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yesbiotech/mAb anti-Human TNF-α, C2H9/0.1 mg/MO-C40003D
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- Description
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Description
Details
Description: Mouse monoclonal antibody to human Tumor Necrosis Factor alpha (TNF-α)
Purification: Protein G affinity purified
Product Type:Primary antibody
Target Protein: Human TNF-α
Immunogen: Purified recombinant human TNF-α
Fusion Myeloma: Sp2/0-Ag14
Specificity: This antibody recognizes both natural and recombinant human TNF-α.Reactivity with natural TNF-α has not been tested.
Species Reactivity: Human, other species not tested
Host / Isotype: Mouse, IgG2b Kappa
Formulation: Lyophilized from a solution in 0.01M PBS, pH 7.0
Reconstitution: Double distilled water is recommended to adjust the final concentration to 1.00 mg/mL.
Storage: Store at -20oC
Research Area: Cytokine, inflammation
Background:
Tumor Necrosis Factor-alpha (TNF-α) is a multifunctional pro-inflammatory cytokine, mainly secreted by activated macrophages. It is implicated with a variety of biological procedures including systemic inflammation, cell proliferation, apoptosis, lipid metabolism, and coagulation. The pleiotropic attribute of TNF-α regulation is associated with its ability to trigger multiple signalling pathways through its receptors, TNFR1 (p55) and TNFR2 (p75).
TNF-α not only contributes to the immune response to bacterial, fungal, viral and parasitic invasions, but also functions in tissue remodeling, autoimmune-diseases and the necrosis of specific tumors. TNF-α hyper-expression in response to some bacterial components such as LPS can cause life threatening septic shock. Recombinant TNF-α, in combination with chemotherapy, has been applied for treatment of soft sarcomas, melanomas and other irresectable tumors. Anti-TNF-α therapy has been used for treatment of rheumatoid arthritis.
Applications:
ELISA:React with recombinant human TNF-α.
Western Blotting:
Figure: Western blot analysis of recombinant human TNF-αusing anti-human TNF-αmonoclonal antibody clone C2H9.
References: If research is published using this product, please inform Anogen in order to cite the reference on this datasheet. Anogen will provide one unit of product in the same category as gratitude.
Additional
Additional Information
| Product Specificity | mAb anti-Human TNF-α, C2H9 |
|---|---|
| Application | EIA, WB |
| Size | 0.1 mg |
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
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2019-08-06
广州格卢瑞实验器材有限公司在发布的贝克曼库尔特CytoFLEX流式细胞仪供应信息，浏览与贝克曼库尔特CytoFLEX流式细胞仪相关的产品或在搜索更多与贝克曼库尔特CytoFLEX流式细胞仪相关的内容。 查看更多
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2019-05-14
/*公开招标公告序列化*/ * { margin: 0; padding: 0; font-family: "微软雅黑"; font-size: 14px; color: #333; } ul { list-style: none; } em { font-style: normal; } p { clear: both; } 查看更多
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2019-11-05
在线监测型浮游植物流式细胞仪CytoBuoy是由上海泽泉科技股份有限公司代理或销售的CytoBuoy品牌的仪器，产品来源于荷兰CytoBuoy。上海泽泉科技股份有限公司是中国最权威的在线监测型浮游植物流式细胞仪CytoBuoy销售服务商之一，在上海等地方销售在线监测型浮游植物流式细胞仪CytoBuoy已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业在线监测型浮游植物流式细胞仪CytoBuoy仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的在线监测型浮游植物流式细胞仪CytoBuoy产品 查看更多
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2019-04-23
