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leicabiosystems
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德国徕卡目前有三款DB80刀片,分别是DB80HS、DB80LS、DB80LX。本文将用视频和文字来介绍这三款产品。LeicaSurgipathDB80系列刀片专为徕卡切片机家族设计,以超乎想象的锋利度、耐用性和稳定性,保证了恒定的切片质量。DB80系列产品的优质性能已通过组织学实验室实地证明,适用于所有轮转式、平推式切片机和冰冻切片机—真正适用于切片机家族的刀片。☆SurgipathDB80LS高级窄刀片为做出明确诊断而切割所需的超薄切片。DB80LS通过锋利的窄刀片、优质的表面处理以及边缘对边缘、刀片对刀片的一致性达到了新的品质高度。产品特点:适用于中度、软组织切片,超锋利、成串性极佳。订货信息: 14035843488Low-profiledisp.bladesDB80LS(1x50)14035843489Low-profiledisp.bladesDB80LS(10x50)☆SurgipathDB80HS高级一次性切片机宽刀片当您需要的组织切片较厚时,就可以将希望寄托于作为宽刀片切片机和冰冻切片机刀片使用的SurgipathDB80HS,其具有锋利、长使用寿命和高度一致性的特征。产品特点:适用于更厚的,超锋利、成串性极佳。订货信息:14035843490High-profiledisp.bladesDB80HS(1x50)14035843491Hig-profiledisp.bladesDB80HS(10x50)☆SurgipathDB80LX高级一次性窄刀片DB80LX的独有特性使其即使面对非常难以切片的组织,包括致密标本在内,也能制作高品质的薄层切片。由于具有精心挑选的材质、精致的涂层和先进的外形,此刀片能够让您快速有效地切片常规标本、活检组织和致密组织。产品特点:适用于所有组织,包括硬组织及致密组织切片,超长使用寿命。订货信息:14035843496Low-profiledisp.bladesDB80LX(1x50)14035843497Low-profiledisp.bladesDB80LX(10x50) 



