【求助】加入上样缓冲液，样品立即出现沉淀，为何？
2010-03-27
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skykiller
用户
6ng/μl=6μg/ml，这个浓度太低了吧，电泳如何看得到？
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txstbbm
用户有6ng/μl与30ng/μl，上样30ng/孔与150ng/孔足够了，均无条带形成！
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skykiller
用户txstbbm有6ng/μl与30ng/μl，上样30ng/孔与150ng/孔足够了，均无条带形成！30ng/孔与150ng/孔对SDS-PAGE来说是不够的。考染正常条带要求上样量为10μg，也就是1mg/ml的样品上样量为10ul。要能看到明显的条带，我的经验是不能少于1μg=1000ng。对重组药品的QC检测，中检所考染要求上样量大于15μg。
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txstbbm
用户找公司合成了一个30AA的阳离子多肽（纯度90%），加水溶解至6ng/μl,加入2x上样缓冲液后，立即出现沉淀，加热至99度10分钟仍不溶解，离心取上清电泳，蛋白Marker条带清晰，样品无条带形成，在预期位置的上方10~15kd处出现弥散状着色区，请问：1）为何出现沉淀，怎样才能避免沉淀的出现？2）为何没有预期大小的3.5kd条带出现？10~15kd处可能是什么？是不是分子聚合？若是分子聚合，怎样解聚？
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HaveNoMoney
用户有沉淀出现，可能是样品中含有钾离子，钾离子与SDS会形成不溶性的沉淀。解决办法：透析除盐再浓缩。
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txstbbm
用户如果因钾离子形成沉淀，应该不会影响多肽电泳结果才对，有谁跑过碱性多肽（pi=11）的电泳？碱性多肽电泳与其他电泳很不一样？应该注意什么问题？
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linxt2005
用户SDS-PAGE多肽的酸碱性关系不大的，个人感觉主要还是沉淀的问题，加上loADIngbuffer后，添加一定的Sarkosyl，混匀至其澄清为止，然后再上样试试。另外，由于分子量小，建议使用Tricine胶，问题应该可以解决。
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txstbbm
用户先谢谢上面的各位兄弟，还有哪位高人过来帮忙解答一下？
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