1．流式细胞仪的分析速度：<br>一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞大型机可达每秒上万个细胞。<br>2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。<br>3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～0.5μm。<br>4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来 ... 查看更多
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2019-05-24
中机国际招标有限公司受四川大学委托，根据《中华人民共和国政府采购法》等有关规定，现对四川大学2019年量化成像分析流式细胞仪采购项目进行公开招标，欢迎合格的供应商前来投标。项目名称：四川大学2019年量化成像分析流式细胞仪采购项目项目编号：0702-1941CITC6076-07项目联系方式：项目联系人：何先生、刘女士项目联系电话：028-83199536、81133425转875、855，0 查看更多
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2021-07-16
一、流式细胞术的概念流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)，是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。二、流式细胞仪的概念流式细胞仪(FCM)是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高... 查看更多
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一、招标条件根据《中华人民共和国政府采购法》、《中华人民共和国政府采购法实施条例》及《政府采购货物和服务招标投标管理办法（财政部令第87号）》等有关法律法规的规定，云南招标股份有限公司受云南省肿瘤医院的委托，对2019年第四批政府采购（流式细胞仪等设备）采购项目进行公开招标。本项目采购资金已经落实。二、招标概况2.1招标编号：Q5300000000519001228 2.2招标范围：包号★是否接受 查看更多
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2021-08-11
Partec流式细胞仪农林口学术会议partec流式细胞仪目前在植物和水产育种得到了广泛的应用和认可，其中中国农业科学院柑桔研究所（西南大学柑桔研究所）用partec流式细胞仪筛选出大量单倍体，打破了育种界一直认为的“柑橘无单倍体的”说法。中柑所在线讯：中柑所科研人员通过半年多来的不懈探索，掌握了柑桔染色体倍性快速检测技术，以及单倍体实生苗培育与加倍技术，成功获得一批纯系二倍体与纯系四倍体材料。柑桔作为多年生木本作物，童期长，遗传背景复... 查看更多
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2019-04-04
便携式流式细胞仪MicroCyte是由上海泽泉科技股份有限公司代理或销售的BioDETECT品牌的仪器，产品来源于挪威BioDETECT。上海泽泉科技股份有限公司是中国最权威的便携式流式细胞仪MicroCyte销售服务商之一，在上海等地方销售便携式流式细胞仪MicroCyte已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业便携式流式细胞仪MicroCyte仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的便携式流式细胞仪MicroCyte产品 查看更多
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上海哈灵生物科技有限公司在发布的BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒供应信息，浏览与BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒相关的产品或在搜索更多与BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒相关的内容。 查看更多
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2020-01-28
深圳市百力特生物医疗科技有限公司在发布的流式细胞仪检测服务供应信息，浏览与流式细胞仪检测服务相关的产品或在搜索更多与流式细胞仪检测服务相关的内容。 查看更多
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2021-09-01
默瑞（上海）生物科技有限公司，Leica显微系统，Merk Millipore实验室纯水超纯水仪，Roche实时定量PCR仪，Partec流式细胞仪，RPA，TwistDx 代理商，Echelon代理商，Jackson代理商,KAPA，enzymatics经销商等,莫纳生物集团企业。 查看更多
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Caspase3调节细胞自噬控制白血病发生的机制 生物 晓木虫学术...123
沁水幽谷2021-08-13
流式细胞仪检测为什么要裂解红细胞？红细胞会干扰其他白细胞的检测么？可以不裂解通过流式区分红细胞和白细胞么？流式能够计数红细胞么？
如下图流式细胞仪的横坐标是什么意思_问答详情_蚂蚁淘,【正品...123
强力杰2021-07-20
横坐标是DNA染料PI收到波长为488nm的激光激发后所放出的荧光强度。
流式细胞仪（Flow cytometry ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
流式细胞仪（Flow cytometry ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
医学检验中流式细胞仪大约多少钱机械知道问答买卖机械网123
雕刻时光9288202017-10-02
根据配置，价格从几十万都几百万不等。但并不是所有的流式细胞仪都可以做临床检验的，只有授予证书的少数几款才可以。
由于研究的就没有限制了。
由于研究的就没有限制了。
bd流式细胞仪c6 fitc/pe/apc哪个通道123
哭了KHJVA2021-08-03
很简单的啊。
流式细胞仪数据分析
5.1 数据采集及显示
光信号转换成电压脉冲后，再通过模数转换器转换成为计算机能够储存处理的数字信号。 流式细胞仪的数据以FSC标准格式存储，该标准由“分析细胞学协会”制定。
根据FSC标准，数据存储格式应包括三个文件：样本获取文件，数据设置文件和数据分析结果。 4参数（FSC,SSC,FITC和PE）的单细胞分析会生成8位数据。当单个样品累计收集到10000个细胞时，FCS数据文件为80kB.
数据采集存储完毕后，细胞亚群可以几种不同格式显示。单参数如FSC或FITC（FL1）可使用直方图，横轴表示荧光通道。纵轴表示在该通道内收集到的细胞数量（如图5-1）。处在同一通道的每一细胞均符合该通道的信号值，而且具有相同的信号密度。通道右侧信号的荧光强度明显高于左侧，越靠右侧荧光亮度越强。 图5-1 流式数据分析图
双参数可在二维散点图中同时显示，X轴显示通道1（FL1），Y轴显示通道2（FL2）。3维图通过X,Y,Z三个轴分别显示每个通道的细胞量（如图5-1）。
习题：数据采集及显示
1 在直方图中横轴和纵轴分别表示 .