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2018-07-13
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由于没有没有共聚焦,染核和胞浆的荧光显微镜图片,有什么软件可以把这两个图叠加?
光学显微镜的调试123
黛雏2021-08-01
为了使显微镜的视野能受到均匀而又充分的照明,在显微镜初次安装和调试时,就必须把照明光路系统调整好,这是正确使用显微镜,并获得正确、可*结果的重要手段和最基本的要求。此外,正确掌握照明光路系统的调整,是使用显微镜过程中更换光源灯泡后所必经的步骤,也是在日常使用过程中不时地检验显微镜性能的必要手段。显微镜照明光路系统的调整主要有以下4项内容:
1.照明光源灯室在显微外的初步调整
① 首先将灯室的外壳打开,压弹簧夹子将卤素灯泡装入插座中,安装时避免手指直接接触灯泡(可用柔软的布或纸隔住),以免灯泡上留有指纹等脏物,影响灯泡的使用寿命。
②把灯室摆在桌面上,接通电源后,用专用的螺丝刀调节灯的调焦旋钮孔(标有“←→”),使灯丝投影在1-2m外的墙上,将灯丝成像调至清晰;然后调节灯的高低位置调节丝孔(标有“──”),使灯丝位置高低适当;再调节灯的左右位置调节螺丝孔(标有“──”),使灯丝左右位置合适。
2.光源发光体(灯丝)在显微镜内位置的检验和校正 目的是为了把发光体的像端端正正地调入物镜的视域范围内,从光源的角度去确保显微镜的视域受到充分而均匀的照明,这是调整库勒照明系统的前提条件。需要的基本工具:对中望远镜购置显微镜时已配备。
① 拔掉灯库内的毛玻璃套筒,把灯室装回显微镜上
②选用10×物镜,开亮光源程序找样品并调焦清晰,再换用40×物镜把样品调焦清晰(40×物镜可以看清灯丝的全貌);
③把聚光镜的孔径光阑和视场光阑均开到最大;
④拔掉其中一个目镜,换上对中望远镜,抓住白色部分,另一手伸缩黑色接目镜,就可在视野中看到灯丝像;
⑤如灯丝位置不合适,调“──”孔,把灯丝像沿水平方向调好,调“──”孔,把丝像沿垂直方向调好,直至将灯丝像调至刚好充满物镜孔径的光圆像;
⑥调整完毕后,将毛玻璃套筒插回原位,拔掉对中望远镜,换回目镜作下一步调整。以上所述照明光源灯室在显微镜外的调整和光源发光体在显微镜内位置的校验,只需在显微镜初次安装调试及更换灯泡时进行,平时使用显微镜时不能随意乱调乱动。万一调乱时,可按上述步骤调回原状。
3.库勒照明(Kohler)系统的正确调整 显微镜的正确调试,主要工作之一是照明光路系统的调整,而其中的关键是库勒照明系统的调整。对于每一位使用显微镜的人员,特别是作显微照像的人员来说,应该对库勒照明系统的原理及其调整步骤有一定的了解和掌握,才能充分发挥显微镜应有的功能,拍出来的照片才能在效果上比较一致而又完善。库勒照明系统的原理简单来说就是:光源发光体上任意一点发出的光,可以照明显微镜的视域范围,而光源发光体上每一点所发出的光汇集起来,在显微镜的视域中就实现了非常充分而又均匀的照明。调整库勒照明系统的目的,是为了使所观察的视域能获得均匀而又充分的照明,防止杂散光对照像系统造成影响或干扰,以免照像时在底片形成灰雾。高调整库勒照明系统的必要部件:视场光阑、可进行合轴调整的聚光镜系统。
① 选用10×物镜和10×目镜
② 把聚光镜前端透镜摆进光路中,孔径光阑调至适中的位置上(不大不小),再把聚光镜升到最顶的位置上,聚光镜转盘调至明视野“J”位置
③ 把视场光阑调至最小(0.1)
④ 载物台上放上已封片的生物样品,开亮光源,调焦清晰
⑤ 视域中会出现一个局部照明的区域或亮斑,这是视场光阑的模糊像,在其中可以清晰地看到样品的细节;在它之外是较暗的视域,不一定能把样品的细节看得清楚
⑥把聚光镜微微地向下调,使视野中的亮斑逐渐收小,慢慢变成一个清晰的多边形象,这便是视场光阑的清晰像;
⑦一般情况下,多边形象并不在视域中央,需要调整聚光镜的一对调中螺丝,把视场光阑多边形的像调至中央位置;
⑧逐渐开大视场光阑,使多边形象成为视域的内接多边形,进一步核对调中的状况,如对中不够理想,继续微微调对中螺丝;
⑨将视场光阑稍为再微微开大一些,使它的多边形象恰好消失在视域的边缘上,至此,库勒照明系统调整完毕。库勒照明系统调整好以后,整个视域照明均匀,拍摄的显微照片明亮清晰,反差正常。在日后使用过程中应特别注意: a. 视场光阑不可任意开大,但可随物镜倍数的增大而将视场光阑收小,随物镜倍数的减小而开大; b. 聚光镜的高低位置不准乱调,否则会破坏已调整好的库勒照明系统; c. 使用10×以下物镜时要将聚光镜前端透镜摆出光路外,使用10×或10×以上物镜时要将前端透镜摆入光路中; d. 关于物镜倍数与视场光阑大小配合问题,在实际使用过程中,作为一般观察不一定要收小或开大视场光阑,但作显微照相时,为了避免杂散光线对照相系统的干扰,以便能拍摄到较完善的照片,则应在使用每一个倍数的物镜时,把视场光阑调节到正好消失于所观察的视域边上,这是比较繁复的工作,但又非做不可。较为简便的方法是把与各个倍数物镜相对应的视场光阑事先调整好,并作好记号,以后使用时根据记号直接调至相应的位置。
