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StressMarq/Anti-GRP78 Antibody [1H11-1H7]/SMC-195D-A700/100-µg
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StressMarq/Anti-GRP78 Antibody [1H11-1H7]/SMC-195D-A700/100-µg
品牌 / 
StressMarq
货号 / 
SMC-195D-A700
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Overview:

Product Name GRP78 Antibody
Description

Mouse Anti-Human GRP78 Monoclonal IgG2b

Species Reactivity Human, Monkey, Mouse, Rat, African clawed frog (Xenopus laevis), Bovine, Chestnut Blight (Cryphonectria parasitica), Fungi, Hamster, Rabbit
Applications WB, ICC/IF
Antibody Dilution WB (1:2000), ICC/IF (1:100); optimal dilutions for assays should be determined by the user.
Host Species Mouse
Immunogen Species Human
Immunogen His-tagged human GRP78
Concentration 1 mg/ml
Conjugates Alkaline Phosphatase, APC, ATTO 390, ATTO 488, ATTO 565, ATTO 594, ATTO 633, ATTO 655, ATTO 680, ATTO 700, Biotin, FITC, HRP, PE/ATTO 594, PerCP, RPE, Streptavidin, Unconjugated

Properties

Storage Buffer PBS pH7.4, 50% glycerol, 0.09% sodium azide
Storage Temperature -20ºC
Shipping Temperature Blue Ice or 4ºC
Purification Protein G Purified
Clonality Monoclonal
Clone Number 1H11-1H7
Isotype IgG2b
Specificity Detects ~78kDa.
Cite This Product StressMarq Biosciences Cat# SMC-195, RRID: AB_10964368
Certificate of Analysis 0.5 µg/ml of SMC-195 was sufficient for detection of Grp78 in 10 µg of rat tissue lysate by ECL immunoblot analysis.

Biological Description

Alternative Names 78 kDa glucose regulated protein Antibody, 78 kDa glucose-regulated protein Antibody, AL022860 Antibody, AU019543 Antibody, BIP Antibody, D2Wsu141e Antibody, D2Wsu17e Antibody, Endoplasmic reticulum lumenal Ca(2+)-binding protein grp78 Antibody, Endoplasmic reticulum lumenal Antibody, Ca2+ binding protein grp78 Antibody, FLJ26106 Antibody, Glucose Regulated Protein 78kDa Antibody, GRP 78 Antibody, GRP-78 Antibody, GRP78_HUMAN Antibody, Heat shock 70 kDa protein 5 Antibody, Heat Shock 70kDa Protein 5 Antibody, HSCe70 Antibody, HSPA 5 Antibody, HSPA5 Antibody, Immunoglobulin Heavy Chain Binding Protein Antibody, Immunoglobulin heavy chain-binding protein Antibody, mBiP Antibody, MIF2 Antibody, Sez7 Antibody
Research Areas Cancer, Heat Shock, Cell Signaling, Chaperone Proteins, Chaperones, Organelle Markers, Protein Trafficking, Trafficking
Cellular Localization Endoplasmic Reticulum, Endoplasmic reticulum lumen, Melanosome
Accession Number NP_001156906.1
Gene ID 14828
Swiss Prot P20029
Scientific Background GRP78 is a ubiquitously expressed, 78-kDa glucose- regulated protein, and is commonly referred to as an immunoglobin chain binding protein (BiP). The BiP proteins are categorized as stress response proteins because they play an important role in the proper folding and assembly of nascent protein and in the scavenging of misfolded proteins in the endoplasmic reticulum lumen. Translation of BiP is directed by an internal ribosomal entry site (IRES) in the 5' non-translated region of the BiP mRNA. BiP IRES activity increases when cells are heat stressed (1). GRP78 is also critical for maintenance of cell homeostasis and the prevention of apoptosis (2). Lou et al. have provided findings that suggest GRP78 is essential for embryonic cell growth and pluripotent cell survival (3). In terms of diseases, GRP78 has been shown to be a reliable biomarker of hypoglycemia, to serve a neuroprotective function in neurons exposed to glutamate and oxidative stress (4), and its protein levels are reduced in the brains of Alzheimer’s patients (5). Also, the induction of the GRP78 protein that results in severe glucose and oxygen deprivation could possible lead to drug resistance to anti-tumor drugs (6, 7).
References 1. Cho S., et al. (2007) Mol Cell Biol. 27(1): 368-83.
2. Yang Y., et al. (1998) J Biol Chem 273: 25552-25555.
3. Luo S., et al (2006) 26 (15): 5688-97.
4. Yu Z., et al. (1999) Exp Neurol. 15: 302-314.
5. Koomagi R., et al. (1999) Anticancer Res. 19:4333-4336.
6. Laquerre S., et al. (1998) J. Virology 72: 4940-4949.
7. Dong D., et al. (2005) Cancer Res 65(13): 5785-91.

