CRISPR/Cas9基因敲除原理及实验建议_Bio12345的博客
| 货号： | CHEM-2000002 |
| 供应商： | 上海麒盟生物科技有限公司 |
| 数量： | 1 |
| 保质期： | 12月 |
| 规格： | 详见说明书 |
产品介绍 间充质干细胞（MSC）具有多向分化的潜能，体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目，目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。 为方便科研用户鉴定MSC的分化能力，麒盟干细胞研究中心精心优化MSC成脂诱导分化试剂盒，其中包括成脂诱导培养体系和鉴定所需要的染色液，让用户可以稳定有效地鉴定MSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法，用于鉴定MSC是否具有成骨分化能力。除此以外，试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意脂肪颗粒导致的自发荧光或遮光问题。 本产品仅适用于科研。 产品信息 产品名称：人骨髓间充质干细胞成脂分化试剂盒 货号：CHEM-200002 批号：见包装 试剂清单：
存储与有效期： A、D、H、I、J液于2-8℃避光保存，其余溶液于-20℃避光保存。所有组分均需要避免反复冻融及复温，各组分在所需要的温度下有效期为1年，配制完成的完全培养基于2-8℃保存，有效期为1个月。 产品介绍 人骨髓间充质干细胞（hBMSC）具有多向分化的潜能，体外在一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。2006年国际细胞治疗协会（ISCT）确定此三项检测指标是MSC鉴定的必检项目，目前以MSC为基础的研究报道均会对该三个指标进行鉴定。 为方便科研用户鉴定MSC的分化能力，麒盟干细胞研究中心精心优化hBMSC成脂诱导分化试剂盒，其中包括成脂诱导培养体系和鉴定所需要的染色液，让用户可以稳定有效地鉴定hBMSC的分化潜能。该试剂盒提供的实验方法为常规鉴定方法，用于鉴定hBMSC是否具有成骨分化能力。除此以外，试剂盒的诱导培养基还可用于诱导分化过程中的其他检测，如mRNA检测、lncRNA检测、microRNA检测、蛋白表达检测、免疫组化检测等。但若用于免疫荧光检测需注意脂肪颗粒导致的自发荧光或遮光问题。 本产品仅适用于科研。 操作方法 实验准备 ² 试剂配制： 2-8℃冰箱中过夜溶解B液一支。 注意：解冻后的血清有时会出现沉淀，这些沉淀不影响血清的质量，不必做过滤等处理。 诱导液A：室温融化C、E、F、G溶液各一支，将融化的溶液加入A液中，然后将B、D液加入A液中，晃动培养基使其充分混匀，配制成诱导液A。 诱导液B：将B、D液加入H液中，晃动培养基使其充分混匀，配置成诱导液B。 油红O染液（工作液）：取油红O储液，与蒸馏水以3：2的比例混合均匀，中性滤纸过滤，即配制成了油红O染液（工作液）。 注意：溶液溶解后旋涡混匀、1000g短时离心以使溶液集中于管底。将管内溶液加入A/H液后，吸取A/H液洗涤溶液瓶两次，将洗涤液加入A/H液中。所有液体混合成诱导完全培养基后必须充分混匀，2-8℃保存。E液较难溶解，需提前复温，反复摇动，在加入A液前须保证完全溶解。诱导液B可在需要时现配。整个过程需无菌操作，适当以75%酒精擦拭表面。 ² 培养皿处理： 加适量明胶溶液到培养器皿中，轻轻摇动使其覆盖整个培养器皿底面，室温静置30-60分钟。弃去明胶溶液，室温晾干。 注意：本试剂盒建议使用六孔板操作，每孔加明胶溶液1ml，使用其他培养器皿时需考虑实验结果的稳定性。整个过程需在超净工作台中操作，避免污染。 ² 自备试剂： l 消化液（0.25%Trypsin-0.04%EDTA） l 磷酸盐缓冲液（DPBS） l hBMSC完全培养基 l 4%中性多聚甲醛溶液 注意：若hBMSC完全培养基不含血清，则需要准备胰酶抑制剂。hBMSC消化极易过度，建议稀释消化液一倍，且严格控制消化时间。 操作步骤 1. 准备所需诱导分化的hBMSC，当细胞融合达85%左右时，用消化液消化细胞，并用hBMSC完全培养基重悬。 2. 按照3×104cells/cm2的密度将细胞接种于已明胶处理的六孔板中，每孔hBMSC完全培养基2ml，37℃、5%CO2培养箱中培养。 注意：细胞密度为该试剂盒的标准密度，若修改细胞接种密度则需要考虑实验结果的稳定性。 3. 当细胞融合达85%时，弃去原培养上清，添加诱导液A2ml/well，37℃、5%CO2培养箱中培养。 注意：成脂诱导后细胞易脱壁，换液时完全培养基必须经37℃复温。添加培养基时动作要轻柔，避免吹起细胞。 4. 诱导培养72h后弃去原培养上清，添加诱导液B2ml/well，37℃、5%CO2培养箱中培养。 5. 诱导培养24h后弃去原培养上清，添加诱导液A2ml/well，37℃、5%CO2培养箱中培养。 6. 重复步骤4、5约3-5次，待细胞内出现明显脂滴时更换为诱导液B继续培养。 7. 每2天更换新鲜诱导液B，继续培养至脂滴足够大时培养结束。 注意：换液时诱导液必须经过复温，否则影响诱导效果和可能导致细胞脱壁。根据实验需要选择培养结束时间，若成脂面积过大或脂滴过大导致连成片则不利于结果的呈现，建议提前终止。 8. 诱导培养结束时，弃去培养上清，DPBS洗细胞两次，4%中性多聚甲醛溶液2ml/well室温固定细胞20分钟。 注意：培养结束时或中途可以选择其他检测方法，如基因表达检测等，若采用自己拟定的检测方法则后续方案需要自己拟定。 9. 弃去固定液，DPBS洗2次，加入油红O染液1ml/well染色15分钟。 注意：该步骤适用于鉴定成脂能力，若出现脂滴（脂肪细胞）则会呈现红色着色。若需要得到美观的图片，则染色时间需自己掌握。 10. 弃去油红O染液，DPBS洗3次。 11. 显微镜下观察并拍照。 12. 结果判定：按照程序操作完毕，低倍镜下观察可见大面积红色着色点，20倍和40倍镜下可观察到红色球形在细胞内的情况，此红色着色球为脂滴，说明实验所用的hBMSC具有成脂能力。否则，所使用的hBMSC无成脂能力。 结果展示   相关产品
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发布于 ： 2021-08-06
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