2 二维点图用于显示 参数。
3 在CellQuest软件中3维图中Z轴代表 .
5.2 设门
通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC,SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。 图5-2 全血样本中淋巴细胞亚群的数据分析图
习题：设门
1 设门的方法通常用于分析样本内的指定细胞。（对 错）
5.3 细胞亚群的数据分析
数据分析包括从点图中的list-mode文件中显示数据，然后统计点图中的细胞分布情况。如前所述，分别有几种形式的点图用于显示数据，而且可通过设门的方法区分指定的细胞亚群。 如图5-3所示，在淋巴细胞亚群周围设门，以单独分析或分选该亚群细胞。
图5-3 选定淋巴细胞亚群设门
门内细胞的数据结果可在随后的图中显示。在下面的实例中，我们将详尽阐述细胞亚群百分含量的不同分析方法。 我们可以通过单参数直方图，二维点图和三维图来分析结果。单参数直方图可定位边界，二维点图可设置象限标志。如果需要，还可以建立数据统计表以输出结果。 直方图可直观单个参数的细胞数量。阴性对照用于决定直方图中单参数的左右边界（见图5-4）。左图中M1为阴性对照峰。右图中M2为CD3 FITC阳性峰。
图5-4 阴性对照峰M1（NORM001）和CD3 FITC阳性峰M2（NORM002） 图5-5的统计结果表明，整个事件共记录了6000个细胞，门内淋巴细胞2891个。其中M1（阴性）细胞619个，M2（CD3阳性）细胞2272个细胞。淋巴细胞亚群CD3阳性百分含量的统计结果为：M2：2272/2891=78.59%.
图5-5 直方图统计结果
二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图5-6为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。左下象限（LL）为双阴性细胞，左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19 PE），左下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3 FITC），右上象限（UR）为双阳性细胞（CD19+/CD3+）。
图5-6 阴性对照组（NORM001）和CD3 FITC/CD19 PE双染样本（NORM002） 如图5-7所示，淋巴细胞亚群双阳性细胞（CD19+/CD3+）的百分含量为：296/2839=10.43%.
图5-7 散点图统计结果 另一个分析方法是划定区域，也就是设门。我们可以用不同形状的绘图工具定义所选区域（如图5-8所示）；然后统计该区域内指定细胞亚群的百分含量。在图5-9中，R4门内为CD4阳性，CD3阴性的淋巴细胞亚群，其结果为：40/2866=1.40%.
图5-8 CD3 FITC/CD4 PE 双染样本分析图 图5-9 CD3 FITC/CD4 PE 双染样本数据统计结果
这种方法在分析不同的供体细胞时存在一个缺陷，因为如果事先定义好细胞亚群的区域或边界，在随后的文件中，下一个样本的细胞亚群位置会发生变化，这就需要操作者重新调整区域或边界位置。 为避免这种情况的发生，我们采用一种称为集群分析（cluster analysis）的新方法。BD公司的MultiSETTM 和AttractorsTM软件就属于集群分析软件。该软件的特点是会随着整个细胞亚群的移动而移动，自动变换区域或边界到相应的细胞亚群位置（见图5-10）。
图5-10 使用Attractors分析软件时二维点图的前后变化对比
5.4 流式细胞仪的其它应用以及数据分析
这些分析方法通常适用于计算离散细胞群的百分含量，对于分析单克隆细胞株分子是否呈阳性并不适用。因为单克隆细胞株是单个细胞群，在大多数情况下，既不是100%阴性，也不是100%阳性，所以我们通过几何均值法和中位法统计细胞荧光密度和阳性率。如果样本的统计结果远远大于阴性对照组，那么我们认为其结果是阳性的，两者间的差异越大，说明细胞的表达越高，阳性率越高。 如图5-11所示，左图为单细胞群的散射光信号，右图为阴性对照组和两种不同抗体染色样本的峰叠加图。每个峰的几何均值分别为2,5和20（从左至右）。
