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제품특징
□ 제품설명
CycleavePCR Reaction Mix는 검출에 Cycling Probe를 이용하는 Real Time PCR 전용 시약이다. 2x농도의 premix type 시약으로 Cycling probe법에 최적화된버퍼와 anti-Taq antibody를 이용한 Hot start PCR 용 효소인 TaKaRa Ex Taq HS를 사용하고 있으면, 반응액의 조제가 간단하다.신속성과 정량성이 뛰어난 Real Time PCR 법과 아주 특이성이 높은 검출법인 CyclingProbe 법을 조합하여 Target의 검출 및 정량,SNP의 검출 등을 정확하고도 간편하게 수행할 수 있다. CycleavePCRStarter Kit에는 CycleavePCR Reaction Mix 외에시약의 반응성을 확인하기 위한 Positive Control이 들어있다. 반응계 구축 후에는 경제적인 CycleavePCRReaction Mix를 추천한다.Takara Bio의 web site에 공개되어 있는 SNP검출용 (1 염기치환) Primer Cycling Probe 설계 ／주문시스템 [CycleavePCR Assay Designer (SNPs)] 의 Primer와 Cycling Probe로 해석을 수행할 경우는 CycleavePCR Starter Kit (Code CY505S)또는 CycleavePCR Reaction Mix (Code CY505A/B)를 조합하여 사용한다.
● Thermal Cycler Dice®Real Time System II (Code TP900/TP960)
● Thermal Cycler Dice®Real Time System Lite (Code TP700/TP760)
● Smart Cycler System/Smart Cycler II System (Cepheid 사)
● ABI PRISM 7000/7700, 7500 Real-Time PCR System, 7500 Fast Real-Time PCR System, StepOnePlus Real-Time PCR
System (Life Technologies사)
● LightCycler (Roche Diagnostics사)
□ 내용
Cycleave®PCR Starter Kit(Code CY505S, 25 ㎕ 반응시 80회 분량)
1. | CycleavePCRReaction Mix (2×conc.)*1 | 1 ㎖ |
2. | ROX ReferenceDye (50×conc.)*2 | 200 ㎕ |
3. | ROX ReferenceDye II (50×conc.)*2 | 200 ㎕ |
4. | Positive Control*3 | 10 ㎕ |
5. | Positive ControlPrimer Mix (10 μM each)*3 | 10 ㎕ |
6. | Positive ControlProbe (FAM/TAMRA) (25×conc.)*3 *4 | 10 ㎕ |
7. | dH2O | 1 ㎖ |
Cycleave®PCR Reaction Mix(Code CY505A, 25 ㎕ 반응시 400회 분량)
| 1. | CycleavePCR Reaction Mix (2×conc.)*1 | 1 ㎖ × 5 |
2. | ROX Reference Dye (50×conc.) *2 | 200 ㎕ |
3. | ROX Reference Dye II (50×conc.)*2 | 200 ㎕ |
*1 TaKaRa Ex Taq HS, dNTP Mixture, Mg2+Tli RNaseH II가 포함되어 있다. 형광표지 probe (FAM-TAMRA 표지)를 포함하고
있으므로, 차광에 유의한다. *2 Life Technologies가 제작한Real Time PCR 장치 등 well 간의 형광signal 보정을 수행하는 장치에서 해석할 경우에 사용
합니다. ROX표식 Probe를 사용하는 경우는 사용하지 말아 주십시오.ABI PRISM 7000/7700 및 StepOne Plus에는 ROX Reference Dye를, 7500 Real-Time PCRSystem, 7500 Fast Real-Time
PCR System에는 ROX ReferenceDye II를 이용하여 주십시오. Thermal Cycler Dice Real Time System시리즈 및Smart Cycler System, LightCycler에서는 필요하지 않습니다.*3 시약의 반응성을 확인할 경우 Control 실험용입니다.*4 형광표식 Probe를 위하여 차광에 유의하여 주십시오.
□ 보존 -20℃
□ 본 제품 이외에 필요한 주요 시약 및 기기
1.Real Time PCR 용 유전자 증폭 시스템（authorized instruments）2.전용 반응 tube 또는 plate3.PCR 용 Primer*4.Cycling Probe*
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最好是测浓度，一般不超过30-40ug，上样缓冲液一般4×或者5×，这个没太大区别。
蛋白电泳上样缓冲液包括2%SDS , 0.1%溴酚蓝 10%甘油,SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性.
溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的永久保存
加样缓冲液的主要作用是使PCR产物与其混合,
使DNA沉于加样孔的底部,防止DNA跑出来.
2乘SDS-PAGE上样缓冲液（20ml体系）
1.0mol/L Tris-HCL (pH 6.8) 2ml
1.0mol/L DTT 4ml
SDS 0.8g
溴芬蓝 0.04g
甘油 4ml
dd水 定容至20ml
4℃冰箱保存，可以不分装，我们实验室一般用三个月以上
先配1.0mol/L的DTT,双蒸无菌水溶解4℃冰箱保存,配上样缓冲液的时候加入就可以了,都混匀保存也没问题的
