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Miltenyi
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TheCD105antigen,alsoknownasendoglin,servesasareceptorforthegrowthanddifferentiationfactorsTGF-β1andTGF-β3.AnepitopeofCD105isrecognizedbytheSH-2antibody,whichwasraisedagainsthumanmesenchymalstromalcells(MSCs)thatshowmesodermaldifferentiationcapacity.Therefore,itcanbeusedforstudiesonmesengenesis.CD105isalsoexpressedonmatureendothelialcellsandonsomeleukemiccellsofBlymphoidandmyeloidorigin.

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5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(25甘油) 查看更多>
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ABIN11130355 mLantibodies-onlineAntibodies-Online,inc.Antibodies-Online/Native Gel Sample Loading Buffer (5x)/ABIN1113035/5 mL 查看更多>
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RNA Loading Buffer (+EB) 500 μl × 2支 □ RNA Loading Buffer组成 Formamide 62.5% Formaldehyde 0.4 M 20 × MOPS Buffer 1.25× Xylene Cyanol FF 0.02% Bromophenol Blue 0.02% Ethidium Bromide 0.0025% 查看更多>
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最好有图片说明,谢谢
实验室的一份protocol 上写配上样缓冲液的时候要加溴酚蓝bromophenol blue,但没写加的量是多少。实验室只有粉末状的溴酚蓝。请问大神们如何加,加多少啊?需要先把溴酚蓝配制成溶液吗?还是直接加进去?
上样缓冲液也有多种,一般是80ul的样本加20ul的上样缓冲液,这样基本上上样50ug的体积在10ul左右。
最好是测浓度,一般不超过30-40ug,上样缓冲液一般4×或者5×,这个没太大区别。

实验小白刚刚起步,一般采用等质量上样的方法,但我算的上样量是没加缓冲液之前的,加完缓冲液蛋白样品浓度会变么?师姐说不会变,就按照算好的上样量加就行。

前几天提的样按50ug算每个样本的上样量也只有上5ul左右,按师姐说的就那么上了,结果发完光只有内参有条带,目标蛋白一点也没有,但以前做过一次是出过一点趋势的,而且这次整个过程感觉做的很仔细,发完光结果也很干净整齐,所以我在想是不是跟上样量有关系?上样缓冲液加入之后会使样本浓度稀释五倍么,这样的话上样量就得乘5。

变性前后加上样缓冲液的区别是什么呢?哪一种会改变蛋白浓度从而改变上样量呢?


蛋白上样缓冲液
蛋白电泳上样缓冲液包括2%SDS , 0.1%溴酚蓝 10%甘油,SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致,减少电荷对电泳结果的影响。还原剂是让二硫键处于断开状态,保证蛋白分子的线性.
溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的,甘油是增加上样重量的,以免漂浮,煮沸是使蛋白变性的永久保存

提了蛋白,加上样缓冲液煮过,但发现还是有很多胶状的沉淀,比较黏稠,堵枪头。于是自作主张又超声了一次,结果跑了一次,内参都没有。煮过之后的蛋白不能超声么?

sds电泳上样缓冲液如何配置
2ul 5×上样缓冲液中添加3ul水,混匀,即得2×上样缓冲液
电泳缓冲液的主要作用是使胶的导电性和体系的一致,这样跑出的条带才回一致;
加样缓冲液的主要作用是使PCR产物与其混合,
使DNA沉于加样孔的底部,防止DNA跑出来.
(以下内容仅供参考)
2乘SDS-PAGE上样缓冲液(20ml体系)
1.0mol/L Tris-HCL (pH 6.8) 2ml
1.0mol/L DTT 4ml
SDS 0.8g
溴芬蓝 0.04g
甘油 4ml
dd水 定容至20ml
4℃冰箱保存,可以不分装,我们实验室一般用三个月以上
先配1.0mol/L的DTT,双蒸无菌水溶解4℃冰箱保存,配上样缓冲液的时候加入就可以了,都混匀保存也没问题的
4×蛋白上样缓冲液使用说明123
songjunlai19922016-03-22

请问有人知道蛋白上样缓冲液应该怎么配制吗?请赐教