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人血血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsRα)ELISA说明书

来自 : mayitao

谷物籽粒氨基酸测定的前处理方法

1适用范围
本标准适用于氨基酸分析仪测定谷物籽粒中氨基酸含量的样品前处理。

2方法原理
谷物籽粒中的氨基酸，系按一定顺序结合成不同类型的肽和蛋白质，因而在测定前
要用一定浓度的酸使蛋白质中肽键断裂，水解成多种氨基酸后，用氨基酸分析仪测定。
由于色氨酸在酸性溶液中水解时易被破坏，须用碱水解。

3仪器设备
3.1分析天平：感量0.0001g。
3.2实验室用粉碎机。
3.3喷灯。
3.4真空泵。
3.5真空规。
3.6恒温干燥箱。
3.7水解管：用九五料玻璃制的球形管或圆底试管。体积15-20ml。
3.8聚四氟乙烯管:φ10×100mm。
3.9玻璃试管：φ15×180mm。
3.10浓缩器（可控温，减压）或真空干燥器。
3.11容量瓶：25ml。

4试剂
除注明者外均为分析纯。配制试剂均用去离子水，电导率大于1m,-1。
4.16mol/L盐酸：盐酸（GB622—77），优级纯，与水按1.1混合。
4.24mol/L氢氧化锂：用水溶解168.8g氢氧化锂（Q/HG12—325—83），稀释至1000ml。
4.3pH2.2缓冲液：19.6g柠檬酸三钠（HG3—1298—80）用水溶解后，加入16.5ml盐
酸（GB622—77，优级纯），5ml25%硫代双乙醇，1g苯酚（HG3—1165—78），zui后定
容至1000ml。
4.4pH4.3缓冲液：1471g柠檬酸三钠（HG3—1298—80）和2.92g氯化钠（GB1266—77），
10.50g柠檬酸（HG3—1108—81），溶解在500ml水中，再加入5ml25%硫
代双乙醇，0.1ml辛酸，zui后定容至1000ml。
4.5冷冻剂：液氮或干冰加丙酮（或加乙醇）。

5试样制备
5.1取有代表性的样品，用四分法分取25g左右，拣去杂质，带壳籽粒进行脱壳。
5.2将样品放在60-65恒温干燥箱中。干燥8h左右冷却后在粉碎机中碾碎，全部通
过孔径为0.25mm的筛子，充分混匀后装入磨口瓶中备用。

6处理方法
6.1酸水解步骤
6.1.1称样
称取样品30.5mg，准确至0.1mg，置于水解管中，同时另称样品按GB3523—83
《谷类、油料作物种子水分测定法》，测定水分含量。
6.1.2水解
6.1.2.1在水解管内加入6mol/L盐酸10ml，在距管口2cm左右处，用喷灯灼烧并拉一
细颈。再将管子放入冷冻剂中，冷却至溶液呈固体后取出，接在真空泵的抽气管上，使
减压至7Pa（≤5×10.2mmHg）后封口。
6.1.2.2将封好口的水解管放在110±01℃的恒温干燥箱内，水解22-24h后，取出冷
却。
6.1.2.3打开水解管，将水解液定量转移到25ml容量瓶内，定容过滤，吸取滤液1ml，
用旋转浓缩器（45-50℃）或置于真空干燥器内真空干燥，残留物用1-2ml去离子水
溶解蒸干，如此反复进行1-2次，zui后一次蒸干后，加pH2.2缓冲液溶解，供仪器测
定。
6.2碱水解步骤
6.2.1称样
称取样品60±5mg准确至0.1mg，置于聚四氟乙烯管内，同时按GB3523—83测定
水分。
6.2.2水解
6.2.2.1在聚四氟乙烯管内加入4mol/L氢氧化锂1ml，使样品均匀湿润，然后把管子
放入玻璃试管中，在玻璃管上端，离聚四氟乙烯管4-5cm处，用喷灯灼烧并拉一细颈，
再放到冷冻剂中，冷却至溶液呈固体后取出，接在真空泵的抽气管上，减压至7Pa（≤
5.10-2mmHg）后封口。
6.2.2.2把管子放在110±1℃的恒温干燥箱内水解20h，取出冷却，将水解液定量转移
到25ml容量瓶内，用6mol/L盐酸中和后，再用pH4.3的缓冲液定容，过滤后供测定色
氨酸用。

附录A
氨基酸分析仪测定的结果计算
（补充件）
A.1计算公式
A
某种氨基酸，%（干基）=---------×10的负6次方×25×100
m（1-H）
式中：A——测得的某种氨基酸在每毫升水解液中的含量，mg；
m——样品的质量，mg；
H——样品的水分百分率；
25——稀释倍数。
A.2结果表示
两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留小数点后有效数字两位。
A.3结果的允许差
两个平行测定值相对差不得大于8%。