Details
Source
Thermusaquaticus
Description
- TaqDNAPolymerase,Native isaThermostableenzymeofapproximately94kDafrom Thermusaquaticus
Applications
- ReplicatesDNAat74°Candexhibitsahalf-lifeof40minutesat95°C(1,2)
- CatalyzesthepolymerizationofnucleotidesintoduplexDNAinthe5"→3"directioninthepresenceofmagnesiumions
- Maintainsthe5"→3"exonucleaseactivity
- Lacksthe3"→5"exonucleaseactivity
- RecommendedforuseinPCRandprimerextensionreactionsatelevatedtemperaturestoobtainawiderangeofDNAproducts upto10Kb
- RecommendedforuseinspecialPCRapplications,wheretracesof E.coli genomicDNAmayinterferewithamplificationspecificity
ReagentsSupplied
10XTaqBufferA
10XTaqBufferB
10XTaqBufferC
UnitDefinition
Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtocatalyzetheincorporationof10nmolesofdNTPintoacid-insolublematerialin30minutesat70°C
10XReactionBuffer
10XTaqBufferA(optimizationbufferwithoutMgCl2):AllowstooptimizeMgCl2 concentration
10XTaqBufferB(generalapplication,upto10kb): Contains15mM MgCl2 andis optimizedforusewith0.2 mMofeachdNTP
10XTaqBufferC(colored): EnrichedwithtwogeltrackingdyesandagelloADIngreagent,enablesdirectloadingofPCRproductsontoanagarosegel
StorageBuffer
20mMTris-HCl(pH8.0at22°C)
100mMKCl
0.1mMEDTA
1mMdithiothreitol
50%glycerol
StABIlizers
AssayConditions
25mMTris-HCl(pH9.5at25°C)
50mMKCl
10mMMgCl2
1mMdithiothreitol
200μMeachofdCTP,dGTP,dTTP,anddATP(amixofunlabeledand[α-32P]dATP)
10μgactivatedcalfthymusDNA
1mg/mlbovineserumalbumin
15 µgactivatedcalfthymusDNA
Totalreactionvolumeis50 µl
QualityControl
Allpreparationsareassayedforcontaminatingendonuclease,3"-exonuclease,andnonspecificsingle-anddouble-strandedDNaseactivities.Typicalpreparationsaregreaterthan95%pure,asjudgedbySDSpolyacrylamidegelelectrophoresis.
StorageConditions
Storeat-20°C
Shippedondryice
Downloads
MSDSPDF
References
1.Chien,A.,Edgar,D.B.andTrela,J.M.(1976)J.Bacteriol.127,1550
2.Kaledin,A.S.,Sliusarenko,A.G.andGorodetskii,S.I.(1980)Biokhimiya45,644
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1.小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法
(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块,在培养皿内用PBS冲洗.
(2).去除结缔组织及脂肪,剪碎肿块.
(3).小碎片移入1.20×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中.
(4).将200~300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL),染色3LL细胞,于4℃存放20~30分钟.
(5).测定580~750nm之间的发射荧光,以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分.
荧光燃料使用的问题有两个:
一个就是迁移性,使用时要严格控制用量,以避免产生迁移现象;
二是荧光染料使用有一个极限值,如果超量使用,导致荧光线被吸收,使吸收和发光成叠所致。
想请问一下,DAPI这个染料到底有没有膜通透性,我通过百度搜索查询关于DAPI染料的,基本上是说它能透过细胞膜对活细胞和死细胞均能染上蓝色;但是也有人说DAPI只可以透过死细胞膜,不能对活细胞进行染色,用以区分活死细胞,到底哪个是对的啊,蒙了!!!!!!
我想用共聚焦观察间期染色体,用涂染探针,有一个问题很困扰我,我想涂染完染色后用DAPI复染细胞核,但是目前哈尔滨的共聚焦都没有紫外激发光,不能激发DAPI,我怎么才能实现,用红色涂一条染色体,用绿色涂另一条,用DAPI蓝色染核,同时成像呢,所说的双光子显微镜可以么?我实在很迷惑,求求版主别再删我的帖子,尽管我现在只是一个索取者,还不能给大家提供有用的信息,但是相信有一天会为大家做贡献的,谢谢了