Product Images

<p>Immunocytochemistry/Immunofluorescence analysis using Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody, Clone 1H11-1H7 (SMC-195). Tissue: Heat Shocked HeLa Cells. Species: Human. Fixation: 2% Formaldehyde for 20 min at RT. Primary Antibody: Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody (SMC-195) at 1:100 for 12 hours at 4°C. Secondary Antibody: FITC Goat Anti-Mouse (green) at 1:200 for 2 hours at RT. Counterstain: DAPI (blue) nuclear stain at 1:40000 for 2 hours at RT. Localization: Endoplasmic reticulum lumen. Melanosome. Magnification: 100x. (A) DAPI (blue) nuclear stain. (B) Anti-GRP78 Antibody. (C) Composite.</p>

Immunocytochemistry/Immunofluorescence analysis using Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody, Clone 1H11-1H7 (SMC-195). Tissue: Heat Shocked HeLa Cells. Species: Human. Fixation: 2% Formaldehyde for 20 min at RT. Primary Antibody: Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody (SMC-195) at 1:100 for 12 hours at 4°C. Secondary Antibody: FITC Goat Anti-Mouse (green) at 1:200 for 2 hours at RT. Counterstain: DAPI (blue) nuclear stain at 1:40000 for 2 hours at RT. Localization: Endoplasmic reticulum lumen. Melanosome. Magnification: 100x. (A) DAPI (blue) nuclear stain. (B) Anti-GRP78 Antibody. (C) Composite.

<p>Western Blot analysis of Human cell lysates showing detection of GRP78 protein using Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody, Clone 1H11-1H7 (SMC-195). Primary Antibody: Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody (SMC-195) at 1:1000.</p>

Western Blot analysis of Human cell lysates showing detection of GRP78 protein using Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody, Clone 1H11-1H7 (SMC-195). Primary Antibody: Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody (SMC-195) at 1:1000.

<p>Immunocytochemistry/Immunofluorescence analysis using Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody, Clone 1H11-1H7 (SMC-195). Tissue: Heat Shocked HeLa Cells. Species: Human. Fixation: 2% Formaldehyde for 20 min at RT. Primary Antibody: Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody (SMC-195) at 1:100 for 12 hours at 4°C. Secondary Antibody: FITC Goat Anti-Mouse (green) at 1:200 for 2 hours at RT. Counterstain: DAPI (blue) nuclear stain at 1:40000 for 2 hours at RT. Localization: Endoplasmic reticulum lumen. Melanosome. Magnification: 20x. (A) DAPI (blue) nuclear stain. (B) Anti-GRP78 Antibody. (C) Composite.</p>

Immunocytochemistry/Immunofluorescence analysis using Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody, Clone 1H11-1H7 (SMC-195). Tissue: Heat Shocked HeLa Cells. Species: Human. Fixation: 2% Formaldehyde for 20 min at RT. Primary Antibody: Mouse Anti-GRP78 Monoclonal Antibody (SMC-195) at 1:100 for 12 hours at 4°C. Secondary Antibody: FITC Goat Anti-Mouse (green) at 1:200 for 2 hours at RT. Counterstain: DAPI (blue) nuclear stain at 1:40000 for 2 hours at RT. Localization: Endoplasmic reticulum lumen. Melanosome. Magnification: 20x. (A) DAPI (blue) nuclear stain. (B) Anti-GRP78 Antibody. (C) Composite.

