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NEB/BioLux® Cypridina Luciferase Assay Kit/E3309S/1,000 assays
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Description:
TheBioLuxCypridinaLuciferaseAssayKitcontainsthereagentsnecessaryforassayingCypridinaLuciferaseactivity.CypridinaisanewsecretedluciferasereporterfromtheostracodCypridinanoctiluca.ThisluciferasedoesnotrequireATPandcatalyzestheoxidationofitsluciferinsubstrateinaphotochemicalreaction(1,2)(Figure1).ThesubstrateforCypridinaisdifferentthancoelenterazine,whichisthecommonsubstrateofothermarineluciferasesincludingRenillaandGaussia.PropertiesofCypridinaLuciferase:
CypridinaLuciferaseissecretedfromcellsbyvirtueofitsnaturalsignalpeptideanditsluminescencecanbemeasuredfromthesupernatantoftransfectedcells.Therefore,celllysisisnotnecessary(Figure2).
SecretedCLucisaverystableprotein.Becauseofthisproperty,theactivitymeasuredfromthesupernatantreflectstheamountofproteinaccumulateduptothetimeofsampling.Multiplesamplescanthereforebeobtainedfromthesametransfectedcells(Figure2).
TheCLucassayisverysensitive,allowingdetectionofverysmallamountsofCypridinaLuciferaseactivity(Figure3).
SecretedCLucisthermallystableat55°C(Figure4A),whichisthetypicalinactivationtemperatureofmostviruses.SecretedCLucremainsactiveinthepresenceofβ-mercaptoethanol,whichiscommonlypresentinthecompleteculturemediumofmouseEScells(Figure4B).
AlthoughthelightreactioncatalyzedbyCypridinahasaninitialemissionhalf-lifeofapproximately5minutes,lightproductioncontinuestodecayslowly,andisreADIlydetectable25minutesaftersubstrateaddition(Figure5).
The0.5mlBioLuxCypridina LuciferaseSubstrateSolventmustbecompletelythawedanddilutedwithabsoluteethanol(notincluded)beforeusingittomakethe100Xsubstratesolution(pleaserefertothesectionofReconstitutionofBioLuxCypridinaLuciferaseSubstrate).
Supernatantsoftransfectedcellswerecollectedandmediumwasreplacedeachdayfor4days.Thesesupernatantswerestoredat-20°Cuntilthelastsampleswereobtained.RelativeLightUnits,RLU.
TheCLucactivitywasassayedfrom10-foldserialdilutionsofthesupernatantfromastableCLuc-expressingcell line.
(A)SupernatantobtainedfromstableCLuc-expressingcellswasincubatedat55°Cor95°Cfor30minutesandallowedtocooltoroomtemperature(25°C).Five-foldserialdilutionsofsupernatantwereassayedforCLucactivity.Thecontrolisthesupernatantoftheparentalcellsfromwhichthestablecelllinewascreated.(B)SupernatantsfromstableCLuc-expressingcells,growninmediumwithorwithoutβ-mercaptoethanol,wereincubatedat37°Candassayedeachdayfor7days.
TheCypridinaLuciferasekineticassaywasperformedwiththesupernatantfromHeLacellstransiently
transfectedwithaCLuc-expressingvector.Theassaysolutionwaspreparedandincubatedatroom
temperaturefor30minutesbeforeuse.
TheCLucactivitywasmeasuredfrom20μlofsupernatant(from500μltotalvolume)andfrom20μlofcelllysate(100μltotallysatevolume)ofastableCLuc-expressingcellline.
