【求助】共聚焦荧光染料选择问题

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【求助】共聚焦荧光染料选择问题

2021-08-15

问题描述：

我发过的帖子，版主为什么给我删了？
我想用共聚焦观察间期染色体，用涂染探针，有一个问题很困扰我，我想涂染完染色后用DAPI复染细胞核，但是目前哈尔滨的共聚焦都没有紫外激发光，不能激发DAPI，我怎么才能实现，用红色涂一条染色体，用绿色涂另一条，用DAPI蓝色染核，同时成像呢，所说的双光子显微镜可以么？我实在很迷惑，求求版主别再删我的帖子，尽管我现在只是一个索取者，还不能给大家提供有用的信息，但是相信有一天会为大家做贡献的，谢谢了

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skinner

用户

hho学的很快呀．把原来的那个贴子删了吧.你的问题我不是很熟．胡乱说几句吧．首先你必须要有能激发你所需要的三种颜色的显微镜．然后在同一视野下把3种颜色各拍一张照片（数码的），保存好，利用photoshop的叠加功能可以把3张照片合为一张就可以啦.请高手拍砖.

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wangx2180

用户

目前我所接触的激光共聚焦都没有紫外激发光，所以不能激发DAPI。应用激光扫描共聚焦显微镜操作系统的Ar/GHeNe双通道激光系统，同时扫描FITC标记的阳性反应物和Cy3标记的阳性反应物。扫描选用的参数为：激发光波长为488nm和554nm，观测光分别为518nm和575nm，物镜为40倍，扫描方式为点扫描，Zoom为（1.0）。经Lasersharp2000软件（4.5.3）摄像,分析。共聚焦会自动扫描出三章图片（两张单染，一张合成）。效果很好。

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mixley

用户

hoho我很聪明的，还要叠加呀？我不能用一个...么，我看到ZEISS上有的是这样的，488/513/560，比如呀，我记不得，是什么意思呢，是不是如果我找到3种染料激发光分别是488，513，560的话，就可以同时看到3种颜色，另外，双光子是怎么回事？为什么说他可以解决紫外激发的问题？救命呀，我什么都不会，也没有镜子，怎么办？哭！

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mixley

用户

那就是说我做不了细胞核了，我要做的事染色体在细胞核中的定位，如果然不了细胞核，我怎么分析呢？为什么很多国外的文章都能做呢，就是用ZEISS510，郁闷亚？

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