图5-11 单细胞株分析图 除检测阳性率，几何均值法和中位法还用于分子（接合子）定量分析。
QuantiCALCTM软件就是使用中值法计算每个细胞的抗体结合位点数。如图5-12所示，Y轴上的圆圈代表从标准曲线获取的信息，用于计算每个细胞的接合点位数。 图5-12 使用QuantiCALC软件计算每个细胞的抗体结合位点数 我们使用ModFit LTTM软件进行DNA定量分析。因为DNA峰（G0/G1期，S期和G2M期）不是离散的，所以我们对曲线以下的面积进行积分，以得到每个细胞亚群的百分含量结果。
图5-13 细胞周期的DNA直方图
习题：数据分析
1二维点图和一维直方图的作用分别是什么？
2 见图5-4和图5-5,CD3阴性和阳性的百分含量分别是多少。
3 LL象限代表双阳性细胞亚群。（对 错）
4 见图5-6和图5-7,淋巴细胞（CD3+/CD19-）的百分含量是多少。
5 只能使用矩形设定细胞区域范围。（对 错）
6 使用区域设定法分析样本有哪些不足。
7 避免细胞亚群移动的分析方法是什么。
8 在定量分析中我们使用哪些分析方法检测阳性率。
5.5 CellQuest和CellQuest Pro软件使用
CellQuest和CellQuest Pro软件是目前运用最为广泛的流式细胞仪采集及分析软件。它运行于苹果电脑上，优质的矢量图显示使得操作界面特别优美。现最新的微软公司的Vista软件也是仿苹果操作系统界面的，可想而知在使用CellQuest和CellQuest Pro时的强大功能及视觉质感。CellQuest和CellQuest Pro软件主安装在BD FACSCalibur型流式细胞仪上。
1.软件数据流程
在CellQuest和CellQuest Pro软件的数据流分为二个部分：方案和数据包。方案是指用户可以建立采集或分析所需的直方图或散点图、设门并定义门与门、门与图之间的逻辑关系。可以使用方案进行数据采集或分析以往已有的数据。每个采集方案分析样本后会生成数据包，该数据包中包括了样本中每个颗粒在各个检测参数上的数值，格式为FCS2.0或FCS3.0.
数据包必须由方案文件打开，无法单独显示，或者可由第三方软件进行分析，如WinMDI.
2.软件与仪器的连接
流式细胞仪需要加电开启后会向计算机发出信息，所以如要进行实验需要先开启流式细胞仪，然后再开启计算机。
1、x09先开仪器后开计算机，以确保仪器和计算机之间的正常通讯。
2、x09在苹果菜单下点击CellQuest和CellQuest Pro软件。
3、x09从Aquire菜单下选择connet to cytometer.
3.方案与数据之间的关系
CellQuest和CellQuest Pro软件的方案与数据相互独立保存，数据包可以由任一方案文件进行分析，分析后不改变数据包中的任何数据。CellQuest和CellQuest Pro软件中方案内的直方图或散点图有三种状态：Acquire,Analysis和Acquire-Analysis.
当图的属性为Acquire时，此图只限于采集下用，即只当进行检测时它才能显示颗粒；
当图的属性为Analysis时，此图只限于分析已保存的数据包，它不能用于采集数据。
当图的属性为Acquire-Analysis时，此图即可用于采集数据也可用于分析已有数据。
所以方便起见，我们一般将方案中的直方图或散点图全部设为Acquire-Analysis属性。
CellQuest Pro CellQuest
4.方案的建立
A选择实验参数
默认情况下，FACSCalibur流式细胞仪开机后只打开一根激光器，及五个参数供选择使用：FS、SS、FL1、FL2、FL3.当我们要使用第二根激光器及FL4通道时需要勾选FL4的选项，仪器自动打开633nm激光器。
B,建立散点图或直方图，命名坐标
CellQuest Pro软件主要工作界面，软件类似于Office word的工作面，可在A4大小的页面上进行编辑建立各种直方图或散点图。
在CellQuest软件下，需在选择Plot菜单，选择Format来打开图的属性对话框，其中包括了关于该图所有选项。
建立好直方图或散点图后，我们需要对所选的参数进行命名，如不修改软件自动命名为FS、SS、FL1、FL2、FL3和FL4.