KitComponents
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| BioLuxClucAssayBuffer | 1X | |
| BioLuxClucSubstrateSolvent | ||
| lyophilizedBioLuxClucSubstrate |
Notes:
StoretheBioLuxCypridinaLuciferaseAssayBuffer(1X)at-20°Cforupto2years.TheBioLuxCypridinaLuciferaseAssayBuffer(1X),thereconstitutedCLucsubstrate(100Xsolution)andtheCLucassaysolutionmustbeprotectedfromlight.TheCLucassaysolutionshouldbefreshlypreparedandincubatedatroomtemperaturefor30minutes(protectfromlight)beforeuse.Thelinearrangeoftheluminometermustbeestablished.ThiscanbeeasilydonebyassayingserialdilutionsofaCLuccontainingsample(Figure3),suchastheculturemediumofCLuc-expressingcells.Inaddition,theassaysolutionitselfaswellastheconditionedmedium(culturemediumfromuntransfectedcells)shouldbeincludedtoestablishthebackgroundintheassay.Ifexcessactivityfortheinstrumentrangeisfound,thesampleshouldbedilutedineitherPBSor10%serum-containingmedium.Theintegrationtimecanalsobereduced,e.g.2secondsinsteadof5seconds.Thepresenceofserum,i.e.culturemedium,typicallyincreasesthebackgroundsignalintheassay.Forexample,theCLucassaysolutionaloneshows101–102RLU;theCLucassaysolutionin10%FBS-containingmediumresultsin102–104RLU,dependingonthetypeofmediumused.Therecommendedintegrationtimefortheluminescencemeasurementis2–10seconds.Itisimportanttokeeptheintegrationtimeconstant,inordertoobtainconsistentresults.BioLuxCypridinaLuciferaseAssayBuffer(1X)andSubstrate(lyophilizedpowder)mustalwaysbeprotectedfromlight.BioLuxCypridinaLuciferaseSubstrateissuppliedinlyophilizedformtoensurelongshelflifeandmaximumstability.蚂蚁淘电商平台
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2019-03-21
上海玉华生命科技发展有限公司在发布的酵母双杂交文库筛选供应信息，浏览与酵母双杂交文库筛选相关的产品或在搜索更多与酵母双杂交文库筛选相关的内容。 查看更多
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2021-09-22
1. Run the gel as normal. Often for genomic southerns it is desirable to run long gels (18cm) over 4-6hrs.2. Photograph the gel with a ruler adjacent to the mo 查看更多
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2021-08-05
酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激... 查看更多
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2021-08-22
Histologic analysis of murine BM is a necessary complement to flow cytometric or in vitro analysis. Techniques to do this are well established in human hematop 查看更多
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酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域： DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激... 查看更多
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2021-09-15
问：如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？答：在有些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板。在30℃下温浴，直至平板上的克隆互相粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一 查看更多
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2021-09-02
随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成，基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包 查看更多
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2021-07-24