4.孔径光阑的正确使用 由于聚光镜的孔径光阑可以影响显微镜的分辨率,使用时应掌握正确的使用方法。过去由于对孔径光阑的认识不足,往往把它当作是调节视野亮度的工具。虽然调节孔径光阑在一定程度上可以改变视野的亮度,但会直接影响成像的反差、对比度及分辨率,在使用过程中应尽可能避免。为了发挥聚光镜孔径光阑的作用,以便在观察时,尤其在作显微照相时获得最佳分辨率,在每换用一个倍数的物镜时,在样品调焦清晰后,需要调节孔径光阑,使它的大小正好等于所用物镜数值孔径(物镜孔径像)的2/3 。调整方法是用对中望远镜对焦于视野中黑色相差环上,调节孔径光阑,可以看到一个多边形的孔径光阑像,然后调到等于物镜孔径像的2/3,即介于黑色相差环外与圆形视域内之间。为方便起见,可把与各倍数物镜相对应的孔径光阑预先调整好,并作好标记,以免每次使用都要重新调整。 显微镜成像光路系统的调整,是根据不同显微镜检术的需要而进行的。所谓显微镜检术(microscopy),概括而言就是以显微镜观察样品时所使用的照明方法,以及如何使样品所成的像能获得更良好反差的技术与方法。以下简述显微镜检术中已成熟的几种方法及对应的显微镜成像光路系统的调整方法。
1.透射光明视野:
这是自显微镜发明以来最传统、最普遍的应用方法。基本部件: a. 物镜:任何物镜都可作明视野观察; b. 聚光镜:各种聚光镜均可,最好配有孔径光阑。调整方法:在上述显微镜的库勒照明系统调整好后,即可应用明视野法。适用范围:所有已染色的组织切片、血液涂片等。注意事项: a. 使用明视野方法观察时,一定要将库勒照明系统调整好; b. 视场光阑不可任意开大,使用10×、10×以下和10×以上物镜时,要将聚光镜前端透镜分别摆事实出和摆进光路中; c. 不可用聚光镜的孔径光阑来调节视野的亮度,更不要乱调聚光镜的高低位置,否则,会降低显微镜的分辨率和破坏已调整好的库勒照明系统; d. 作显微照相时,每换用一个倍数的物镜,就要调节聚光镜的孔径光阑,使它的大小正好等于所用物镜数值孔径的2/3 。
2.透射光相差法:
这是现代显微镜检术中的一种反差增强法。基本部件:相差物镜、明视野与相差兼用的多用途聚光镜、对中望远镜、绿色滤光片。
调整方法:
a. 在库勒照明系统调整好的基础上,用明视野方法把样品调焦清晰
b. 把聚光镜转到Ph1对准转盘刻度线位置,选用10×相差物镜,换上待观察的透明样品
c. 拔掉其中一个目镜,换上对中望远镜,并调焦于视野中的两个相差环上(物镜的黑色相差环和聚光镜的透光相差环)
d. 视野中的两个相差环不一定重合,调节聚光镜上的两个调节装置(调整相差环左右位置的调节杆和调整前后位置的摩擦式转钮),使透光环作前后左右移动而与黑环重合
e. 调整好后,换回观察用目镜,将绿色滤光片按入光路中,即可观察到样品的相差像
f. 有20×和40×物镜观察时,聚光镜应设在Ph2位置上,用100物镜时,聚光镜应设在Ph3位置上。
适用范围:适用于观察透明、未染色或不能染色的样品,如各种细胞、活组织、未染色或不染色的组织切片、水生生物等。
3.微分干涉相衬法:
为了克服相差法观察时样品细节像周围伴随有光晕,会掩没掉本来应该看见的细节,以及样品或组织切片厚度要求相当薄,原则上下能厚于10?m等局限性,利用双光束干涉的原理设计子微分干涉相衬法。
调整方法:
a. 必须在库勒明系统已调好的基础上才能调好DIC方法
b. 先用10×物镜,以明视野先确定好能把样品看清晰的物镜调焦位置
c. 把起偏器(polarizer)摆入照明光路中,注意其取向应为东—西方向
d. 把聚光镜转盘转到与10×物镜对应使用的位置上,即DIC 0.3—0.4
e. 在物镜后方或物镜转换器上插入10×物镜使用的DIC插片(DIC slider)
f. 把检偏器(analyser)插入成像光路中,注意其取向应为南—北方
g. 换上待观察的透明样品,开亮光源把样品调焦清晰
h. 调节DIC插片,使微分干涉相衬的像达到最佳效果,也就是浮雕效果最为明显
i. 同时可调节聚光镜的孔径光阑,使反差的效果也达到最佳
j. 然后再细微调样品的细节,可见样品中不同层面上的结构
k. 如果把补色器(first order red retardation plate)插入,并同时调节DIC插片,可在视野中看到不断变化的绚丽色彩,红、橙、黄、绿、蓝、紫、粉红、粉紫及金黄色都具有。适用范围:透明或不能染色的组织切片,厚度可达100?m左右,培养中的活组织和活细胞、小生生物等。
4.落射光激发的荧光法(incident-loght fluorescence Epi-FL):