在菜单上选择Acquire栏目，选择Parameter Description,可出现关于文件存储和参数命名的对话框。在这个对话框中用P字母来代表每个参数，并在此对每个采集参数进行命名，FL1为CD3FITC,FL2为CD4PE……
C,设门并建立门与图之间的关系
R与G的关系
R是Region的首个字母，Region一般是指一个闭合形的区域，如矩形区、自由区和圆形区。区域与区域之间可以进行逻辑运算，如AND、OR、NOT等关系。当区域进行运算时软件引进了算术公式的管理概念：
Gate实际了个代数式，简称G,其运算式默认如下：
G1 = R1,或G2=R2
当我们要进行逻辑运算时，可变更为G1=R1 AND R2.此时G1就成了一个算术结果了。
G1=R1 AND R2
G2=R1 NOT R2
G3=R1 OR R2
Region List管理门，可以重命名或删除门。Gate List是对门进行逻辑运算和标识颜色的工具。
建立门与图之间的关系
打开要编辑的直方图或散点图的属性对话框，选择Gate选项，选择门即可。
D,显示统计参数
5.仪器的操作
当计算机与流式细胞仪联机后便会出现以下采集控制框：
在有关仪器操作所有控制选项框都在Cytometer下拉菜单下，同时按住“苹果”键及1、2、3、4便可调取所有控制框：
6.文件的保存及调用
实验或分析过程中所建的方案可以保存下来，通File下拉菜单可以保存这些方案文件：
如要打开这些分析方案只需双建方案图标即可；方案可以分析以往的数据包（前提是方案中的直方图或散点图都已定义成Acquire-Analysis属性），有两种方案打开以往的数据：
方法一：选择直方图或散点图，打开该图的属性框（Plot-》Format），见下图：
在以上红色框标注的地方选择要分析的数据包。
方法二：选中方案中所有的直方图或散点图，打开Plots菜单，选择Chang Data File,打开要分析的数据包。
流式细胞仪数据分析
5.1 数据采集及显示
光信号转换成电压脉冲后，再通过模数转换器转换成为计算机能够储存处理的数字信号。 流式细胞仪的数据以FSC标准格式存储，该标准由“分析细胞学协会”制定。
根据FSC标准，数据存储格式应包括三个文件：样本获取文件，数据设置文件和数据分析结果。 4参数（FSC,SSC,FITC和PE）的单细胞分析会生成8位数据。当单个样品累计收集到10000个细胞时，FCS数据文件为80kB.
数据采集存储完毕后，细胞亚群可以几种不同格式显示。单参数如FSC或FITC（FL1）可使用直方图，横轴表示荧光通道。纵轴表示在该通道内收集到的细胞数量（如图5-1）。处在同一通道的每一细胞均符合该通道的信号值，而且具有相同的信号密度。通道右侧信号的荧光强度明显高于左侧，越靠右侧荧光亮度越强。 图5-1 流式数据分析图
双参数可在二维散点图中同时显示，X轴显示通道1（FL1），Y轴显示通道2（FL2）。3维图通过X,Y,Z三个轴分别显示每个通道的细胞量（如图5-1）。
习题：数据采集及显示
1 在直方图中横轴和纵轴分别表示 .
2 二维点图用于显示 参数。
3 在CellQuest软件中3维图中Z轴代表 .
5.2 设门
通过设门的方法可以定义细胞亚群的区域。如：血样本是混合细胞群，如果想单独分析淋巴球细胞，可根据FSC或细胞大小，在FSC,SSC的散点图中设门，其数据结果只反映淋巴细胞亚群的荧光特性。 图5-2 全血样本中淋巴细胞亚群的数据分析图
习题：设门
1 设门的方法通常用于分析样本内的指定细胞。（对 错）
5.3 细胞亚群的数据分析
数据分析包括从点图中的list-mode文件中显示数据，然后统计点图中的细胞分布情况。如前所述，分别有几种形式的点图用于显示数据，而且可通过设门的方法区分指定的细胞亚群。 如图5-3所示，在淋巴细胞亚群周围设门，以单独分析或分选该亚群细胞。
图5-3 选定淋巴细胞亚群设门
门内细胞的数据结果可在随后的图中显示。在下面的实例中，我们将详尽阐述细胞亚群百分含量的不同分析方法。 我们可以通过单参数直方图，二维点图和三维图来分析结果。单参数直方图可定位边界，二维点图可设置象限标志。如果需要，还可以建立数据统计表以输出结果。 直方图可直观单个参数的细胞数量。阴性对照用于决定直方图中单参数的左右边界（见图5-4）。左图中M1为阴性对照峰。右图中M2为CD3 FITC阳性峰。
图5-4 阴性对照峰M1（NORM001）和CD3 FITC阳性峰M2（NORM002） 图5-5的统计结果表明，整个事件共记录了6000个细胞，门内淋巴细胞2891个。其中M1（阴性）细胞619个，M2（CD3阳性）细胞2272个细胞。淋巴细胞亚群CD3阳性百分含量的统计结果为：M2：2272/2891=78.59%.