天津赛尔生物技术有限公司是酵母双杂交服务技术服务商之一，从事酵母双杂交服务已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业酵母双杂交服务技术服务，您可以搜索更多相关的酵母双杂交服务实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的酵母双杂交服务产品。而生物在线将会为您在酵母双杂交服务方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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2021-09-14
问：如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？答：在有些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板。在30℃下温浴，直至平板上的克隆互相粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一 查看更多
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2021-07-26
上海禾午生物科技有限公司在发布的EGY48酵母双杂交菌株供应信息，浏览与EGY48酵母双杂交菌株相关的产品或在搜索更多与EGY48酵母双杂交菌株相关的内容。 查看更多
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2019-01-21
上海欧易生物医学科技有限公司在发布的膜体系酵母双杂交文库-欧易生物供应信息，浏览与膜体系酵母双杂交文库-欧易生物相关的产品或在搜索更多与膜体系酵母双杂交文库-欧易生物相关的内容。 查看更多
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2019-07-24
上海默玺生物科技有限公司在发布的X-α-Gal 检测双杂交作用 也称X-ALPHA-Gal，或者X-a-gal供应信息，浏览与X-α-Gal 检测双杂交作用 也称X-ALPHA-Gal，或者X-a-gal相关的产品或在搜索更多与X-α-Gal 检测双杂交作用 也称X-ALPHA-Gal，或者X-a-gal相关的内容。 查看更多
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蛋白质组学及其主要研究方法 123
佳伟哦472017-10-02
探究物进程机制,需要确定介导程蛋白质-蛋白质间相互作用.研究蛋白质间相互作用主要技术总结：、酵母双杂交系统酵母双杂交系统前广泛用于蛋白质相互作用组研究种重要.其原理靶蛋白诱饵蛋白特异结合,诱饵蛋白结合于报道基启,启报道 基酵母细胞内表达,检测报道基表达产物,则说明两者间相互作用,反则两者间没相互作用.种技术微量化、阵列化则用于 规模蛋白质间相互作用研究.实际工作,根据需要发展单杂交系统、三杂交系统反向杂交系统等.Angermayr等设计SOS蛋白介 导双杂交系统.研究膜蛋白功能,丰富酵母双杂交系统功能.外,酵母双杂交系统作用已扩展至蛋白质鉴定.二、噬茵体展示技术编码噬菌体外壳蛋白基连接单克隆抗体DNA序列,噬菌体,表面表达相应单抗,再噬菌体柱,柱若含目蛋白,与相应抗体 特异性结合,称噬菌体展示技术.技术主要用于研究蛋白质间相互作用,仅高通量及简便特点,具直接基、高选择性筛选复杂混 合物、筛选程通适改变条件直接评价相互结合特异性等优点.目前,用优化噬菌体展示技术,已经展示鼠两种特殊细胞系cDNA文 库,并离皮信号传导途径信号.三、等离共振技术表 面等离共振技术(Surface Plasmon Resonance,SPR)已蛋白质相互作用研究新手段.原理利用种纳米级薄膜吸附诱饵蛋白,待测蛋白与诱饵蛋白结合,薄 膜共振性质发改变,通检测便知两种蛋白结合情况.SPR技术优点需标记物或染料,反应程实监控.测定快速且安全,用于检测 蛋白核酸及其物间相互作用.………………展开
【求助】是否有人用过酵母细胞质双杂交系统,兼讨论酵母双杂交问题123
nikooki2021-08-08
在传统的酵母双杂交系统中，蛋白质需要入核发生相互作用，才能激活报道基因表达；因此对于发生在细胞质中或者细胞膜上的蛋白质相互作用是检测不到的。最近几年开发出了一种细胞质的酵母双杂交系统，与传统的基于转录因子GAL4或者LexA的方法不同，细胞质双杂交是在Ras途径的基础上建立的。如StratageneCytoTrapTM双杂交系统。可以参考链接http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews2005/gene26.htm
最近本人在做一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的酵母双杂交，想吊出它的互作基因，前段时间用Invitrogen的PROQUESTTWO-HYBRIDSYSTEM筛过一次库，没有得到任何阳性克隆，我估计是连入载体的基因太长有3KB多，1000多个氨基酸，可能就算表达出来了也不能行使正常功能。随后取了蛋白的激酶区1.8KB，想重新筛一次库（还未开始重筛）。后来老板的建议是要我试试酵母细胞质双杂交系统，因为在生物体内，我所研究的蛋白是在细胞质中表达的，可能在酵母细胞核中也不能正常工作（猜测）。
这两天我查了查，发现细胞质的双杂交完全不同，要是做的话还有重新购买另外的试剂盒，重新构建文库。
还有一点就是，前人发表的文章，同样是做我这种蛋白激酶的，都是用传统的酵母双杂交系统筛选到互作蛋白的，如果情况是这样的话我是否还有必要尝试细胞质的双杂交呢？
还是等我做了激酶区的筛库之后再说？
请各位帮忙看看，谢谢。
最近本人在做一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的酵母双杂交，想吊出它的互作基因，前段时间用Invitrogen的PROQUESTTWO-HYBRIDSYSTEM筛过一次库，没有得到任何阳性克隆，我估计是连入载体的基因太长有3KB多，1000多个氨基酸，可能就算表达出来了也不能行使正常功能。随后取了蛋白的激酶区1.8KB，想重新筛一次库（还未开始重筛）。后来老板的建议是要我试试酵母细胞质双杂交系统，因为在生物体内，我所研究的蛋白是在细胞质中表达的，可能在酵母细胞核中也不能正常工作（猜测）。
这两天我查了查，发现细胞质的双杂交完全不同，要是做的话还有重新购买另外的试剂盒，重新构建文库。
还有一点就是，前人发表的文章，同样是做我这种蛋白激酶的，都是用传统的酵母双杂交系统筛选到互作蛋白的，如果情况是这样的话我是否还有必要尝试细胞质的双杂交呢？
还是等我做了激酶区的筛库之后再说？
请各位帮忙看看，谢谢。
酵母双杂交系统及应用123
yinyuewanwan2021-08-14
谢谢大家.
