
PRODUCT SPECIFICATION
Product# 31010: Murine Anti-Dengue D1 NS1 Monoclonal Antibody
SPECIFICATIONS APPLICATIONS
Antibody Class: Clone IgG ELISA, Western ELISA
Concentration: See vial Lateral Flow Diagnostics
Mass/vial: 100µg
Purity: >95%
Stabilizer: None
Preservative: None
Physical State: Frozen Liquid
Storage: -75oC
Stability: At least 12 months at-75oC
DESCRIPTION: High affinity murine anti-dengue D1 NS1 specific mAb.
SPECIFICITY: Binds to native and recombinant dengue D1 NS1 antigen as determined ELISA and Western ELISA. Suitable for NS1 detection by lateral flow test.
BIOLOGICAL ACTIVITY: Not Determined
APPLICATIONS AND INSTRUCTIONS FOR USE
Recommended dilutions for use are approximate values. A dose dependent response assay should be performed to determine the optimal concentration for use in specific applications.
ELISA may be performed at 10-100ng/ml of mAb depending on the amount of immobilized antigen in the assays. Western ELISA requires 1-5µg of mAb/ml.
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1机械法:主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法,常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。
1.1组织捣碎机
将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等,转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。
1.2匀浆器
先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。制作匀浆器的材料,除玻璃外,还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。
存在的问题;较易造成堵塞的团状或丝状真菌,较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器,质地坚硬,易损伤匀浆阀,也不适合用该法处理。
1.3. 研钵
多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨剂,以提高研磨效果。
1.44. 细菌磨
是一种改良了的研磨器,比研钵具有更大的研磨面积,而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。
2 物理法
主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有:
2.1. 反复冻溶法
原理:因突然冷冻,细胞内冰晶的形成及胞内外溶剂浓度的突然改变而破坏细胞。
方法:将待破碎的细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。
特点:此法适用于组织细胞,多用于动物性材料,对微生物细胞作用较差。
2.2. 急热骤冷法
将材料投入沸水中,维持85-90分钟,至水浴中急速冷却,此法可用于细菌及病毒材料。
2.3. 超声波处理
用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,频高于15~20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。
行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。
特点:操作简单,重复性较好,节省时间;多用于微生物和组织细胞的破碎。
存在问题:超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递,散热均有困难,应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。空化作用是细胞破坏的直接原因,同时会产生活性氧,所以要加一些巯基保护剂。展开
加trizol,之后,还需要用玻璃匀浆器磨么?
个人觉得没有必要,如果需要的话是为什么呢?是怕组织没有完全破碎么?
谢谢大家了!
本人实验新手,用玻璃匀浆器提取组织蛋白。但组织的量不是很多,加入的裂解液也不多,匀桨后裂解液包含着组织都粘在玻璃管壁上,怎么样取出我的蛋白?能离心吗,匀浆器这种玻璃管子能离心吗?
动物组织块冻存在液氮,取出后放到1.5mlEP管中,EP管中加入RIPA裂解液(按照0.1mg组织最多1ml裂解液的体积使用,用前已加入PMSF),使用电动组织研磨器研磨,每次研磨时间10秒左右,研磨过程中发现蛋白质起泡,就像做蛋糕时鸡蛋被打出泡一样。请问如何避免这种情况?
PS,本来试着在冰上操作,但是电动组织研磨器工作时EP管震动的很厉害,没法放在冰上。