简称为落射荧光法,是近代显微镜检术中新发展出来的一种强有力的反差增强法。它将激发荧光用的光源改在物镜的上方,光由物镜上方经反光镜射入物镜去激发样品,从样品上被激发的荧光经物镜成像并穿透反光镜而由目镜观察。该方法较简便,效率高,50W的光源强度比透射荧光法的250W还强。荧光方法是利用波长较短的紫外光、紫光、蓝紫光、蓝光及绿光等去激发样品,只要样品中含有可产生荧光的成分,它便吸收短波的激发光而释放出波长较长的荧光。不同物质只能吸改特定波长的激发光,而释放的荧光也会有特定的波长,因而用作特异性的鉴定十分有效,如某些致病的细菌和螺旋体,受紫外光激发后能发出它们特有的荧光,很容易作出鉴定,这种利用物质吸收激发光后放出特有荧光的方法称为自发荧光法。某些物质自身不会吸收激发光,或吸收后不能释放荧光,但可以吸收或吸附特定的荧光色素或染料,而这些特定的荧光色素或染料也只能吸收特定的激发光,再释放出特定的荧光,从而间接地鉴别出某种物质,这称为间接荧光法。上述荧光方法广泛应用于医学、生物学及工业的特异性研究和鉴别上。调整方法:荧光显微镜或附有荧光部件的显微镜,调整的方法大致相同。
① 汞灯的安装:
a. 打开包装,取出汞灯将其小心安装在上电极散热帽上,安装时注意手指不能直接接触灯管和散热帽的正面,汞灯的封气口要对向散热帽的左侧或右侧
b. 把汞灯的上电极引张安装并固定在散热帽底面的小孔上,再把汞灯的下电极及上电极引线另一端,分别安装在灯座上各自的插孔中并固定
c. 锁紧散热片上的螺丝后,把汞灯连同灯座及散热帽小心装入灯室中,锁紧相应的螺丝,再把灯座上的连线和插座插到汞灯电源后部专用的插座上。
d. 详细的安装方法请参照有关说明书。
② 汞灯灯室在显微镜外的初步调整:
a. 接通汞灯电源,让汞灯预热10-15min
b. 把汞灯灯室摆放在桌面上,让汞弧投影到2-3m外的墙上,划一条与灯室窗口中心线对地高度一样的水平线作为参考线
c. 转动灯室调焦旋钮,使汞弧的像清晰地投影于墙上
d. 分别调节灯室外壳上的5个调节螺丝孔,把汞弧的像其反射像调成并排且尽量*近,但不要重叠在一起。
③汞灯汞弧在显微镜内位置的检验:
a. 将汞灯照明光路系统中的视场光阑开到最大
b. 把荧光滤光片组推到蓝光激发的位置上,以避免汞灯中的蓝光太刺眼
c. 把观察的样品或一块载玻片放在物台上,盖上一张比盖玻片稍大且洁白的薄纸
d. 取下一个物镜,使激发的蓝光经物镜转换器的空档照在白纸上,白纸上会有一蓝色的圆形照明区域,汞弧的像及其反射像都应该出现在这区域的中央部位,否则,可调节灯室调焦旋钮至最清晰,然后分别调节灯室外壳上的5个调节螺丝孔,直至汞弧的像及其反射像并排在照明区域的中央位置。
e. 调好之后,把物镜装回去,通过目镜可见白纸被蓝光激发后发射出的黄绿色荧光
f. 仔细调焦,可看清白纸的纤维;取去白纸,样品上的荧光细节隐约可见而很容易调焦清晰。
④汞灯使用注意事项 通常使用的为50W超高气压汞灯,灯管内通有一对钨电极和液态汞(室温下附在管壁上),未点燃时,管内气压很低,在灯管的两电极间施加电压角发点燃后,汞气化为汞蒸气形成汞弧而产生强光,温度升高,管内气压迅速升到10个大气压。由于是高气压的气体放电,必须了解其特性才能安全地使用汞灯。
a. 汞灯接通电源后需要10-15min预热时间,汞才能充分汽化并形成汞弧,产生高亮度而稳定的激发光。因此,观察前要提早通电
b. 汞灯在使用过程中,不要随意开关汞灯的电源
c. 关掉汞灯电源后,必须等待15-20min,待汞灯自燃冷却后才可再次接通电源,违反这一操作规定时,将会造成严重后果!由于汞灯内的汞蒸气未完全液化,汞蒸气内阻很小,一旦通电在两电极间施加电压,汞灯内形成强大的电流,轻则烧断保险丝或烧毁汞灯电源中的扼流圈,重则汞灯爆炸,汞蒸气弥漫整个实验室,造成工作人员中毒,不仅损失了汞灯,还会炸毁灯室内的集光-聚光部件。
d. 汞灯的使用寿命一般只有300h,使用得当可达600h,使用寿命与开关的次数成反比,应集中一批样吕作2-3h的观察。汞灯价格及昂贵,应珍惜使用。
e. 汞灯寿命终结的标志是点燃困难,灯管发黑。
5.暗视野法(dark field):
许多透明或半透明的样品,如细菌、微生物、细胞内的精细结构及结晶体的内含物等,在明视野显微镜中不容易看清楚,如果采用暗视野法就可以大大提高样品的可视度。以暗视野法所看到的是衬托在黑暗视野背景中发亮的样品轮廓及其细节。普遍光学显微镜的最高分辨率为0.2μm,而暗视野显微镜虽然对样品的细节构造分辨不清楚,但却可看到0.004μm以上微细颗粒的存在,即可以看到亚显微结构,特别适合用来观察微细的颗粒与细菌等。调整方法:暗视野法的主要必需部件是暗视野聚光镜。使用时须先用明视野聚光镜把库勒照明系统调整好。换上暗视野聚光镜时,要把载玻片(样品)移开,将浸没油滴在聚光镜顶部,再把样品载玻片搁在物台上,浸没油便充填在两者之间,这种聚光镜须与装有可变光阑的100×油镜配用。另一种中倍率干式暗视野聚光镜可与中倍率的物镜配用,这种聚光镜具有中央光挡,照明光只能透过光档与聚光镜边缘之间的透光环才能进入聚光镜内。对于配备齐全的相差显微镜,与编号为Ph3物镜配用的相差聚光镜相差环,可以和10×及10×以下的相差物镜配用而形成低倍率的暗视野效果。向左转|向右转
德国学者宾尼格和瑞士学者罗雷尔于1982年制造成功的“扫描隧道显微镜”,放大倍数可达3亿倍。

