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StressMarq/StressXpress® Cyclic AMP CLIA Kit (High-Sensitivity)/SKT-208-96/96-well
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StressMarq/StressXpress® Cyclic AMP CLIA Kit (High-Sensitivity)/SKT-208-96/96-well
品牌 / 
StressMarq
货号 / 
SKT-208-96
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Overview:

ProductNameCyclicAMPCLIAKit(High-Sensitivity)
Description

ChemiluminescentdetectionofcAMP

SpeciesReactivitySpeciesIndependent
PlatformMicroplate
SampleTypesCelllysates,EDTAPlasma,HeparinPlasma,Saliva,Tissue,TissueCultureMedia,Urine
DetectionMethodChemiluminescentAssay
AssayTypeDirectCLIA(ChemiluminescentImmunoassay)
UtilityCLIAkitusedtoquantitativelymeasurecAMPpresentinsamples.
Sensitivity0.119pmol/ml
AssayRangeRegular:0.185-15pmol/ml.Acetylated:0.039-5pmol/ml
PrecisionIntraAssayPrecision(Regular):TwohumanurinesamplesweredilutedwithSampleDiluentandruninreplicatesof20inanassay.ThemeanandprecisionofthecalculatedcAMPconcentrationswere:Sample1-11.2pmol/mL,3.9%CVSample2-3.6pmol/mL,8.3%CVIntraAssayPrecision(Acetylated):TwohumanplasmasamplesweredilutedwithSampleDiluent,acetylatedandruninreplicatesof20inanassay.ThemeanandprecisionofthecalculatedcAMPconcentrationswere:Sample1-1.32pmol/mL,8.4%CVSample2-0.39[pmol10.9%CVInterAssayPrecision(Regular):TwohumanurinesamplesweredilutedwithSampleDiluentandruninduplicatesinfourteenassaysrunovermultipledaysbyfouroperators.ThemeanandprecisionofthecalculatedcAMPconcentrationswere:Sample1-6.5pmol/mL,8.1%CVSample2-2.1pmol/mL,13.0%CVInterAssayPrecision(Acetylated):TwohumanplasmasampleweredilutedwithSampleDiluent,acetylatedandruninduplicatesinfourteenassaysrunovermultipledaysbyfouroperators.ThemeanandprecisionofthecalculatedcAMPconcentrationswere:Sample1-1.02pmol/mL,10.1%CVSample2-0.32pmol/mL,16.5%CV
IncubationTime2hours
NumberofSamples38samplesinduplicate
OtherResourcesKitBooklet,MSDS,SalivaSampleHandlingInstructions

Properties

StorageTemperature4ºC
ShippingTemperatureBlueIce
ProductTypeCLIAKits
AssayOverviewTheCyclicAMP(cAMP)CLIA(High-Sensitivity)kitisdesignedtoquantitativelymeasurecAMPpresentinlysedcells,EDTAandheparinplasma,urine,salivaandtissueculturemediasamples.Fortissuesamples,salivaandurine,wherethelevelsofcAMPareexpectedtoberelativelyhigh,theregularformatfortheassaycanbeused.Forplasmasamplesandsomedilutecelllysatesanoptionalacetylationprotocolcanbeused.Thiskitcanmeasureaslittleas1femtomolcAMPpersample.ThekitisuniqueinthatallsamplesandstandardsaredilutedintoanacidicSampleDiluent,whichcontainsspecialadditivesandstABIlizers,forcAMPmeasurement.Thisallowsplasma,urineandsalivasamplestobereadinanidenticalmannertolysedcells.AcidifiedsamplesofcAMParestableandendogenousphosphodiesterasesareinactivatedintheSampleDiluent.AcAMPstandardisprovidedtogenerateastandardcurvefortheassayandallsamplesshouldbereadoffthestandardcurve.AwhitemicrotiterplatecoatedwithanantibodytocapturesheepIgGisprovided.PriortotheadditionofanysamplesorstandardsaneutralizingPlatePrimersolutionisaddedtoalltheusedwells.Standardsordilutedsamples,eitherwithorwithoutacetylation,arePipettedintotheprimedwells.AcAMP-peroxidaseconjugateisaddedtothestandardsandsamplesinthewells.ThebindingreactionisinitiatedbytheadditionofasheepantibodytocAMPtoeachwell.Aftera2hourincubation,theplateiswashedandthechemiluminescentsubstrateisadded.ThesubstratereactswiththeboundcAMP-peroxidaseconjugatetoproducelightThegeneratedlightisdetectedinamicrotiterplatereadercapableofreADIngluminescence.TheconcentrationofthecAMPinthesampleiscalculated,aftermakingsuitablecorrectionforthedilutionofthesample,usingsoftwareavailablewithmostplatereaders.
KitOverview
ComponentNo.ItemQuantity/Size
SKC-208ACoatedWhite96WellPlates1Each
SKC-208BCyclicAMPStandard125µl
SKC-208CStressXpress®CyclicAMPAntibody3ml
SKC-208DStressXpress®CyclicAMPConjugateConcentrate60µl
SKC-208EConjugateDiluent3ml
SKC-208FSampleDiluent28ml
SKC-208GPlatePrimer5ml
SKC-208HAceticAnhydride2ml
SKC-208ITriethylamine4ml
SKC-208JWashBufferConcentrate30ml
SKC-208KSubstrateSolutionA6ml
SKC-208LSubstrateSolutionB6ml
SKC-208MPlateSealer1Each
CiteThisProductCyclicAMPCLIAKit(High-Sensitivity)(StressMarqBiosciencesInc.,VictoriaBCCANADA,Catalog#SKT-208)