这个直接从生物秀论坛转来的。。。有点。。。你出的力也太少了点吧
这个直接从生物秀论坛转来的。。。有点。。。你出的力也太少了点吧
酵母双杂交系统技术介绍 123
111222333a2021-07-25
有谁能介绍一下酵母双杂交系统吗？
谢了
1、发帖请归入相应子版（选择SubBoard）！
2、请在帖子前面注明帖子性质，如【求助】、【原创】、【分享】、【讨论】、【申请上传】、【下载】、【转帖】、【转载】、【信息】、【求购】、【公告】、【建议】等，以方便战友应助及版面管理！
3、不规范的发帖及应助帖将不加分！
【】可以这样输入，智能ABC，输入“v1”，后翻3页，就可以看见了，或用紫光拼音中文输入法，输入方括号就是粗体的中括号，实在不行请复制本公告中【】
谢了
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酵母选择营养缺陷培养基SD培养基SCDropout/SCUra培养基酵母营养缺 ...123
XD54EN2017-10-02
酵母ah109 ura缺失培养基
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率展开
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率展开
酵母双杂交系统的原理及123
终极至尊粉7362021-07-30
酵母双杂交系统利用杂交基通激报道基表达探测蛋白－蛋白相互作用主要二类载体: a 含DNA -binding domain载体; b 含DNA-activating domain载体述二类载体构建融合基 测试蛋白基与结构域基必须阅读框内融合融合基报告株表达其表达产物定位于核内才能驱报告基转录例GAL4-bd具核定位序列(nuclear-localization sequence) GAL4-ad没GAL4-ad氨基端或羧基端应克隆自SV40T-抗原段序列作核定位序列图" class="ikqb_img_alink">
什么是DNA结合域和转录激活域？_123
老衲3212021-08-17
双杂交系统体内检测蛋白-蛋白相互作用极强力 双杂交系统基础些转录发现模域(modular domains): DNA结合域结合段特异DNA序列转录激域转录激域与基础转录机制相作用(1)转录激域联合DNA结合域能TATA盒启RNA聚合酶II复合体装配同增强转录CheckMateTM 哺乳物双杂交系统DNA结合域转录激域别由同质粒产融合于DNA结合域蛋白质 (X")与融合于转录激域第二蛋白质(Y)相互作用DNA结合域与转录激域紧密关联系统蛋白X与Y相互作用导致报告基转录
http://tong.dxy.cn/info/infoSupplyView.htm?id=50c35b041b977f34011b97c6bb94325e
http://tong.dxy.cn/info/infoSupplyView.htm?id=50c35b041b977f34011b97c6bb94325e
酵母双杂实验操作手册和注意事项123
汉字La2017-10-01
注意事项
（1）酵母双杂交照设定 规酵母双杂交操作般设定阳性照、阴性照及显色系统照三种照MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统例：
阳性照：pGADT7-T + pGBKT7-53其T蛋白53蛋白已经明确酵母细胞内能够发结合并启报告基表达两种蛋白
阴性照：pGADT7-T + pGBKT7-lam其已经明确T蛋白lam蛋白酵母细胞内能发结合 系统显色照pGADT7-Pcl1该表达质粒转入酵母细胞能引起-半乳糖苷酶-半乳糖苷酶泌检测显色系统否问题
（2）假阳性现象种原能造假阳性结见三种：
筛文库蛋白自身具转录性能够启报告基表达——种情况需要筛候选蛋白进行自激验证
酵母细胞内能同含止种文库蛋白其种文库蛋白与诱饵蛋白相互及结合