普通光学显微镜通过提高和改善透镜的性能,使放大率达到1000—1500倍左右,但一直末超过2000倍。这是由于普通光学显微镜的放大能力受光的波长的限制。光学显微镜是利用光线来看物体,为了看到物体,物体的尺寸就必须大于光的波长,否则光就会 “绕”过去。理论研究结果表明,普通光学显微镜的分辨本领不超过0。02微米,有人采用波长比可见光更短的紫外线,放大能力也不过再提高一倍左右。
要想看到组成物质的最小单位——原子,光学显微镜的分辨本领还差3—4个量级。为了从更高的层次上研究物质的结构,必须另辟蹊径,创造出功能更强的显微镜。

有人设想用波长比紫外线更短的X射线的透镜。

20世纪20年代法国科学家德布罗意发现电子流也具有波动性,其波长与能量有确定关系,能量越大波长越短,比如电子学1000伏特的电场加速后其波长是0.388埃,用10万伏电场加速后波长只有0.0387埃,于是科学家们就想到是否可以用电子束来代替光波?这是电子显微镜即将诞生的一个先兆。

用电子束来制造显微镜,关键是找到能使电子束聚焦的透镜,光学透镜是无法会聚电子束的。

1926年,德国科学家蒲许提出了关于电子在磁场中运动的理论。他指出: “具有轴对称性的磁场对电子束来说起着透镜的作用。”这样,蒲许就从理论上解决了电子显微镜的透镜问题,因为电子束来说,磁场显示出透镜的作用,所以称为 “磁透镜”。

德国柏林工科大学的年轻研究员卢斯卡,1932年制作了第一台电子显微镜——它是一台经过改进的阴极射线示波器,成功地得到了铜网的放大像——第一次由电子束形成的图像,加速电压为7万,最初放大率仅为12倍。尽管放大率微不足道,但它却证实了使用电子束和电子透镜可形成与光学像相同的电子像。

经过不断地改进,1933年卢斯卡制成了二级放大的电子显微镜,获得了金属箔和纤维的1万倍的放大像。

1937年应西门子公司的邀请,卢斯理建立了超显微镜学实验室。1939年西门子公司制造出分辨本领达到30埃的世界上最早的实用电子显微镜,并投入批量生产。

电子显微镜的出现使人类的洞察能力提高了好几百倍,不仅看到了病毒,而且看见了一些大分子,即使经过特殊制备的某些类型材料样品里的原子,也能够被看到。

但是,受电子显微镜本身的设计原理和现代加工技术手段的限制,目前它的分辨本领已经接近极限。要进一步研究比原子尺度更小的微观世界必须要有概念和原理上的根本突破。

1978年,一种新的物理探测系统—— “扫描隧道显微镜已被德国学者宾尼格和瑞士学者罗雷尔系统地论证了,并于1982年制造成功。这种新型的显微镜,放大倍数可达3亿倍,最小可分辨的两点距离为原子直径的1/10,也就是说它的分辨率高达0.1埃。