BIOLOGicalDescription

AlternativeNames3"-5"-cyclicadenosinemonophosphateCLIAKit
ResearchAreasCellSignaling,Neuroscience
ScientificBackgroundAdenosine-3’,5’-cyclicmonophosphate(cyclicAMP)isasecondmessengerthatplaysanimportantroleinintracellularregulation.Specifically,itfunctionsasamediatorofactivityofseveralkeyhormonesincludingepinephrine,glucagon,andACTH(1-4).AdenylatecyclaseisactivatedbythehormonesglucagonandadrenalineandbyGprotein.Liveradenylatecyclaserespondsmorestronglytoglucagon,andmuscleadenylatecyclaserespondsmorestronglytoadrenaline.cAMPdecompositionintoAMPiscatalyzedbytheenzymephosphodiesterase.IntheHumanMetabolomeDatabasethereare166metabolicenzymeslistedthatconvertcAMP(5).OtherbiologicalactionsofcAMPincluderegulationofinnateimmunefunctioning(6),axonregeneration(7),cancer(8),andinflammation(9).
References1.Sutherland,E.W.andRall,T.W.FractionationandCharacterizationofaCyclicAdenineRibonucleotideFormedbyTissueParticles.J.Biol.Chem.,232:1077,1958.
2.Marsh,J.M.Biol.Reprod.,14:30-53,1976.
3.Korenman,S.G.andKrall,J.F.Biol.Reprod.,16:1-17,1977.
4.Kelley,D.J.,Bhattacharyya,A.,Lahvis,G.P.,Yin,J.C.P.,Malter,J.,andDavidson,R.J.Neurosci.Biobehav.Rev.,32(8):1533-1543,2008.
5.http://www.hmdb.ca/metabolites/HMDB00058
6.Serezani,C.H.,Ballinger,M.N.,Aronoff,D.M.,andPeters-Golden,M.Am.J.Resp.CellandMol.Biol.,39(2):127,2008.
7.Hannila,S.S.,andFilbin,M.T.Exp.Neurol.,209(2):321–332,2008.
8.Shankar,D.B,Cheng,J.C.,andSakamoto,K.M.Cancer,104(9):1819-24,2005.
9.GaleaE.andFeinstein,D.L.FASEBJ.,13:2125-2137,1999.

ProductImages

<p>Regular Format Typical Standard Curve for the Cyclic AMP CLIA Kit (High-Sensitivity) (Chemiluminescent Immunoassay) StressXpress® – SKT-208. Assay Type: Direct CLIA. Detection Method: Chemiluminescent Assay. Assay Range: Regular: 0.185 – 15 pmol/ml. Acetylated: 0.039 – 5 pmol/ml.</p>

RegularFormatTypicalStandardCurvefortheCyclicAMPCLIAKit(High-Sensitivity)(ChemiluminescentImmunoassay)StressXpress®–SKT-208.AssayType:DirectCLIA.DetectionMethod:ChemiluminescentAssay.AssayRange:Regular:0.185–15pmol/ml.Acetylated:0.039–5pmol/ml.

<p>Acetylated Format Typical Standard Curve for the Cyclic AMP CLIA Kit (High-Sensitivity) (Chemiluminescent Immunoassay) StressXpress® – SKT-208. Assay Type: Direct CLIA. Detection Method: Chemiluminescent Assay. Assay Range: Regular: 0.185 – 15 pmol/ml. Acetylated: 0.039 – 5 pmol/ml.</p>

AcetylatedFormatTypicalStandardCurvefortheCyclicAMPCLIAKit(High-Sensitivity)(ChemiluminescentImmunoassay)StressXpress®–SKT-208.AssayType:DirectCLIA.DetectionMethod:ChemiluminescentAssay.AssayRange:Regular:0.185–15pmol/ml.Acetylated:0.039–5pmol/ml.

