Type:BlockingBuffer
Applications:E
E=ELISA;FACS;FC=FlowCytometry;FPLC=FastProteinLiquidChromatography;GF=GravityFlow;HPLC=HighPerformanceLiquidChromatography;ICC=Immunocytochemistry;IF=Immunofluorescence;IHC=Immunohistochemistry;IP=Immunoprecipitation;NAC=Non-adherentCellAssays;NB=NeutralizationofBioactivity;SE=SandwichELISA;TPE=TargetedProteinExpression;WB=Westernblotting;;AC=AdherentCellAssays;FM=FluorescentMicsroscopy;;;BSC-CM5=BiacoreSensorChipCM5;BSM=BiosactiveSmallMoleculeorPeptide;CDM=CellDifferentiationMedia;;;;;;HealthandFitness;;;DNAExtraction/Purification;;InvivoLikeAssaysFormat:liquid
NeptuneBlockcontainsaproprietarynon-mammalianformulationbasedonfishproteins,plusmolecularstABIlizersthatprovideahighdegreeofblockingefficiency.NeptuneBlockwasdesignedforantigen-downELISAformats,andforsandwichassayswithhighbackgroundproblems.
Thisformulationisaheterogeneousmixtureofsmallmoleculescapableofblockingboththenonspecificbindingsitesoftheadsorbedprotein,aswellastheunoccupiedregionsofthepolystyreneplatethatarenotstericallyaccessIBLetolargertrADItionalmammalianblockingreagents,therebyreducingbackgroundnoise.Thesmallsizeoftheseuniqueblockersresultsinminimalsterichindrancetokeyepitoperegionsoftargetcoatedproteins,thusenhancingspecificsignalgeneration.
AsNeptuneBlockcontainsanon-mammalianproteinblockingagent,itisantigenicityforeigntomostmammalianimmunesystems.Inantigen-downELISAformats,thisreducesthepossibilityoffalse-positivesgeneratedfromendogenousantibodiesinthesamplereactingwithplateblockingproteins.NeptuneBlockisparticularlyusefulwhenworkingwithhuman,swine,andbovineserumsamples,asthereislittleinteractionwiththeblockingmoleculesresultinginlowerbackgrounds.
RecommendedUses:
- Antigen-downELISAs.
- SandwichELISAswithhighbackgrounds.
- ELISAstestinghumanandothermammaliansamples
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电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA分子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,加入浓度为1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,防止电泳时激活 DNA酶,此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
1mol/l Tirs-HCl(PH8.8) 0.6ml
10%SDS 2ml
50%甘油 5ml
2-巯基乙醇 0.5ml
1%溴酚兰 1ml
水 0.9ml
另外:SDS不好溶解建议加热溶解,如果要做非还原SDS-PAGE请将2-巯基乙醇 0.5ml换成超纯水即可
因为DNA和RNA链上的碱基都基本一致。而这两种上样缓冲液中含有的染料是二甲苯青和溴酚蓝,都可以与其碱基结合,跑出条带。
但是,如果使用DNA上样缓冲液,里面会夹杂一些RNA酶,这些酶有可能会影响到实验结果。使用前需要将RNA酶处理掉。
① 上样缓冲液中包括甘油,溴酚蓝,SDS等,甘油主要作用是防止样品漂浮出点样孔,溴酚蓝作为电泳指示剂,用来观察电泳进度,SDS用于一些核酸结合蛋白的变性解离.
②核酸染料与凝胶中核酸结合,以便于在紫外光下显示核酸条带.
蛋白质上样缓冲液中的SDS和DTT分别可以屏蔽蛋白质电荷以及破坏二硫键,避免形成多聚体。
DNA上样缓冲液主要是起沉降和指示作用,不可用于蛋白,否则会影响蛋白相对分子量定量。
同样蛋白上样缓冲液中的tris-HCl浓度过高也会使溴酚蓝条带扭曲。
1。称量氨基丁三醇 242g,Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中;
2。向烧杯中加入约600ml去离子水,充分搅拌均匀;
3。加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解;
4。用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。
使用时稀释50倍 即1×TAE Buffer
10×TBE Buffer配制方法:
1。称量氨基丁三醇 108g,Na2EDTA.2H2O 7.44g,硼酸55g 于1L烧杯中;
2。加入约700ml去离子水,搅拌均匀;
3。用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1L后,室温保存。
使用时稀释10倍 即1×TBE Buffer