扫描隧道显微镜采用了全新的工作原理,它利用一种电子隧道现象,将样品本身作为一具电极,另一个电极是一根非常尖锐的探针,把探针移近样品,并在两者之间加上电压,当探针和样品表面相距只有数十埃时,由于隧道效应在探针与样品表面之间就会产生隧穿电流,并保持不变,若表面有微小起伏,那怕只有原子大小的起伏,也将使穿电流发生成千上万倍的变化,这种携带原子结构的信息,输入电子计算机,经过处理即可在荧光屏上显示出一幅物体的三维图象。

鉴于卢斯卡发明电子显微镜的,宾尼格、罗雷尔设计制造扫描隧道显微镜的业绩,瑞典皇家科学院决定,将1986年诺贝尔物理奖授予他们三人。
请问各位战友头戴式显微镜(700多块钱,2.5倍)可以用来联系血管吻合吗
相关疾病:血栓形成骨折好长时间没有发帖子了!!独立主刀做了一些手术:从简单的清创缝合、骨折内固定、皮瓣转移到显微镜下的缝合...
简易显微镜如何制作? 123
静寂丶烟岭丿2017-12-03
如何制作一个简易显微镜?已有:一个5mm凸透镜一个25mm凸透镜。
请问如何制作一个简易的显微镜?
最好有一个光路图
物镜和目镜的距离如何计算?
分辨率 显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距,又称"鉴别率"。其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离;λ为光线的波长;NA为物镜的数值孔径。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大,照明光线波长越短,则σ值越小,分辨率就越高。要提高分辨率,即减小σ值,可采取以下措施:(1) 降低波长λ值,使用短波长光源。(2)增大介质n值以提高NA值(NA=nsinu/2)。(3) 增大孔径角u值以提高NA值。(4) 增加明暗反差。
视频显微镜也叫做数码显微镜也是光学仪器的一款类型,它是将显微镜看到的实物图像通过数模转换,使其成像在显微镜自带的屏幕上或计算机上。它的立体感强,成像清晰和宽阔,又具有长工作距离,并是适用范围非常广泛的常规显微镜。今天显微镜小编就为大家讲解一下它的使用步骤教会大家使用视频显微镜。
1,先把视频显微镜的几个大的零件准备好,先把万向支架组装起来,在这里要注意镜头和相机的支架应该在下面,支持显示器的支架要放到上面,这样便于观察。
2,把镜头安装在万向支架上面,安装到有一个圈的里面,正好固定镜头,镜头是比较脆弱的,所以安装的时候千万要小心,然后再把相机安装到镜头的上面,哪里有接口直径插上就可以了,这一步是很重要的,千万小小心。
3,支架和镜头安装好以后然后把显示器固定好,固定好以后,再把一些链接线连上这样就可以了。
相关疾病:病例讨论:欢迎各位老师发表自己的见解!病史:韦某因精子质量差行显微镜下左侧精索静脉结...
看不到病毒的。

解释如下:
因为病毒很小。多数单个病毒粒子的直径在100nm左右,也就是说,把10万个左右的病毒粒子排列起来才可能用肉眼勉强看得到。
 病毒如此细小,绝大多数病毒必须借助电子显微镜才能观察,电子显微镜的分辨率是光学显微镜的1000倍。不同病毒间大小差异很大。最小的如植物的联体病毒(Geminiviruses)直径仅18-20nm,最大的动物痘病毒(Poxviruses)大小达300-450nm×170-260nm,最长的如丝状病毒科(Filoviridae)病毒粒子大小为80nm×790-14000nm。
光学显微镜的分辨距离为d=0.61λ/NA 式中
d——物镜的分辨距离,单位 nm。
λ——照明光线波长,单位 nm。
NA ——物镜的数值孔径
例如油浸物镜的数值孔径为1.25,可见光波长范围为400—700nm ,取其平均波长550 nm,则d=270 nm,约等于照明光线波长一半。一般地,用可见光照明的显微镜分辨力的极限是0.2μm也就是200nm,大于病毒的直径,因此用光学显微镜是看不到病毒的。
细菌就比病毒大得多,单个球菌的直径约在0.8~1.2μm左右,大多数杆菌中等大小长2~5μm,宽0.3~1μm,在光学显微镜的可观测范围内。