种情况需要阳性克隆再划板2~3确保每酵母克隆含种文库蛋白诱饵蛋白；另外划板数宜否则现蛋白表达质粒丢失情况 其些明原造假阳性—种情况需要筛候选文库质粒表达诱饵蛋白质粒重新共转入酵母细胞或者通酵母杂交式重新验证必要pGADT7-cDNA质粒与pGBKT7-bait质粒载体调构建pGADT7-bait与pGBKT7-cDNA并重新酵母细胞验证真阳性结合调能酵母细胞做阳性结
（3）见问题及参考案 转化效率低—尽量使用新鲜培养基及新鲜、且直径2~3 mm左右酵母克隆确保酵母力；用于转化质粒使用前进行乙醇沉淀提高质粒纯度浓度
杂交效率偏低—能由于表达融合蛋白酵母细胞毒性某些情况液体培养基酵母换琼脂糖固体培养板比较种情况采用共转化进行试验；或者单转酵母克隆别铺5块10 mm培养板待克隆刮取所克隆于5 mL 0.5×YPDA重悬再按照规杂交操作步骤进行操作 背景高—使用HIS3作报告基由于HIS3基具定程度泄漏表达能现背景高情况使用适量HIS3蛋白竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole）降低背景；或者再增加种更加严格报告基筛选Ade
诱饵蛋白具自激现象——采用克隆突变产自激段氨基酸序列敲除或突变种能破坏两蛋白间相互作用
（1）酵母双杂交照设定 规酵母双杂交操作般设定阳性照、阴性照及显色系统照三种照MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统例：
阳性照：pGADT7-T + pGBKT7-53其T蛋白53蛋白已经明确酵母细胞内能够发结合并启报告基表达两种蛋白
阴性照：pGADT7-T + pGBKT7-lam其已经明确T蛋白lam蛋白酵母细胞内能发结合 系统显色照pGADT7-Pcl1该表达质粒转入酵母细胞能引起-半乳糖苷酶-半乳糖苷酶泌检测显色系统否问题
（2）假阳性现象种原能造假阳性结见三种：
筛文库蛋白自身具转录性能够启报告基表达——种情况需要筛候选蛋白进行自激验证
酵母细胞内能同含止种文库蛋白其种文库蛋白与诱饵蛋白相互及结合
种情况需要阳性克隆再划板2~3确保每酵母克隆含种文库蛋白诱饵蛋白；另外划板数宜否则现蛋白表达质粒丢失情况 其些明原造假阳性—种情况需要筛候选文库质粒表达诱饵蛋白质粒重新共转入酵母细胞或者通酵母杂交式重新验证必要pGADT7-cDNA质粒与pGBKT7-bait质粒载体调构建pGADT7-bait与pGBKT7-cDNA并重新酵母细胞验证真阳性结合调能酵母细胞做阳性结
（3）见问题及参考案 转化效率低—尽量使用新鲜培养基及新鲜、且直径2~3 mm左右酵母克隆确保酵母力；用于转化质粒使用前进行乙醇沉淀提高质粒纯度浓度
杂交效率偏低—能由于表达融合蛋白酵母细胞毒性某些情况液体培养基酵母换琼脂糖固体培养板比较种情况采用共转化进行试验；或者单转酵母克隆别铺5块10 mm培养板待克隆刮取所克隆于5 mL 0.5×YPDA重悬再按照规杂交操作步骤进行操作 背景高—使用HIS3作报告基由于HIS3基具定程度泄漏表达能现背景高情况使用适量HIS3蛋白竞争性抑制剂3-AT（3-amino-1,2,4-triazole）降低背景；或者再增加种更加严格报告基筛选Ade
诱饵蛋白具自激现象——采用克隆突变产自激段氨基酸序列敲除或突变种能破坏两蛋白间相互作用
酵母双杂交,营养缺陷培养基长出菌落,但提质粒,没有_问答详情_...123
元大师2162017-10-02
酵母双杂交营养缺陷培养基菌落提质粒
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率
发展起各种双杂交系统Fields等建立系统基础些新系统主要报道基、诱饵表达载体及猎物表达载体等做些改进其重要改进引入额外报道基广泛采用HIS3基经改造带HIS3报道基酵母细胞HIS3启表达才能缺乏组氨酸选择性培养基HIS3报道基转录表达由诱饵猎物相互作用所启数双杂交系统往往同使用两甚至三报道基其 LacZ些改造基启区相同转录激结合位点相同转录激（述Gal4蛋白）激通种双重或重选择既提高检测灵敏度减少假阳性现象其针诱饵或猎物表达载体等所作改进详述
