合符合体内实际情况蛋白信度高种两缺陷：两种蛋白质结合能直接结合能第三者间起桥梁作用;二必须实验前预测目蛋白选择检测抗体所若预测确实验结本身具冒险性
七、pull-down技术：蛋白质相互作用类型牢固型相互作用暂型相互作用两种牢固型相互作用亚基蛋白复合体见通免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western研究Pull-down技术用固相化、已标记饵蛋白或标签蛋白(物素-、PolyHis-或GST-)细胞裂解液钓与相互作用蛋白通Pull-down技术确定已知蛋白与钓蛋白或已纯化相关蛋白间相互作用关系体外传路或翻译体系检测蛋白相互作用关系
二、噬菌体展示技术：编码噬菌体外壳蛋白基连接单克隆抗体DNA序列噬菌体表面表达相应单抗再噬菌体柱柱若含目蛋白与相应抗体特异性结合称噬菌体展示技术技术主要用于研究蛋白质间相互作用仅高通量及简便特点具直接基、高选择性筛选复杂混合物、筛选程通适改变条件直接评价相互结合特异性等优点目前用优化噬菌体展示技术已经展示鼠两种特殊细胞系cdna文库并离皮信号传导途径信号
三、等离共振技术：表面等离共振技术(Surface Plasmon ResonanceSPR)已蛋白质相互作用研究新手段原理利用种纳米级薄膜吸附诱饵蛋白待测蛋白与诱饵蛋白结合薄膜共振性质发改变通检测便知两种蛋白结合情况SPR技术优点需标记物或染料反应程实监控测定快速且安全用于检测蛋白核酸及其物间相互作用
四、荧光能量转移技术：荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究间距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合定量获取关物体内蛋白质、脂类、DNA RNA 空信息随着绿色荧光蛋白(GFP)发展FRET 荧光显微镜能实测量体细胞内态性质提种定量测量FRET效率及供体与受体间距离简单仅需使用组滤光片测量比值利用供体受体发射谱消除光谱间串扰该简单快速实定量测量FRET 效率供体与受体间距离尤其适用于基于GFP 供体受体
五、抗体与蛋白质阵列技术：蛋白芯片技术现给蛋白质组研究带新思路蛋白质组研究主要内容研究同理状态蛋白水平量变微型化集化高通量化抗体芯片非研究工具芯片发展快芯片且技术已经益熟些抗体芯片已经向临床应用发展比肿瘤标志物抗体芯片等已经应用再眼各领域
六、免疫共沉淀技术：免疫共沉淀主要用研究蛋白质与蛋白质相互作用种技术其基本原理细胞裂解液加入抗兴趣蛋白抗体孵育再加入与抗体特异结合结合于Pansobin珠金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)若细胞与兴趣蛋白结合目蛋白形种复合物：目蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|PansobinSPA|Pansobin比较复合物离离经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳复合物四组经Western blotting用抗体检测目蛋白否预测蛋白种目蛋白细胞内与兴趣蛋白结合符合体内实际情况蛋白信度高种两缺陷：两种蛋白质结合能直接结合能第三者间起桥梁作用;二必须实验前预测目蛋白选择检测抗体所若预测确实验结本身具冒险性
七、pull-down技术：蛋白质相互作用类型牢固型相互作用暂型相互作用两种牢固型相互作用亚基蛋白复合体见通免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western研究Pull-down技术用固相化、已标记饵蛋白或标签蛋白(物素-、PolyHis-或GST-)细胞裂解液钓与相互作用蛋白通Pull-down技术确定已知蛋白与钓蛋白或已纯化相关蛋白间相互作用关系体外传路或翻译体系检测蛋白相互作用关系