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 ATTO 700
Overview:

  • High fluorescence yield
  • Excellent thermal and photostability
  • Quenched by electron donors
  • Very hydrophilic
  • Good solubility in polar solvents
  • Zwitterionic dye
  • Molar Mass: 575 g/mol

ATTO 700 Datasheet

 ATTO 700 Fluorophore Absorption and Emission SpectrumOptical Properties:

λex = 700 nm

λem = 719 nm

εmax = 1.25×105

Φf = 0.25

τfl = 1.6 ns

Brightness = 31.3

Laser = 676 nm

Filter set = Cy®5.5

 

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2018-07-16
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【酸碱缓冲溶液的类型及选择】酸碱缓冲溶液有三种类型:
1、弱酸和它的盐(如:HAc---NaAc)的水溶液组成;
2、弱碱和它的盐(如:NH3·H2O---NH4Cl)的水溶液组成;
3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐(如:NaH2PO4---Na2HPO4)的水溶液组成。
酸碱缓冲溶液的选型一般应根据具体情况进行选择。缓冲酸性可选用碱性缓冲液,缓冲酸性可采用碱性缓冲液。常用作缓冲溶液的酸类由弱酸及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。生化实验室常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等系统,生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值,而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。
【酸碱缓冲溶液】由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液,能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响,从而保持溶液的pH值相对稳定。这种溶液称为酸碱缓冲溶液。
因为强酸(碱)是完全电离,弱酸(碱)是部分电离,滴定的终点难以控制,所以一般用强酸(碱).太浓或太稀的溶液,也不利于控制滴定终点,部分酸碱的性质还会因为浓度的该变而发生变化,如浓H2SO4有强氧化性.
我们常用的色谱柱的PH耐受大概是PH(2-9),最近摸条件,但是pH计坏了,想调一下流动相的PH,苦于PH试纸的不精确性,特此求助:

常用流动相加酸碱后PH的总结,希望大家能够提供一点自己测过的结果,谢谢先
就是通过微弱的中和反应控制溶液的酸碱度。
药典上说取本品10ml,加甲基红指示液(变色范围ph4.2-6.3,红~黄)2滴不得显红色;加溴麝香草酚蓝(变色范围ph6.0-7.6,黄~蓝)5滴不得显蓝色。
是否可以理解为纯化水得PH范围为6.3-7.6?能否直接用pH计测量?谢谢!
通HCl前,溶液是c(CH₃COOH)=c(CH₃COONa)=0.1mol/L的混合溶液,按照缓冲溶液pH的求法求.
pH(1)=pKa+lg[c(CH₃COONa)/c(CH₃COOH)]=pKa=4.74
通HCl后,溶液是c(CH₃COOH)=0.2mol/L、c(NaCl)=0.1mol/L的混合溶液,溶液pH按照弱酸溶液pH的求法求.
c(H⁺)=√[Ka*c(CH₃COOH)]=√(10^-4.74*0.2)=0.00191(mol/L)(采用了近似公式)
pH(2)=-lg{c(H⁺)}=2.72
两个pH求得,那么pH的变化量也就可得了.pH的变化量=|pH(2)-pH(1)|=|2.72-4.74|=2.02
1)PH缓冲溶液作用原理和pH值
  当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液.弱酸及其盐的混合溶液(如HAc与NaAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液.
  由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故.当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H离子基本上被A-离子消耗:
  所以溶液的pH值几乎不变;当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化.
  2)PH缓冲溶液的缓冲能力
  在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用.这说明它的缓冲能力是有一定限度的.
  缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关.0.1mol·L-1HAc和0.1mol·L-1NaAc组成的缓冲溶液,比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大.关于这一点通过计算便可证实.但缓冲溶液组分的浓度不能太大,否则,不能忽视离子间的作用.
  组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时,缓冲作用减小,缓冲能力降低,当c(盐)/c(酸)为1∶1时△pH最小,缓冲能力大.不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用.缓冲溶液的pH值可用下式计算:
  此时缓冲能力大.缓冲组分的比值离1∶1愈远,缓冲能力愈小,甚至不能起缓冲作用.对于任何缓冲体系,存在有效缓冲范围,这个范围大致在pKaφ(或pKbφ)两侧各一个pH单位之内.
  弱酸及其盐(弱酸及其共轭碱)体系pH=pKaφ±1
  弱碱及其盐(弱碱及其共轭酸)体系pOH=pKbφ±1
  例如HAc的pKaφ为4.76,所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76~5.76的缓冲溶液,在这个范围内有较大的缓冲作用.配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大,此时(c(HAc)/c(NaAc)=1.
  3)PH缓冲溶液的配制和应用
  为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液.
  以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法.对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法.
  PH缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛,如鉴定Mg2离子时,可用下面的反应:
  白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应.
Whatman的网站上说DE52(货号4057-200)是预膨胀的(Preswollen),有的中文网站上说DE52是即用型。
这就是说不用酸碱预处理吗?
Whatman的网站上没有DE52最大耐受压力,请问又经验的战友应该是多少?