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是近年来迅速发展起来的一种新型高精度显微镜,不仅用于观察经固定的各种细胞和组织结构,而且还可对活细胞的形态、结构,离子的实时动态等进行观察和定量荧光测定,以及定量图像分析。目前国内LSCM技术应用前景广泛,并且发表众多具影响力的文章。为了推动LSCM技术的创新发展、促进相关人员技术的提升,我们特此制定激光共聚焦显微镜高级应用培训,面向生物医药领域从事成像技术方法创新的科研人员和成像平台管理者,充分发挥现有成像设备的作用,通过理论加实践的系统学习,最大限度地掌握该技术的使用方法,独立判断与排除科研常见问题和障碍。

2017年8月26日星期六
08:30-08:45报道
08:45-08:50欢迎致辞
08:50-09:05清华大学细胞影像中心介绍
09:05-09:45光学显微镜的选择和如何拍出高质量共聚焦图像王文娟
09:45-10:15休息与讨论
10:15-11:00多色影响与荧光光谱扫描及线性分析孙悦
11:00-11:45荧光漂白后恢复(FRAP)冯倩倩
11:50-13:30午餐
13:30-16:30上机操作培训(根据情况进行分组操作)
8:30-8:45学习内容回顾与总结
2017年8月27日星期日
09:00-09:15培训回顾
09:15-10:00荧光共振能量转移(FRET)王瑾瑜
10:00-10:45转盘共聚焦显微镜成像张彦丽
10:40-11:00休息与讨论
11:00-11:50图像处理基础与荧光共定位分析王文娟
11:50-13:30午餐
13:30-16:30上机操作培训(根据情况进行分组操作)
8:30-8:45学习内容回顾与总结
2017年8月28日星期一
09:00-09:30培训回顾与总结
09:30-10:00培训测验
10:00-10:30颁发证书
10:30-10:40合影

清华大学细胞影像中心是在生命学科校级平台(清华大学生物医学测试中心、清华大学蛋白质研究技术中心)范围内、跨中心、多平台联合组建的虚体技术中心,简称细胞影像中心。中心包括的平台有:生物医学测试中心细胞生物学平台光学显微镜机组、共享仪器平台光学显微镜机组、尼康生物影像中心、蛋白质研究技术中心细胞影像平台。细胞影像中心作为一个综合型光学成像平台,以科研服务为宗旨,主要提供细胞生物学影像及分析测试服务。包含的仪器有:激光扫描共聚焦(Confocal:Zeiss、Nikon、Leica、Olympus)、转盘共聚焦(SpinningDiskConfocal)、激光显微切割、双光子显微镜、超高分辨SIM/STORM/STED、全内反射(TIRF)荧光显微镜、荧光寿命成像-荧光相关光谱系统(FCS/FLIM)、高分辨活细胞成像系统、活细胞工作站、全自动数字玻片扫描系统和图像处理工作站(软件有Imaris,Image-ProPremier/Plus,Huygens,AutoQuant,MetaMorph和NIS-Elements等),为实验提供一站式的解决方案。


转盘共聚焦显微镜拍摄,发表于Eph/ephrinsignalingmaintainstheboundaryofdorsalforerunnercellclusterduringmorphogenesisofthezebrafishembryonicleft-right
使用Nikon超分辨率显微镜拍摄,N-SIM显微镜显示NRK细胞稳定的表达线粒体标记20-GFP。标尺,1μm。WangC,DuW,YuLi*,etal.Dynamictubulationofmitochondriadrivesmitochondrialnetworkformation[J].Cellresearch,2015,25(10):1108.
使用ZeissLSM710激光共聚焦显微镜拍摄,图为人眼晶状体祖细胞中的晶状体球蛋白聚集体。绿色:绿色荧光蛋白和晶状体球蛋白融合蛋白;红色:P62蛋白;蓝色:细胞核;标尺:10μm。发表于Lanosterolreversesproteinaggregationincataracts.Nature,2015(523),607-611
使用ZeissLSM780激光共聚焦显微镜拍摄,图为酿酒酵母十二号染色体的设计与合成。发表于ZhangW,ZhaoG,LuoZ,etal.EngineeringtheribosomalDNAinamegabasesyntheticchromosome.[J].
王文娟博士清华大学细胞影像中心主任,高级工程师。毕业于北京大学,美国纽约大学医学中心博士后,主要从事光学显微成像和图像处理技术。技术专长:1.光学显微镜技术用于生物医学的研究,包括激光共聚焦、超高分辨、全内反射和荧光寿命成像等技术。2.单分子成像光学仪器搭建与单分子荧光成像3.图像处理、展示和数据分析。
冯倩倩共享仪器平台主管,工程师。技术专长:激光共聚焦显微镜影像技术
孙悦共享仪器平台主管,工程师。技术专长:激光共聚焦显微镜、全自动数字玻片扫描和双光子成像技术
王瑾瑜尼康生物影像中心负责人,工程师。技术专长:光诱导蛋白相关技术(FRET、FRAP、PA-GFP等)和超高分辨率技术
张彦丽张彦丽,工程师。技术专长:转盘共聚焦成像、双光子成像
培训时间:2017年8月26日-28日
报到时间:2017年8月25日12:00-18:002017年8月26日08:00-08:45
培训地点:清华大学生物技术馆会议室

