Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测凋亡中对照组的细胞来源?
2021-08-16
问题描述:
最近刚开始做实验,想用双染法流式细胞仪检测不同浓度药物对肿瘤细胞凋亡的影响
按照要求检测时设置如下组别:
1.阴性对照组不染
2.补偿1组AV单染
3.补偿2组PI单染
4.无药物处理组双染
5.药物浓度A组双染
6.药物浓度B组双染
那请问1.2.3组的细胞来源是什么?有前辈说应该是4.5.6三组的混合细胞,请问是这样吗?还是用4.组的即可?
另外还有几个小问题:
1.如果检测当天机器坏了,我在哪一步可以用什么固定来推迟检测?听说可以用PFA,多少浓度的?需固定多长时间?多长时间内检测有效?
2.检测前需要在冰上操作吗?
3.对于贴壁细胞,用胰酶消化后,是先吸除胰酶再加培养液,还是消化后直接加培养液?因为感觉吸除胰酶时会不会不小心吸掉一部分细胞?(碧云天的试剂盒的说明书也不一样,AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒说需吸除胰酶,但细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒中说直接加培养液)
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纳兰火火
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用4中的细胞就可以,就是没经过处理的细胞。胰酶用无EDTA的,个人觉得吸出或不吸出都无所谓,因为都是要离心的。
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fcsm
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纳兰火火用4中的细胞就可以,就是没经过处理的细胞。胰酶用无EDTA的,个人觉得吸出或不吸出都无所谓,因为都是要离心的。谢谢!又问过实验室管流式细胞仪的大哥,他说让用5.6.两组加药的细胞混合做对照呢,彻底迷糊了,有没有实验指导书啥的?
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纳兰火火
用户
阴性是用来调补偿的,就是不做任何处理的细胞
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