Whatman的网站上:
DE32DryMicrogranularDEAECellulose
SimilarperformancecharacteristicsafterprecyclingasDE52.

DE52PreswollenMicrogranularDEAECellulose
ProbablythemostwidelyusedDEAEcelluloseintheworld;usedforbiopolymerswithlowtohighnegativecharges;exhibitsexcellentresolutionwithgoodflowrates.

附件是一本图书(MethodsinMolecularMedicine,)的章节,上面说:
WhatmanDEAE52comesalreadypreswollenandonlyneedstobetransferred
totherunningbuffer50mMTE8.

lAntibodiesUsingIonExchangeChromatography.pdf(87.06k)
纯化水药典2005版第二部

拼音名:Chunhuashui
英文名:PurifiedWater
【性状】本品为无色的澄清液体;无臭,无味。
【检查】酸碱度取本品10ml,加甲基红指示液2滴,不得显红色;另取10ml,加溴麝香草酚蓝指示液5滴,不得显蓝色。氯化物、流酸盐与钙盐取本品,分置三支试管中,每管各50ml。第一管中加硝酸5滴与硝酸银试液1ml,第二管中加氯化钡试液2ml,第三管中加草酸铵试液2ml,均不得发生浑浊。
硝酸盐取本品5ml置试管中,于冰浴中冷却,加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml,摇匀,缓缓滴加硫酸5ml,摇匀,将试管子50℃水浴中放置15分钟,溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g,加水溶解并稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,再精密量取10ml,加水稀释成100ml,摇匀,即得(每1ml相当于1pgNO3)0.3ml,加无硝酸盐的水4.7ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000006%)。
亚硝酸盐取本品10ml,置纳氏管中,加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液(1→100)lml与盐酸菜乙H肢溶液(0.l+100)1ml,产生的粉红色,与标准亚硝酸盐溶液〔取亚硝酸钠0.750g(按干燥品计算),加水溶解,稀释至100ml,摇匀,精密量取1ml,加水稀释成100ml,摇匀,再精密量取1ml,加水稀释成50ml,摇匀,即得(每1ml相当于1μgNO2)]0.2ml,加无亚硝酸盐的水9.8ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000002%)。
氨取本品50ml,加碱性碘化汞钾试液2ml,放置15分钟;如显色,与氯化铵溶液(取氯化铵31.5mg,加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml)1.5ml,加元氨水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较,不得更深(0.00003%)。
二氧化碳取本品25ml,置50ml具塞量筒中,加氢氧化钙试液25ml,密塞振摇,放置,小时内不得发生浑浊。
易氧化物取本品100ml,加稀硫酸10ml,煮沸后,加高锰酸钾滴定液(0.02mol/L)0.10ml,再煮沸10分钟,粉红色不得完全消失。
不挥发物取本品100ml,置105℃恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干,并在105℃干燥至恒重,遗留残渣不得过1mg。
重金属取本品50ml,加水18.5ml,蒸发至20ml,放冷,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量使成25ml,加硫代乙酰胺试液2ml,摇匀,放置2分钟,与标准铅溶液1.5ml加水18.5ml用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.00003%)。
微生物限度取本品,采用薄膜过滤法处理后,依法检查(附录ⅪJ),细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。
【贮藏】密闭保存。
【化学成分】本品为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的供药用的水,不含任何附加剂。
【分子式与分子量】H2O18.02
【药理作用】溶剂、稀释剂

