주문정보
- - 재고수량은 변동될 수 있습니다.
- - 재고 확인 시 "갱신" 버튼을 누르시면 실시간 재고를 확인하실 수 있습니다.
- - 가격이 ‘별도문의‘ 시, 상단 ‘견적신청’ 버튼을 눌러 문의해주시면 빠른 답변을 받으실 수 있습니다.
| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
|---|
제품특징
□ 특징
● iDimerize 기술을 이용하여 전사를 강력하게 조절
● 전사를 조절하는 작은 분자 ligand의 투입에 따라 조절 가능
● Ligand를 투입하기 전에는 활성도메인이 DNA로부터 분리되어 있기 때문에 백그라운드가 매우 낮음
● A/C Heterodimerizer는 AP21967 ligand와 동일함
iDimerize 기술은 목적 유전자의 전사 활성을 매우 강력하게 조절할 수 있다. 특히 전사 조절에 있어서iDimerize 기술의 가장 중요한 장점 중 하나는 dimerizer ligand가 첨가되기 전에 전사활성 도메인(AD)가 DNA와 분리되어 있기 때문에 백그라운드가 낮다는 점이다. 전사 요소들은 두 가지 기능의 단백질들로, DNA binding domain을 통해 목적유전자 근처의 특이적 DNA서열을 인지한 후 transcription activation domain을 통해 전사를 활성화 시키도록 세포의 전사 기작을 모으는 역할을 한다. 이들 두 도메인은 각자 단백질이 발현되면 A/C Heterodimerizer ligand에 의해 서로 dimerization을 만들어 전사를 활성화시킬 수 있다.
□ A/C Heterodimerizer Ligand (AP21967)
A/C Heterodimerizer는 합성된 세포투과성 ligand로 두 개의 융합단백질의 heterodimerization을 유도하는데 사용된다. 예를 들면, 이 키트를 사용하면 DmrC-tagged transcription activation domain은 DmrA-tagged DNA binding domain과의 dimerize를 유도할 수 있다.
□ Regulating Transcription
세포로 아래 플라스미드를 형질전환 시킨다1. transcription activation과 DNA binding components를 발현하는 플라스미드(pHet-Act1-2) 2. PZI-1 inducible promoter(in pZFHD1-2)의 하류에 클로닝된 목적유전자DNA binding component는 promoter에 결합되어 있어 DmrA와 DmrC를 통해 전사활성요소들이 결합하여 전사가 활성화 될 때까지 전사를 억제한다. A/C Heterodimerizer가 첨가되면 두 components가 결합하고 PZI-1 promoter로부터 목적 유전자가 전사된다.
The iDimerize Regulated Transcription System uses the tight PZI-1 promoter, which exhibits very low background in the absence of induction because it is not recognized by host transcription factors. A further level of control is provided separating the DNA binding component (DmrA/DB; green) and transcription activation component (DmrC/TA; yellow) into separate compartments in the cell. DmrC/TA does not possess a nuclear localization signal (NLS), so it resides predominantly in the cytoplasm; however, it is brought to the nucleus by the addition of A/C heterodimerizer which causes its interaction with DmrA/DB. DmrA/DB does possess an NLS, so when A/C heterodimerizer is added, the transcription factor is completed through dimerization. The complete transcription factor is translocated into the nucleus, where it binds thePZI-1 promoter and induces expression of the gene of interest.
Tightly regulated transcription using iDimerize technology. Clone your gene of interest downstream of the ZHFD1 inducible promoter (PZI-1). The DNA binding component (DmrC/DNA-BD fusion; red) recognizes and binds sequences within the promoter. However, activation of transcription only occurs when the DmrC/DNA-BD dimerizes with the transcription activation component (DmrA-AD fusion; green) at the promoter, when the DmrA and DmrC domains both bind to the A/C Heterodimerizer (AP21967).
Regulated transcription of luciferase using the iDimerize Regulated Transcription System. Firefly luciferase was cloned into the multiple cloning site of the pZFHD1-2 vector. The plasmid was then cotransfected into HEK 293 cells with pHet-Act1-2 (which expresses the transcription activation components). Cells were treated with the indicated doses of A/C Heterodimerizer, and induced gene expression was measured 24 hr later. Induced expression of luciferase was measured using a luminometer. RLU = Relative Light Units.
Dose-dependent control of gene expression with the iDimerize Inducible Expression System. HT1080 cells were stably transfected with the secreted alkaline phosphatase (SEAP) reporter gene and the DmrC-AD/DmrA-DBD constructs, and treated with or without A/C Heterodimerizer. In the absence of A/C Heterodimerizer, target gene expression was undetectable. Half-maximal induction occurred at 2 nM A/C Heterodimerizer.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
最好是测浓度，一般不超过30-40ug，上样缓冲液一般4×或者5×，这个没太大区别。
蛋白电泳上样缓冲液包括2%SDS , 0.1%溴酚蓝 10%甘油,SDS是保证样品中的所有蛋白带电荷一致，减少电荷对电泳结果的影响。还原剂是让二硫键处于断开状态，保证蛋白分子的线性.
溴酚蓝作用是指示上样蛋白的跑胶时标记的，甘油是增加上样重量的，以免漂浮，煮沸是使蛋白变性的永久保存
加样缓冲液的主要作用是使PCR产物与其混合,
使DNA沉于加样孔的底部,防止DNA跑出来.
2乘SDS-PAGE上样缓冲液（20ml体系）
1.0mol/L Tris-HCL (pH 6.8) 2ml
1.0mol/L DTT 4ml
SDS 0.8g
溴芬蓝 0.04g
甘油 4ml
dd水 定容至20ml
4℃冰箱保存，可以不分装，我们实验室一般用三个月以上
先配1.0mol/L的DTT,双蒸无菌水溶解4℃冰箱保存,配上样缓冲液的时候加入就可以了,都混匀保存也没问题的
