
【求助】丙酮沉淀蛋白后,关于蛋白质溶解的问题。急!
2021-07-20
问题描述:
各位大侠:由于本人是初学者,请多多指教。我现在在做血浆蛋白质的分离,样品经丙酮沉淀后,发现用裂解液溶解蛋白质很难溶解。我想能否用超声裂解呢?请各位专家帮帮忙分析分析,十分感谢。
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andypei5


我也曾经遇到过这个问题。也用超声裂解过。效果不是很好。我觉得主要问题是蛋白沉淀后不用太干了,干了就很难溶解。

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鸡蛋青菜面


是阿,可以在沉淀刚刚形成的时候就溶解,然后要用超声超然后再离心用上清效果还好

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zhaopei1023


我也是刚开始做,但是有点经验可以跟大家一起分享一下:)我做完TCA丙酮沉淀后,先用水化液溶解,用枪头吹打一下,然后振荡一下,放在4度过夜,第二天看的时候沉淀基本就溶解了,然后再离心一下,取上清就可以直接用于上样了:)

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leimk


丙酮有残留时蛋白不易溶解,可用电吹风吹干后溶解。电泳前最好离心一下,上清用于点样,未溶解的物质会造成拖尾。

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tssunny


谢谢各位的帮助!

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xinhongbao1984


直接用水化液溶,超声一下,再放在30度的金属浴中,溶的效果会很好的

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tssunny


请问什么是金属浴啊!30度的高温蛋白质不会降解吗?

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keyan1809


经过有机溶剂沉淀后,有些蛋白就无法溶解了。即使用超声,也只是形成微粒(肉眼未必看见)悬浮在溶液中。

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董楠cherry


我也是用丙酮沉淀的蛋白,然后用5%的SDS在65℃水浴锅中溶解的,溶解的还可以。但是有一个问题,之前用RIPA裂解液裂解的时候需要加蛋白酶抑制剂,磷酸化酶抑制剂。现在不知道怎么加这个?可以给SDS中加吗?求高手解答
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