这里药典纯化水标准中并无PH值项目,请问对纯化水有PH值的要求吗,范围应在多少?请说明出处?
在纯化水检测中,检验酸碱度合格,但是发现PH在8左右。如果按以上标准检验合格,是否要考虑PH值?请知道的解答,谢谢!
如题:
两个CEX方法A和B测定同一单抗,结果碱性峰比例差不多,酸性峰比例相差约7%,相应主峰也差了7%左右。
具体来说,A方法酸性峰高,主峰低,碱性峰稍微低点;B方法酸性峰低,主峰高,碱性峰稍微高点;另外也做了CIEF,结果呢和A方法更接近。
仔细比较起来,AB两个方法的峰性和数量差不多,就不知道为什么会有这么大的差异。两个方法一个用的WCX柱-磷酸缓冲液,一个用SCX柱-MES缓冲液
大家帮我分析下:
1.两个方法哪个方法更准确,是以酸性峰高的为准还是什么?为什么?
2.这显著差异是由方法造成,具体原因是什么?柱子?
3.CIEF的结果和A方法更接近,是不是可以由此证明A方法更好或者CIEF的方法更好(因为CIEF更快更方便)?
欢迎讨论~
纠正下,A方法用的是Tosoh的柱子,B方法用的是SCX柱。TOSOH的柱子是7um的填料,10cm长。SCX是10um的填料。我本人TOSOH的阳离子柱子用的很少,这次信手用用,结果发现差异很大
那我现在就考虑,在以后方法开发过程中,除了通过流动相pH和组成、梯度、柱子选择来获得样品主峰和酸碱性的最大分离,还要关注各峰比例。因为之前比较方法好坏都只看分离度,尤其是主峰和邻近峰的分离度,获得最大分离度,自然可以做到主峰尽可能纯,但从未认真比较过各峰比例。这是一个大疏忽吧!
另外,CIEF和CEX方法原理还是有点差异的,所以分的是不同的异质体,原液放行两个方法肯定是都要做的。问题就是在早期细胞株筛选和工艺开发阶段,哪个方法才是又快又准。CIEF(iCE280)一般15分钟一个样,比CEX快多了。如果CIEF测得主峰要低于CEX结果,是不是真的完全可以取代CEX呢?CEX分离出的峰远比CIEF的多!
欢迎大家继续讨论~
缓冲溶液为什么能够低抗外来酸碱对ph的改变
请问什么软件可以测蛋白质的酸碱性
【1】酸碱缓冲溶液:其中的一般酸碱缓冲溶液是指控制溶液酸碱度的溶液.他的作用是在此溶液中,加入少量的强酸或强碱,或者将其稍加稀释时,溶液的ph值基本上保持不变.【2】可以维持溶液酸碱度稳定的原因:主要原因是因为构成一般酸碱缓冲溶液的组分是“一元共轭酸碱”.例如“醋酸-醋酸钠”酸碱缓冲溶液.由PH的计算式:pH = p Ka +log[C酸/C碱] ,可见C酸/C碱的微小改变,其PH值,基本不变.