酵母双杂实验操作手册和注意事项123
汉字La2017-10-01
注意事项
（1）酵母双杂交照设定 规酵母双杂交操作般设定阳性照、阴性照及显色系统照三种照MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统例：
阳性照：pGADT7-T + pGBKT7-53其T蛋白53蛋白已经明确酵母细胞内能够发结合并启报告基表达两种蛋白
阴性照：pGADT7-T + pGBKT7-lam其已经明确T蛋白lam蛋白酵母细胞内能发结合 系统显色照pGADT7-Pcl1该表达质粒转入酵母细胞能引起-半乳糖苷酶-半乳糖苷酶泌检测显色系统否问题
（2）假阳性现象种原能造假阳性结见三种：
筛文库蛋白自身具转录性能够启报告基表达——种情况需要筛候选蛋白进行自激验证
酵母细胞内能同含止种文库蛋白其种文库蛋白与诱饵蛋白相互及结合
种情况需要阳性克隆再划板2~3确保每酵母克隆含种文库蛋白诱饵蛋白；另外划板数宜否则现蛋白表达质粒丢失情况 其些明原造假阳性—种情况需要筛候选文库质粒表达诱饵蛋白质粒重新共转入酵母细胞或者通酵母杂交式重新验证必要pGADT7-cDNA质粒与pGBKT7-bait质粒载体调构建pGADT7-bait与pGBKT7-cDNA并重新酵母细胞验证真阳性结合调能酵母细胞做阳性结
（3）见问题及参考案 转化效率低—尽量使用新鲜培养基及新鲜、且直径2~3 mm左右酵母克隆确保酵母力；用于转化质粒使用前进行乙醇沉淀提高质粒纯度浓度
杂交效率偏低—能由于表达融合蛋白酵母细胞毒性某些情况液体培养基酵母换琼脂糖固体培养板比较种情况采用共转化进行试验；或者单转酵母克隆别铺5块10 mm培养板待克隆刮取所克隆于5 mL 0.5×YPDA重悬再按照规杂交操作步骤进行操作 背景高—使用HIS3作报告基由于HIS3基具定程度泄漏表达能现背景高情况使用适量HIS3蛋白竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole）降低背景；或者再增加种更加严格报告基筛选Ade
诱饵蛋白具自激现象——采用克隆突变产自激段氨基酸序列敲除或突变种能破坏两蛋白间相互作用
（1）酵母双杂交照设定 规酵母双杂交操作般设定阳性照、阴性照及显色系统照三种照MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统例：
阳性照：pGADT7-T + pGBKT7-53其T蛋白53蛋白已经明确酵母细胞内能够发结合并启报告基表达两种蛋白
阴性照：pGADT7-T + pGBKT7-lam其已经明确T蛋白lam蛋白酵母细胞内能发结合 系统显色照pGADT7-Pcl1该表达质粒转入酵母细胞能引起-半乳糖苷酶-半乳糖苷酶泌检测显色系统否问题
（2）假阳性现象种原能造假阳性结见三种：
筛文库蛋白自身具转录性能够启报告基表达——种情况需要筛候选蛋白进行自激验证
酵母细胞内能同含止种文库蛋白其种文库蛋白与诱饵蛋白相互及结合
种情况需要阳性克隆再划板2~3确保每酵母克隆含种文库蛋白诱饵蛋白；另外划板数宜否则现蛋白表达质粒丢失情况 其些明原造假阳性—种情况需要筛候选文库质粒表达诱饵蛋白质粒重新共转入酵母细胞或者通酵母杂交式重新验证必要pGADT7-cDNA质粒与pGBKT7-bait质粒载体调构建pGADT7-bait与pGBKT7-cDNA并重新酵母细胞验证真阳性结合调能酵母细胞做阳性结
（3）见问题及参考案 转化效率低—尽量使用新鲜培养基及新鲜、且直径2~3 mm左右酵母克隆确保酵母力；用于转化质粒使用前进行乙醇沉淀提高质粒纯度浓度
