【求助】5ulDNA样品和1ul上样缓冲液琼脂凝胶电泳

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2021-08-04

问题描述：

同仁好，我想请教一下大家，6Xloddingbuffer1%琼脂糖凝胶电泳TBE缓冲液，5ul
DNA样品和1ul上样缓冲液怎么就是跑不出主带啊？都是弥散带，给点建议我哪里有问题啊？

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xtzj500

用户

第一，你确定pcr没问题吗？第二，凝胶彻底融好了吗？如果融的不彻底会影响电泳。第三，缓冲液的ph值检测一下。

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水寒冰

用户

Marker是单还是双啊

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水寒冰

用户

xtzj500第一，你确定pcr没问题吗？第二，凝胶彻底融好了吗？如果融的不彻底会影响电泳。第三，缓冲液的ph值检测一下。电泳跟PCR有毛关系啊哥哥

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xtzj500

用户

我不知你跑的dna是哪里来的啊？听你这么说不是pcr产物了？那么是你提取的基因组dna吗？你确定用来跑电泳的样本本身没问题吗？

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fsj1987

用户

我提取的是15ML漱口水基因组DNA。不是扩增产物。是提取完直接跑得电泳。请多指点

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fsj1987

用户

凝胶完全溶了。

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东胜聂博

用户

给个图吧！基因组DNA的图跟你提取的水平有很大的关系，弥散也可能是降解。

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fsj1987

用户

这个图是天跟提取的漱口水DNA

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fsj1987

用户

这张是磁珠法提取的基因组DNA

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fsj1987

用户

大家帮忙分析一下跟我的凝胶电泳有关系吗？我用的是浓度为1%凝胶电泳。

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东胜聂博

用户

基因组DNA提取出来没有主带也正常，与你用的方法有关。如果用磁珠法，磁珠吸附DNA后没有大力分散（吹打或振荡），就会出现你图中的样子，可能DNA与组蛋白还在结合状态。如果大力分散，可能会出来主带，大小与磁珠和分散力有关（DNA被拉断）。你提DNA的目的是什么，如果只是PCR，短了好。如果有别的用途，需要比较完整的DNA，可以用其他的方法。我以前用过先用温和的方法提取，电泳，然后切胶电泳回收。

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fsj1987

用户

我用了天跟和磁珠两种方法做得，相对来说磁珠成本比较低一些，现在是实验阶段，就是为了看看磁珠的质量，然后准备用磁珠试剂盒，照您的意思是说我在细胞裂解以后，加入磁珠后吹打的力度不够吗？大小与磁珠和分散力有关（DNA被拉断）。你说大小是指主带的大小吗？

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东胜聂博

用户

DNA的长度相对于磁珠来讲是大的，因此在磁珠吸附DNA时，会发生一条DNA吸附了好多的磁珠。如果不用力混匀，磁珠就会结块，杂质会去不干净，如果用力混匀，DNA会拉断。一般DNA浓度越高，结块现象越严重。

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fsj1987

用户

上面这两张是我最近做得也都是漱口水DNA样品凝胶电泳图，图A中1-4号对应图B中的1-4号，这是两个不同的人提得DNA，跑出来得图不一样，就像您所说的提取过程中磁珠聚集在一起的跑出来是图B中的2号，图A中的2号是磁珠是分散开得，会有哪些原因呢？您当时提取的时候用的是谁家的试剂盒啊？跟电泳缓冲液新旧有没有关系啊?你那里有没有跑电泳的图啊？我可以看一下吗？谢谢

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