图5-5 直方图统计结果
二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图5-6为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。左下象限（LL）为双阴性细胞，左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19 PE），左下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3 FITC），右上象限（UR）为双阳性细胞（CD19+/CD3+）。
图5-6 阴性对照组（NORM001）和CD3 FITC/CD19 PE双染样本（NORM002） 如图5-7所示，淋巴细胞亚群双阳性细胞（CD19+/CD3+）的百分含量为：296/2839=10.43%.
图5-7 散点图统计结果 另一个分析方法是划定区域，也就是设门。我们可以用不同形状的绘图工具定义所选区域（如图5-8所示）；然后统计该区域内指定细胞亚群的百分含量。在图5-9中，R4门内为CD4阳性，CD3阴性的淋巴细胞亚群，其结果为：40/2866=1.40%.
图5-8 CD3 FITC/CD4 PE 双染样本分析图 图5-9 CD3 FITC/CD4 PE 双染样本数据统计结果
这种方法在分析不同的供体细胞时存在一个缺陷，因为如果事先定义好细胞亚群的区域或边界，在随后的文件中，下一个样本的细胞亚群位置会发生变化，这就需要操作者重新调整区域或边界位置。 为避免这种情况的发生，我们采用一种称为集群分析（cluster analysis）的新方法。BD公司的MultiSETTM 和AttractorsTM软件就属于集群分析软件。该软件的特点是会随着整个细胞亚群的移动而移动，自动变换区域或边界到相应的细胞亚群位置（见图5-10）。
图5-10 使用Attractors分析软件时二维点图的前后变化对比
5.4 流式细胞仪的其它应用以及数据分析
这些分析方法通常适用于计算离散细胞群的百分含量，对于分析单克隆细胞株分子是否呈阳性并不适用。因为单克隆细胞株是单个细胞群，在大多数情况下，既不是100%阴性，也不是100%阳性，所以我们通过几何均值法和中位法统计细胞荧光密度和阳性率。如果样本的统计结果远远大于阴性对照组，那么我们认为其结果是阳性的，两者间的差异越大，说明细胞的表达越高，阳性率越高。 如图5-11所示，左图为单细胞群的散射光信号，右图为阴性对照组和两种不同抗体染色样本的峰叠加图。每个峰的几何均值分别为2,5和20（从左至右）。
图5-11 单细胞株分析图 除检测阳性率，几何均值法和中位法还用于分子（接合子）定量分析。
QuantiCALCTM软件就是使用中值法计算每个细胞的抗体结合位点数。如图5-12所示，Y轴上的圆圈代表从标准曲线获取的信息，用于计算每个细胞的接合点位数。 图5-12 使用QuantiCALC软件计算每个细胞的抗体结合位点数 我们使用ModFit LTTM软件进行DNA定量分析。因为DNA峰（G0/G1期，S期和G2M期）不是离散的，所以我们对曲线以下的面积进行积分，以得到每个细胞亚群的百分含量结果。
图5-13 细胞周期的DNA直方图
习题：数据分析
1二维点图和一维直方图的作用分别是什么？
2 见图5-4和图5-5,CD3阴性和阳性的百分含量分别是多少。
3 LL象限代表双阳性细胞亚群。（对 错）
4 见图5-6和图5-7,淋巴细胞（CD3+/CD19-）的百分含量是多少。
5 只能使用矩形设定细胞区域范围。（对 错）
6 使用区域设定法分析样本有哪些不足。
7 避免细胞亚群移动的分析方法是什么。
8 在定量分析中我们使用哪些分析方法检测阳性率。
5.5 CellQuest和CellQuest Pro软件使用
CellQuest和CellQuest Pro软件是目前运用最为广泛的流式细胞仪采集及分析软件。它运行于苹果电脑上，优质的矢量图显示使得操作界面特别优美。现最新的微软公司的Vista软件也是仿苹果操作系统界面的，可想而知在使用CellQuest和CellQuest Pro时的强大功能及视觉质感。CellQuest和CellQuest Pro软件主安装在BD FACSCalibur型流式细胞仪上。
1.软件数据流程
在CellQuest和CellQuest Pro软件的数据流分为二个部分：方案和数据包。方案是指用户可以建立采集或分析所需的直方图或散点图、设门并定义门与门、门与图之间的逻辑关系。可以使用方案进行数据采集或分析以往已有的数据。每个采集方案分析样本后会生成数据包，该数据包中包括了样本中每个颗粒在各个检测参数上的数值，格式为FCS2.0或FCS3.0.