杂交效率偏低—能由于表达融合蛋白酵母细胞毒性某些情况液体培养基酵母换琼脂糖固体培养板比较种情况采用共转化进行试验；或者单转酵母克隆别铺5块10 mm培养板待克隆刮取所克隆于5 mL 0.5×YPDA重悬再按照规杂交操作步骤进行操作 背景高—使用HIS3作报告基由于HIS3基具定程度泄漏表达能现背景高情况使用适量HIS3蛋白竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole）降低背景；或者再增加种更加严格报告基筛选Ade
诱饵蛋白具自激现象——采用克隆突变产自激段氨基酸序列敲除或突变种能破坏两蛋白间相互作用
怎样用生化手段证明一个蛋白是受体行业问答123
白诺大好人9302017-10-02
、酵母双杂交系统：酵母双杂交系统前广泛用于蛋白质相互作用组研究种重要其原理靶蛋白诱饵蛋白特异结合诱饵蛋白结合于报道基启启报道基酵母细胞内表达检测报道基表达产物则说明两者间相互作用反则两者间没相互作用种技术微量化、阵列化则用于规模蛋白质间相互作用研究实际工作根据需要发展单杂交系统、三杂交系统反向杂交系统等Angermayr等设计SOS蛋白介导双杂交系统研究膜蛋白功能丰富酵母双杂交系统功能外酵母双杂交系统作用已扩展至蛋白质鉴定
二、噬菌体展示技术：编码噬菌体外壳蛋白基连接单克隆抗体DNA序列噬菌体表面表达相应单抗再噬菌体柱柱若含目蛋白与相应抗体特异性结合称噬菌体展示技术技术主要用于研究蛋白质间相互作用仅高通量及简便特点具直接基、高选择性筛选复杂混合物、筛选程通适改变条件直接评价相互结合特异性等优点目前用优化噬菌体展示技术已经展示鼠两种特殊细胞系cdna文库并离皮信号传导途径信号
三、等离共振技术：表面等离共振技术(Surface Plasmon ResonanceSPR)已蛋白质相互作用研究新手段原理利用种纳米级薄膜吸附诱饵蛋白待测蛋白与诱饵蛋白结合薄膜共振性质发改变通检测便知两种蛋白结合情况SPR技术优点需标记物或染料反应程实监控测定快速且安全用于检测蛋白核酸及其物间相互作用
四、荧光能量转移技术：荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究间距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合定量获取关物体内蛋白质、脂类、DNA RNA 空信息随着绿色荧光蛋白(GFP)发展FRET 荧光显微镜能实测量体细胞内态性质提种定量测量FRET效率及供体与受体间距离简单仅需使用组滤光片测量比值利用供体受体发射谱消除光谱间串扰该简单快速实定量测量FRET 效率供体与受体间距离尤其适用于基于GFP 供体受体
五、抗体与蛋白质阵列技术：蛋白芯片技术现给蛋白质组研究带新思路蛋白质组研究主要内容研究同理状态蛋白水平量变微型化集化高通量化抗体芯片非研究工具芯片发展快芯片且技术已经益熟些抗体芯片已经向临床应用发展比肿瘤标志物抗体芯片等已经应用再眼各领域
六、免疫共沉淀技术：免疫共沉淀主要用研究蛋白质与蛋白质相互作用种技术其基本原理细胞裂解液加入抗兴趣蛋白抗体孵育再加入与抗体特异结合结合于Pansobin珠金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)若细胞与兴趣蛋白结合目蛋白形种复合物：目蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|PansobinSPA|Pansobin比较复合物离离经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳复合物四组经Western blotting用抗体检测目蛋白否预测蛋白种目蛋白细胞内与兴趣蛋白结合符合体内实际情况蛋白信度高种两缺陷：两种蛋白质结合能直接结合能第三者间起桥梁作用;二必须实验前预测目蛋白选择检测抗体所若预测确实验结本身具冒险性
