日本EVATECH株式会社液晶设备
| 实验材料 | 在二维凝胶电泳中分离的蛋白质 试剂、试剂盒 | 胶内胰酶消化缓冲液三氟乙酸（TFA) 仪器、耗材 | 冷冻干燥离心机小离心管水浴锅 实验步骤 | 1.切下凝胶上的蛋白质点，放人小离心管中。 2.以0.lmol/LNH4HCO3、50%乙腈（用于胰酶）或0.05mol/LTris-HCl(PH9.3)、50%乙腈（用于Lys-Q各1ml，清洗凝胶2次，以去除多余的考马斯亮蓝染液。 3.离心冷冻干燥，使每一片凝胶完全干燥。当完全干燥时，每一片凝胶应不会粘到离心管壁上。 4.加入10ul的含有0.5ug适当蛋白酶的消化缓冲液，直接倾到干燥的凝胶片上，使其重新湿润。 5.静候10~20min，直到溶液完全被凝胶吸收。 6.如果需要，重复步骤④和步骤⑤，使凝胶充分膨胀。 7.加入200沁消化缓冲液，彻底覆盖凝胶片。 8.35°C孵育16h。 9.小心倾出消化缓冲液（现在应称其为抽提液），注人一个干净的小离心管中。 消化缓冲液中含有超过80%的可提取肽段。 10.凝胶片中加入200ul0.1%TFA、60%乙腈。 11.把含有凝胶片的小离心管室温孵育30min。 12.仔细吸取抽提液，与步骤⑨得到的抽提液混合起来。 13.通过冷冻干燥作用，减少抽提液的体积。不要彻底干燥提体液，否则会造成样品损失。 这一步的目的是去掉抽提液中的乙腈，以减小后面稀释并注射到毛细管RP-HPLC系统中的样品体积 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-05
阅读（383）
▍
相关分类
▍
相关文章
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验——照相、凝胶干燥资讯分析测试...
固相化pH梯度双向凝胶电泳实验17资讯
NZMP » GlobalDairyTrade
什么是细胞因子?
Amplite™ Fluorimetric Goat AntiRabbit IgGHRP Conjugate ELISA ...
5.2.2乙二醛/DMSO变性琼脂糖凝胶电泳
日本EVATECH株式会社液晶设备
Pouring Plates细菌实验
Aviva Systems品牌简介 (Aviva Systems Biology ) 抗体;生物 ...
【2020年华诺森（武汉）生物医药技术有限公司最新招聘信息 ...
Dylight 549, Goat AntiRabbit IgG(H+L)_二抗上海北诺生物科技...
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
▍
相关问答