数据包必须由方案文件打开，无法单独显示，或者可由第三方软件进行分析，如WinMDI.
2.软件与仪器的连接
流式细胞仪需要加电开启后会向计算机发出信息，所以如要进行实验需要先开启流式细胞仪，然后再开启计算机。
1、x09先开仪器后开计算机，以确保仪器和计算机之间的正常通讯。
2、x09在苹果菜单下点击CellQuest和CellQuest Pro软件。
3、x09从Aquire菜单下选择connet to cytometer.
3.方案与数据之间的关系
CellQuest和CellQuest Pro软件的方案与数据相互独立保存，数据包可以由任一方案文件进行分析，分析后不改变数据包中的任何数据。CellQuest和CellQuest Pro软件中方案内的直方图或散点图有三种状态：Acquire,Analysis和Acquire-Analysis.
当图的属性为Acquire时，此图只限于采集下用，即只当进行检测时它才能显示颗粒；
当图的属性为Analysis时，此图只限于分析已保存的数据包，它不能用于采集数据。
当图的属性为Acquire-Analysis时，此图即可用于采集数据也可用于分析已有数据。
所以方便起见，我们一般将方案中的直方图或散点图全部设为Acquire-Analysis属性。
CellQuest Pro CellQuest
4.方案的建立
A选择实验参数
默认情况下，FACSCalibur流式细胞仪开机后只打开一根激光器，及五个参数供选择使用：FS、SS、FL1、FL2、FL3.当我们要使用第二根激光器及FL4通道时需要勾选FL4的选项，仪器自动打开633nm激光器。
B,建立散点图或直方图，命名坐标
CellQuest Pro软件主要工作界面，软件类似于Office word的工作面，可在A4大小的页面上进行编辑建立各种直方图或散点图。
在CellQuest软件下，需在选择Plot菜单，选择Format来打开图的属性对话框，其中包括了关于该图所有选项。
建立好直方图或散点图后，我们需要对所选的参数进行命名，如不修改软件自动命名为FS、SS、FL1、FL2、FL3和FL4.
在菜单上选择Acquire栏目，选择Parameter Description,可出现关于文件存储和参数命名的对话框。在这个对话框中用P字母来代表每个参数，并在此对每个采集参数进行命名，FL1为CD3FITC,FL2为CD4PE……
C,设门并建立门与图之间的关系
R与G的关系
R是Region的首个字母，Region一般是指一个闭合形的区域，如矩形区、自由区和圆形区。区域与区域之间可以进行逻辑运算，如AND、OR、NOT等关系。当区域进行运算时软件引进了算术公式的管理概念：
Gate实际了个代数式，简称G,其运算式默认如下：
G1 = R1,或G2=R2
当我们要进行逻辑运算时，可变更为G1=R1 AND R2.此时G1就成了一个算术结果了。
G1=R1 AND R2
G2=R1 NOT R2
G3=R1 OR R2
Region List管理门，可以重命名或删除门。Gate List是对门进行逻辑运算和标识颜色的工具。
建立门与图之间的关系
打开要编辑的直方图或散点图的属性对话框，选择Gate选项，选择门即可。
D,显示统计参数
5.仪器的操作
当计算机与流式细胞仪联机后便会出现以下采集控制框：
在有关仪器操作所有控制选项框都在Cytometer下拉菜单下，同时按住“苹果”键及1、2、3、4便可调取所有控制框：
6.文件的保存及调用
实验或分析过程中所建的方案可以保存下来，通File下拉菜单可以保存这些方案文件：
如要打开这些分析方案只需双建方案图标即可；方案可以分析以往的数据包（前提是方案中的直方图或散点图都已定义成Acquire-Analysis属性），有两种方案打开以往的数据：
方法一：选择直方图或散点图，打开该图的属性框（Plot-》Format），见下图：
在以上红色框标注的地方选择要分析的数据包。
方法二：选中方案中所有的直方图或散点图，打开Plots菜单，选择Chang Data File,打开要分析的数据包。
交通学院123
ftzh5132017-10-05
和传统意义的流式细胞仪是有区别的。本质上就是一个非常简化了的流式细胞仪，只能区别大小和细胞的颗粒程度。没有其他荧光通道
流式细胞仪细胞周期结果分析 实验方法123
█花仔17922021-07-22
（1）细胞培养
取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。
（2）细胞固定
胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇， -20℃固定保存。
（3） 细胞染色
离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A, 4℃避光孵育20分钟。
（4）检测
以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长488nm，计数8千个细胞，结果用软件WinMDI Version 2.9分析。
取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。