七、pull-down技术：蛋白质相互作用类型牢固型相互作用暂型相互作用两种牢固型相互作用亚基蛋白复合体见通免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western研究Pull-down技术用固相化、已标记饵蛋白或标签蛋白(物素-、PolyHis-或GST-)细胞裂解液钓与相互作用蛋白通Pull-down技术确定已知蛋白与钓蛋白或已纯化相关蛋白间相互作用关系体外传路或翻译体系检测蛋白相互作用关系
二、噬菌体展示技术：编码噬菌体外壳蛋白基连接单克隆抗体DNA序列噬菌体表面表达相应单抗再噬菌体柱柱若含目蛋白与相应抗体特异性结合称噬菌体展示技术技术主要用于研究蛋白质间相互作用仅高通量及简便特点具直接基、高选择性筛选复杂混合物、筛选程通适改变条件直接评价相互结合特异性等优点目前用优化噬菌体展示技术已经展示鼠两种特殊细胞系cdna文库并离皮信号传导途径信号
三、等离共振技术：表面等离共振技术(Surface Plasmon ResonanceSPR)已蛋白质相互作用研究新手段原理利用种纳米级薄膜吸附诱饵蛋白待测蛋白与诱饵蛋白结合薄膜共振性质发改变通检测便知两种蛋白结合情况SPR技术优点需标记物或染料反应程实监控测定快速且安全用于检测蛋白核酸及其物间相互作用
四、荧光能量转移技术：荧光共振能量转移(FRET )广泛用于研究间距离及其相互作用; 与荧光显微镜结合定量获取关物体内蛋白质、脂类、DNA RNA 空信息随着绿色荧光蛋白(GFP)发展FRET 荧光显微镜能实测量体细胞内态性质提种定量测量FRET效率及供体与受体间距离简单仅需使用组滤光片测量比值利用供体受体发射谱消除光谱间串扰该简单快速实定量测量FRET 效率供体与受体间距离尤其适用于基于GFP 供体受体
五、抗体与蛋白质阵列技术：蛋白芯片技术现给蛋白质组研究带新思路蛋白质组研究主要内容研究同理状态蛋白水平量变微型化集化高通量化抗体芯片非研究工具芯片发展快芯片且技术已经益熟些抗体芯片已经向临床应用发展比肿瘤标志物抗体芯片等已经应用再眼各领域
六、免疫共沉淀技术：免疫共沉淀主要用研究蛋白质与蛋白质相互作用种技术其基本原理细胞裂解液加入抗兴趣蛋白抗体孵育再加入与抗体特异结合结合于Pansobin珠金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)若细胞与兴趣蛋白结合目蛋白形种复合物：目蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—SPA|PansobinSPA|Pansobin比较复合物离离经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳复合物四组经Western blotting用抗体检测目蛋白否预测蛋白种目蛋白细胞内与兴趣蛋白结合符合体内实际情况蛋白信度高种两缺陷：两种蛋白质结合能直接结合能第三者间起桥梁作用;二必须实验前预测目蛋白选择检测抗体所若预测确实验结本身具冒险性
七、pull-down技术：蛋白质相互作用类型牢固型相互作用暂型相互作用两种牢固型相互作用亚基蛋白复合体见通免疫共沉淀(Co-IP) 、Pull-down技术或Far-western研究Pull-down技术用固相化、已标记饵蛋白或标签蛋白(物素-、PolyHis-或GST-)细胞裂解液钓与相互作用蛋白通Pull-down技术确定已知蛋白与钓蛋白或已纯化相关蛋白间相互作用关系体外传路或翻译体系检测蛋白相互作用关系
【图文】酵母双杂交系统技术介绍123
bitebo2021-08-07
希望对从事相关科研工作的朋友有所帮助!
