Annexin V／PI双染法流式细胞仪检测凋亡中对照组的细胞来源？
2021-08-16
问题描述：
最近刚开始做实验，想用双染法流式细胞仪检测不同浓度药物对肿瘤细胞凋亡的影响
按照要求检测时设置如下组别：
1.阴性对照组不染
2.补偿1组AV单染
3.补偿2组PI单染
4.无药物处理组双染
5.药物浓度A组双染
6.药物浓度B组双染
那请问1.2.3组的细胞来源是什么？有前辈说应该是4.5.6三组的混合细胞，请问是这样吗？还是用4.组的即可？
另外还有几个小问题：
1.如果检测当天机器坏了，我在哪一步可以用什么固定来推迟检测？听说可以用PFA，多少浓度的？需固定多长时间？多长时间内检测有效？
2.检测前需要在冰上操作吗？
3.对于贴壁细胞，用胰酶消化后，是先吸除胰酶再加培养液，还是消化后直接加培养液？因为感觉吸除胰酶时会不会不小心吸掉一部分细胞？（碧云天的试剂盒的说明书也不一样，AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒说需吸除胰酶，但细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒中说直接加培养液）
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纳兰火火
用户
用4中的细胞就可以，就是没经过处理的细胞。胰酶用无EDTA的，个人觉得吸出或不吸出都无所谓，因为都是要离心的。
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fcsm
用户纳兰火火用4中的细胞就可以，就是没经过处理的细胞。胰酶用无EDTA的，个人觉得吸出或不吸出都无所谓，因为都是要离心的。谢谢！又问过实验室管流式细胞仪的大哥，他说让用5.6.两组加药的细胞混合做对照呢，彻底迷糊了，有没有实验指导书啥的？
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纳兰火火
用户阴性是用来调补偿的，就是不做任何处理的细胞
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