双杂交鉴定程要经两转化工作量相特别寻找新作用蛋白质候尤其且酵母细胞转化效率比细菌要低约4数量级转化步骤双杂交技术瓶颈Bendixen等通酵母接合型引用避免两转化操作同提高双杂交效率酵母性殖程涉及两种配合类型：a接合型α接合型两种单倍体间接合（mating）能形二倍体a接合型细胞间或α接合型细胞间能接合形二倍体根据酵母性殖特点文库质粒转化α接合型酵母细胞诱饵表达载体转化a接合型细胞别铺筛选平板使细胞菌苔（lawn）再两种菌苔复印同三重筛选平板原则诱饵靶蛋白发相互作用二倍体细胞才能平板单倍体细胞或虽二倍体细胞BD融合蛋白AD融合蛋白相互作用都淘汰克隆进步通β-半乳糖苷酶力进行鉴定项改进仅简化实验操作且提高双杂交筛选效率
酵母单杂交跟双杂交的区别在哪里?最简单最通俗易懂的说话是什么?123
梓纤矫882017-10-02
酵母双杂交系统析蛋白-蛋白间相互作用效快速 面应用 仍存些局限性⑴双杂交系统析蛋白间相互作用定位于细胞核内 许蛋白间相互作用依赖于翻译加工糖基化、二硫键形等 些反应核内进行另外些蛋白确折叠功能赖于其非酵母蛋白辅助 限制某些细胞外蛋白细胞膜受体蛋白等研究⑵酵母双杂交系统重要问题假阳性由于某些蛋白本身具激转录功能或酵母表达发挥转录激作用 使DNA结合结构域杂交蛋白特异激结构域情况激转录另外某些蛋白表面含种蛋白质低亲力区域 能与其蛋白形稳定复合物 引起报告基表达 产假阳性结
大肠杆菌双杂交系统 123
wangshui2021-07-21
大肠杆菌双杂交系统，作为一种新型的研究蛋白质相互作用的方法，近年来得到了快速的发展。大肠杆菌双杂交系统是继酵母双杂交系统和哺乳动物细胞双杂交系统之后，产生的另一种直接于细胞内检测蛋白与蛋白相互作用的遗传学新方法。近几年来，该系统得到了飞速的发展，逐渐走向成熟并运用到了许多领域。文章详细介绍了该系统的特点、原理及发展现状等。
http://www.biotech.org.cn/news/news/file/20060417084144.pdf
http://www.biotech.org.cn/news/news/file/20060417084144.pdf
真核生物膜蛋白的互作蛋白用酵母双杂交合适吗？_答魔科研123
东城大爷N72021-08-19
酵母双杂交系统应用遇问题假阳性较二转化效率偏低所谓假阳性：待研究两蛋白间没发相互作用情况报告基激主要原由于BD融合诱饵蛋白单独激作用或者种融合蛋白激作用外蛋白激另外AD融合靶蛋白DNA特异性结合则单独激报告基表达排除假阳性需要作严格照试验应诱饵靶蛋白别作单独激报告基鉴定目前几公司推酵母双杂系统都采用报告基且每报告基游调控区各相同减少量假阳性另外报告基通整合染色体使基表达水平稳定消除由于质粒拷贝数变化引起基表达水平波造假阳性即使根据严格照实验证明确实发蛋白间相互作用应面进行析：
（1）种相互作用否细胞内自发即蛋白细胞命否同间表达且定位同区域
（2）某些蛋白依赖于遍蛋白蛋白酶解途径员具普遍蛋白间相互作用能力
（3）些实际没任何相互作用相同模体（motif）两亲a-螺旋蛋白质间发相互作用十酵母双杂交技术直消除假阳性面断改进并且已取较效〔23〕
酵母双杂交应用遇假阴性现象所谓假阴性即两蛋白本应发相互作用报告基表达或表达程度甚低至于检测〔4〕造假阴性原主要两 面：融合蛋白表达细胞毒性应该选择敏性低菌株或拷贝数低载体二蛋白间相互作用较弱应选择高敏菌株及拷贝载体目前假阴性现象虽实验主要问题应予重视
（1）种相互作用否细胞内自发即蛋白细胞命否同间表达且定位同区域
（2）某些蛋白依赖于遍蛋白蛋白酶解途径员具普遍蛋白间相互作用能力
（3）些实际没任何相互作用相同模体（motif）两亲a-螺旋蛋白质间发相互作用十酵母双杂交技术直消除假阳性面断改进并且已取较效〔23〕
酵母双杂交应用遇假阴性现象所谓假阴性即两蛋白本应发相互作用报告基表达或表达程度甚低至于检测〔4〕造假阴性原主要两 面：融合蛋白表达细胞毒性应该选择敏性低菌株或拷贝数低载体二蛋白间相互作用较弱应选择高敏菌株及拷贝载体目前假阴性现象虽实验主要问题应予重视
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