THEGFPTWO--HHYBRIDYBRIDSYSTEM.pdf(126.79k)
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clontech公司酵母双杂交试剂盒说明手册123
为爱痴狂74112021-07-29
主要利用两特点：（1）转录具DNA结合结构域即BD；（2）转录具转录激结构域即AD
酵母双杂交系统的原理及123
终极至尊粉7362021-07-30
酵母双杂交系统利用杂交基通激报道基表达探测蛋白－蛋白相互作用主要二类载体: a 含DNA -binding domain载体; b 含DNA-activating domain载体述二类载体构建融合基 测试蛋白基与结构域基必须阅读框内融合融合基报告株表达其表达产物定位于核内才能驱报告基转录例GAL4-bd具核定位序列(nuclear-localization sequence) GAL4-ad没GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆自SV40T-抗原段序列作核定位序列图" class="ikqb_img_alink">
酵母选择营养缺陷培养基SD培养基SCDropout/SCUra培养基酵母营养缺 ...123
XD54EN2017-10-02
酵母ah109 ura缺失培养基
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率展开
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率展开
酵母双杂交系统123
nothing2021-08-06
需要：酵母双杂交RRS系统
用pGBKT7酵母双杂交系统交换
用pGBKT7酵母双杂交系统交换
求助分裂泛素酵母双杂载体SplitUbiquitin Based Membrane Yeast...123
夏忻好萌48732017-10-02
酵母双杂交系统应用遇问题假阳性较二转化效率偏低所谓假阳性：待研究两蛋白间没发相互作用情况报告基激主要原由于BD融合诱饵蛋白单独激作用或者种融合蛋白激作用外蛋白激另外AD融合靶蛋白DNA特异性结合则单独激报告基表达排除假阳性需要作严格照试验应诱饵靶蛋白别作单独激报告基鉴定目前几公司推酵母双杂系统都采用报告基且每报告基游调控区各相同减少量假阳性另外报告基通整合染色体使基表达水平稳定消除由于质粒拷贝数变化引起基表达水平波造假阳性
酵母双杂交实验知多少?123
求是寻源2021-07-26
哪位老师使用过cytotrypstratagene双杂交酵母系统啊，我在使用这一系统时，其中的cdc25H酵母菌摇菌时总是突变．哪位老师帮我解答一下，万分感谢！！
真核生物膜蛋白的互作蛋白用酵母双杂交合适吗？_答魔科研123
东城大爷N72021-08-19
酵母双杂交系统应用遇问题假阳性较二转化效率偏低所谓假阳性：待研究两蛋白间没发相互作用情况报告基激主要原由于BD融合诱饵蛋白单独激作用或者种融合蛋白激作用外蛋白激另外AD融合靶蛋白DNA特异性结合则单独激报告基表达排除假阳性需要作严格照试验应诱饵靶蛋白别作单独激报告基鉴定目前几公司推酵母双杂系统都采用报告基且每报告基游调控区各相同减少量假阳性另外报告基通整合染色体使基表达水平稳定消除由于质粒拷贝数变化引起基表达水平波造假阳性即使根据严格照实验证明确实发蛋白间相互作用应面进行析：
（1）种相互作用否细胞内自发即蛋白细胞命否同间表达且定位同区域
（2）某些蛋白依赖于遍蛋白蛋白酶解途径员具普遍蛋白间相互作用能力
（3）些实际没任何相互作用相同模体（motif）两亲a-螺旋蛋白质间发相互作用十酵母双杂交技术直消除假阳性面断改进并且已取较效〔23〕
酵母双杂交应用遇假阴性现象所谓假阴性即两蛋白本应发相互作用报告基表达或表达程度甚低至于检测〔4〕造假阴性原主要两 面：融合蛋白表达细胞毒性应该选择敏性低菌株或拷贝数低载体二蛋白间相互作用较弱应选择高敏菌株及拷贝载体目前假阴性现象虽实验主要问题应予重视
（1）种相互作用否细胞内自发即蛋白细胞命否同间表达且定位同区域
（2）某些蛋白依赖于遍蛋白蛋白酶解途径员具普遍蛋白间相互作用能力
（3）些实际没任何相互作用相同模体（motif）两亲a-螺旋蛋白质间发相互作用十酵母双杂交技术直消除假阳性面断改进并且已取较效〔23〕
酵母双杂交应用遇假阴性现象所谓假阴性即两蛋白本应发相互作用报告基表达或表达程度甚低至于检测〔4〕造假阴性原主要两 面：融合蛋白表达细胞毒性应该选择敏性低菌株或拷贝数低载体二蛋白间相互作用较弱应选择高敏菌株及拷贝载体目前假阴性现象虽实验主要问题应予重视
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