（2）细胞固定
胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇， -20℃固定保存。
（3） 细胞染色
离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A, 4℃避光孵育20分钟。
（4）检测
以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长488nm，计数8千个细胞，结果用软件WinMDI Version 2.9分析。
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤123
2017-10-05
在细胞培养液中加入模拟核苷酸EdU （比较老的方法也可以用BrdU）。培养一小时 后，更换为正常的培养液继续培养。模拟核苷酸可以像天然核苷酸一样被细胞摄取并整合入新合成的DNA。
培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。
再加入PI对DNA染色。
在二维坐标图上，横坐标设为线性PI荧光强度，纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度（log）。
典型的图就像下面一样：
G1, G2 和S期就按照图中的划分来做。G1期的细胞没有新合成DNA，所以BrdU信号是阴性，而PI的信号位于1倍体期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是阳性。G2期是已经合成好了2倍的DNA，所以位于2倍体期，信号是G1期的一倍。这个图中，G1 PI信号是300， G2就是600.
培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。
再加入PI对DNA染色。
在二维坐标图上，横坐标设为线性PI荧光强度，纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度（log）。
典型的图就像下面一样：
G1, G2 和S期就按照图中的划分来做。G1期的细胞没有新合成DNA，所以BrdU信号是阴性，而PI的信号位于1倍体期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是阳性。G2期是已经合成好了2倍的DNA，所以位于2倍体期，信号是G1期的一倍。这个图中，G1 PI信号是300， G2就是600.
帮忙看下这张流式细胞仪得到的图是什么意思 胚胎干细胞专区 干细胞...123
总在你在的地方2021-07-23
不明白每幅图的纵坐标和横坐标的意思以及各字母的含义，多谢啦，很急，求专业人士点评，或者有相关文献推荐参考的也可以
流式细胞仪检测细胞凋亡：Annexin V/PI双染色法 实验方法123
fcsm2021-08-16
最近刚开始做实验，想用双染法流式细胞仪检测不同浓度药物对肿瘤细胞凋亡的影响
按照要求检测时设置如下组别：
1.阴性对照组不染
2.补偿1组AV单染
3.补偿2组PI单染
4.无药物处理组双染
5.药物浓度A组双染
6.药物浓度B组双染
那请问1.2.3组的细胞来源是什么？有前辈说应该是4.5.6三组的混合细胞，请问是这样吗？还是用4.组的即可？
另外还有几个小问题：
1.如果检测当天机器坏了，我在哪一步可以用什么固定来推迟检测？听说可以用PFA，多少浓度的？需固定多长时间？多长时间内检测有效？
2.检测前需要在冰上操作吗？
3.对于贴壁细胞，用胰酶消化后，是先吸除胰酶再加培养液，还是消化后直接加培养液？因为感觉吸除胰酶时会不会不小心吸掉一部分细胞？（碧云天的试剂盒的说明书也不一样，AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒说需吸除胰酶，但细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒中说直接加培养液）
流式细胞仪检测细胞凋亡123
茧蝶2021-07-21
过表达质粒转染细胞，以空载质粒做对照，48h后检测对凋亡的影响。请问定象限的时候是用空载质粒的对照组，还是需要用未转染的正常细胞？
13 流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程123
火一样2021-08-05
流式细胞仪所检测的信号有哪些？这些信号所代表的意义是什么？ | 答...123
xmsshx2021-07-29
1、FL1-height 代表FL-1这个信号通道每个信号曲线的高度（代表信号强度）。
2、流式细胞仪（Flow cytometry ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
2、流式细胞仪（Flow cytometry ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
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