- Description
- Additional
Description
Details
Description:Mouse monoclonal antibody to human Monocyte Chemotactic Protein-1 (MCP-1)/ Monocyte Chemotactic and Activating Factor (MCAF)
Purification: Protein G affinity purified
Product Type: Capture antibody in matched antibody pair
Target Protein:Human MCP-1
Immunogen:Purified recombinant human MCP-1
Fusion Myeloma:Sp2/0-Ag14
Specificity:This antibody reacts with natural and recombinant human MCP-1.
Species Reactivity: Human, others not tested.
Cross-reactivity:This antibody does not react with human interleukin-8 (IL-8) and other human cytokines tested such as interleukin-1b (IL-1b), serum amyloid A (SAA) and epidermal growth factor (EGF).
Host / Isotype: Mouse, IgG1 Kappa
Formulation:Lyophilized from a solution in 0.01M PBS, pH 7.2
Reconstitution:Double distilled water is recommended to adjust the final concentration to 1.00 mg/mL.
Storage: Store at -20oC
Research Area:Cytokine, chemotaxis, inflammation
Background:
Monocyte chemotactic and activating factor (MCAF) is also called monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) and chemokine (C-C motif) ligand 2 (CCL2). It is primarily secreted by monocytes, macrophages and dendritic cells. This cytokine displayed chemotactic activity for monocytes, T-cells, and basophils, but not for neutrophils or eosinophils. MCAF causes the degranulation of basophils and mast cells, and augments the activity of monocyte and macrophage. MCAF plays an important role in inflammation, angiogenesis, auto-immune diseases, renal diseases, chronic infection and granuloma formation.
Applications:
ELISA:This antibody can be used as a capture antibody in sandwich ELISA for human MCP-1 detection in combination with anti-MCP-1 clone 101 (MO-C40021D)-derived tracer/detection antibody (HRP-conjugated, Cat. No.: MO-C40021T or Biotin-conjugated, Cat. No.: MO-C40021TB). Approximately 1.5pg/mL of MCP-1 in serum/plasma or 4pg/mL of MCP-1 in medium can be detected with an assay range of 0-1600pg/mL.
Neutralizing:The antibody (clone S14) at a concentration of 0.5μg/mL, neutralized 1nM recombinant human MCP-1 induced monocyte chemotaxis in blind well chemotaxis chambers. It was also found that S-14 could inhibit the activity of native MCP-1 at concentrations similar to inhibitory doses for recombinant MCP-1.
Western Blot: 0.1μg/lane of recombinant human MCP-1 can be detected when antibody is used at 0.1-1μg/mL concentration.
References:
Mehrdad Baghestanian et al. The c-kit Ligand Stem Cell Factor and Anti-IgE Promote Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Human Lung Mast Cells. Blood. December 1, 1997 vol. 90 no. 11 4438-4449.
If research is published using this product, please inform Anogen in order to cite the reference on this datasheet. Anogen will provide one unit of product in the same category as gratitude.
Additional
Additional Information
| Product Specificity | mAb anti-Human MCP-1, S14, Capture |
|---|---|
| Application | ELISA, NT, WB |
| Size | 0.1 mg |
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
取对数生长期的细胞，按1X106个/mL以1mL体积接种于6孔板内。培养24h后，加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的CO2恒温箱中培养24h后终止。
（2）细胞固定
胰酶消化并离心收集细胞（800rpm/min），弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇， -20℃固定保存。
（3） 细胞染色
离心收集细胞（800rpm/min），以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A, 4℃避光孵育20分钟。
（4）检测
以标准程序用流式细胞仪检测，汞激发波长488nm，计数8千个细胞，结果用软件WinMDI Version 2.9分析。
培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。
再加入PI对DNA染色。
在二维坐标图上，横坐标设为线性PI荧光强度，纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度（log）。
典型的图就像下面一样：
G1, G2 和S期就按照图中的划分来做。G1期的细胞没有新合成DNA，所以BrdU信号是阴性，而PI的信号位于1倍体期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是阳性。G2期是已经合成好了2倍的DNA，所以位于2倍体期，信号是G1期的一倍。这个图中，G1 PI信号是300， G2就是600.
过表达质粒转染细胞，以空载质粒做对照，48h后检测对凋亡的影响。请问定象限的时候是用空载质粒的对照组，还是需要用未转染的正常细胞？
2、流式细胞仪（Flow cytometry ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说，它的细节 分辨率为零。
最近刚开始做实验，想用双染法流式细胞仪检测不同浓度药物对肿瘤细胞凋亡的影响
按照要求检测时设置如下组别：
1.阴性对照组不染
2.补偿1组AV单染
3.补偿2组PI单染
4.无药物处理组双染
5.药物浓度A组双染
6.药物浓度B组双染
那请问1.2.3组的细胞来源是什么？有前辈说应该是4.5.6三组的混合细胞，请问是这样吗？还是用4.组的即可？
另外还有几个小问题：
1.如果检测当天机器坏了，我在哪一步可以用什么固定来推迟检测？听说可以用PFA，多少浓度的？需固定多长时间？多长时间内检测有效？
2.检测前需要在冰上操作吗？
3.对于贴壁细胞，用胰酶消化后，是先吸除胰酶再加培养液，还是消化后直接加培养液？因为感觉吸除胰酶时会不会不小心吸掉一部分细胞？（碧云天的试剂盒的说明书也不一样，AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒说需吸除胰酶，但细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒中说直接加培养液）
比如白血病，骨髓瘤，艾滋病治疗的监测（看CD4细胞的水平）等等。
流失细胞仪检测细胞数量，可能会出现红色的结果吗？
类似于天文学上观察星星。光线从星球的背后照射过来。FSC看的是激光照射细胞后，从四周散发的光线，越大的细胞光晕越大。信号也越强
而一些老式 的机器，由于装备的激光数量和检测器都很有限，比如BD calibur这款机器。最高配置也就是蓝色（488nm）和红色（647nm）两种激光。检测4种颜色（通道）。所以为方便起见，就命名为FL1,FL2, FL3和FL4。前三种由于蓝色激光，FL4用于检测红色激光所激发的荧光。其中FL1是检测绿色荧光的（比如FITC，荧光素或者绿色荧光蛋白），而FL2是检测橙色荧光的（比如PI染色）。