报名费用:
单人:3000元/人
两人:2400元/人
三人及以上:2000元/人
(含注册费、培训费、资料费、茶歇费、午餐费)主办方可协助学员预定住宿(费用自理,需提前一周预定)
报名截止时间:8月20日
在线报名链接:http://www.damor.cn/app/wap-activity/sign-up/index.html


历经3年多的协同奋战,北京大学联合中国人民解放军军事医学科学院组成跨学科团队,成功研制新一代高速高分辨微型化双光子荧光显微镜,重量仅为2.2克。该科研团队通过这一微型显微镜获取了小鼠在自由行为过程中大脑神经元和神经突触活动清晰、稳定的图像。原始论文于5月29日在线发表于《自然》杂志子刊NatureMethods。

5月31日上午的发布会上,程和平院士进行了详细介绍。新一代微型化双光子荧光显微镜体积小,重仅2.2克,适于佩戴在小动物头部颅窗上,实时记录数十个神经元、上千个神经突触的动态信号。

在大型动物上,还可望实现多探头佩戴、多颅窗不同脑区的长时程观测。相比单光子激发,双光子激发具有良好的光学断层、更深的生物组织穿透等优势,其横向分辨率达到0.65μm,成像质量与商品化大型台式双光子荧光显微镜可相媲美,远优于目前领域内主导的、美国脑科学计划核心团队所研发的微型化宽场显微镜。

采用双轴对称高速微机电系统转镜扫描技术,成像帧频已达40Hz(256*256像素),同时具备多区域随机扫描和每秒1万线的线扫描能力。此外,采用自主设计可传导920nm飞秒激光的光子晶体光纤,该系统首次实现了微型双光子显微镜对脑科学领域最广泛应用的指示神经元活动的荧光探针(如GCaMP6)的有效利用。同时采用柔性光纤束进行荧光信号的接收,解决了动物的活动和行为由于荧光传输光缆拖拽而受到干扰的难题。未来,与光遗传学技术的结合,可望在结构与功能成像的同时,精准地操控神经元和神经回路的活动。

微型化双光子荧光显微成像改变了在自由活动动物中观察细胞和亚细胞结构的方式,可用于在动物觅食、哺乳、跳台、打斗、嬉戏、睡眠等自然行为条件下,或者在学习前、学习中和学习后,长时程观察神经突触、神经元、神经网络、远程连接的脑区等多尺度、多层次动态变化。

《中国科学报》记者了解到,该成果在2016年底美国神经科学年会、2017年5月冷泉港亚洲脑科学专题会议上报告后,得到包括多位诺贝尔奖获得者在内的国内外神经科学家的高度赞誉。

冷泉港亚洲脑科学专题会议主席、美国著名神经科学家加州大学洛杉矶分校的AlcinoJSilva教授在评述中写道,“从任何一个标准来看,这款显微镜都代表了一项重大技术发明,必将改变我们在自由活动动物中观察细胞和亚细胞结构的方式。它所开启的大门,甚至超越了神经元和树突成像。系统神经生物学正在进入一个新的时代,即通过对细胞群体中可辨识的细胞和亚细胞结构的复杂生物学事件进行成像观测,从而更加深刻地理解进化所造就的大脑环路实现复杂行为的核心工程学原理。毫无疑问,这项非凡的发明让我们向着这一目标迈进了一步。”

据悉,目前,该研发团队正在领衔建设“多模态跨尺度生物医学成像”十三五国家重大科技基础设施,积极参与即将启动的中国脑科学计划。可以期待,微型化双光子荧光显微成像系统将为实现“分析脑、理解脑、模仿脑”的战略目标发挥不可或缺的重要作用。