<p>Linearity was determined by taking two Jurkat cell lysate samples, one with a low cAMP level of 0.2 pmol/mL and one with a higher level of 2.5 pmol/mL, and mixing them in the ratios. The measured concentrations were compared to the expected values based on the ratios used.</p>

LinearitywasdeterminedbytakingtwoJurkatcelllysatesamples,onewithalowcAMPlevelof0.2pmol/mLandonewithahigherlevelof2.5pmol/mL,andmixingthemintheratios.Themeasuredconcentrationswerecomparedtotheexpectedvaluesbasedontheratiosused.

<p>Chemical structure of Cyclic AMP (cAMP)</p>

ChemicalstructureofCyclicAMP(cAMP)

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2018-08-20
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我们实验室用的是:5*SDS-PAGE电泳缓冲液0.125Mtris15.1g,1.25Mglycine94g,0.5%SDS5.0g,加入800ml去离子水,搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存。用的时候稀释成1*的就可以了。转膜缓冲液的配制方法:39mMglycine2.9g,。
新手弱弱的请教下在配10x的蛋白电泳缓冲液时,由于迟迟不见溶解,经加热使其溶解,这样会影响溶液里的tris及甘氨酸的性质吗?:?)
跑了几次SDS-PAGE,发现缓冲液里有碎屑之类的东西,是不是该换新的了?
还有就是胶板用什么洗比较干净,干了之后没水印?
TE缓冲液 123
☆你大爷☆pgyn2021-07-29
TE缓冲液是Tris +EDTA缓冲液,这种缓冲液我们一般用作溶解剂或保持剂,主要是调控PH,TAE是一种电泳缓冲液,主要用于DNA分子的电泳。 TE组成浓度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0 配制量:500ml 配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 50×TAE Buffer 配制方法: 1. 称量Tris 242g,Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中; 2.向烧杯中加入约800ml去离子水,充分搅拌均匀; 3加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解; 4.加去离子水定容至1L后,室温保存。向左转|向右转
电泳缓冲液浓度对实验时间有影响。(如下案例)试验在20-40mmol/L范围内考察了醋酸铵浓度对4中组分分离度的影响。结果发信啊4中组分的迁移时间随醋酸铵浓度的增大而延长,从而分离度得到改善。但是缓冲液浓度越大分析时间也越长,如图3-3所示。向左转|向右转
离子强度是表示溶液中电荷数量的一种量度,等于溶液中各种离子的摩尔浓度与其价数平方之积总和的一半。
低离子强度时,迁移率快。但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定。高离子强度时迁移率慢,因此为了获得更快的反应速度,在缓冲容量允许的范围内,离子强度应该尽可能小。
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中中带负电,因为所说的等电点是指蛋白质或两性电解质所带净电荷为零时溶液的pH,此时蛋白质或两性电解质在电场中的迁移率为零.当外界溶液的pH大于两性离子的等电点值,两性离子释放质子带负电;当外界溶液的pH小于两性离子的等电点值,两性离子质子化带正电.
电泳缓冲液的ph为8.6时为什么会向正极移动
目前常用的SDS-PAGE电泳缓冲液有:
Tris-Glycine/SDS;
MOPS/SDS;
Bis-Glycine/SDS等不同的缓冲液、预混液等。
不知道这几种缓冲液有什么异同呢?
比如如果是Invitrogen的预制胶-预混液电泳系统,每种预制胶有适配缓冲液,但是如果用其他的缓冲液似乎也可以得到不错的结果,那么是否说明电泳缓冲液只要满足了缓冲ph范围,其他的不是特别重要呢?
此外,附加提问是,PVDF膜在转膜的时候,转膜缓冲液中不需要加入甲醇,那么是加入甲醇转膜效果好还是不加好呢?
谢谢!
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中中带负电,因为所说的等电点是指蛋白质或两性电解质所带净电荷为零时溶液的pH,此时蛋白质或两性电解质在电场中的迁移率为零.当外界溶液的pH大于两性离子的等电点值,两性离子释放质子带负电;当外界溶液的pH小于两。

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最近刚开始跑SDS-PAGE,很奇怪,加样后,Marker和样本停在加样孔不往下面跑!且跑电泳时,电压(80V)一直上不去,后测电泳液PH值,不到8.0,这是主要原因吗?

如需调PH,是用NaOH吗?