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AAT Bioquest/Cell Meter™ Autophagy Fluorescence Imaging Kit/23001/200 Tests
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AAT Bioquest/Cell Meter™ Autophagy Fluorescence Imaging Kit/23001/200 Tests
品牌 / 
AAT Bioquest
货号 / 
23001
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Ex/Em (nm) 333/518
MW N/A
CAS # N/A
Solvent N/A
Storage F/D/L
Category Cell Biology
Labeling Cells
Related Cell Functional Analysis
Biochemical Assays
Autophagy is one of the major pathways for degradation of intracellular macromolecules in animal cells. The process of autophagy involves the sequestration of cytoplasmic materials and intracellular organelles in a membrane-bounded vacuole called autophagosome, the fusion of the autophagosome with lysosomes, and the subsequent degradation of sequestered materials. Cell Meter™ autophagy fluorescence imaging kit employs Autophagy Super Blue™ as a specific autophagosome marker to analyze the activity of autophagy. The assay is optimized for direct detection of autophagy in both detached and attached cells. The kit provides all the essential components for the assay protocol. The Cell Meter™ autophagy fluorescence imaging kit is optimized for fluorescence microscope, it is also suitable for flow cytometer. Autophagy Super Blue™ has fluorescence excitation and emission at Ex/Em = 333/518 nm. It gives much higher selectivity than other commercially available autophagy probes.
Spectrum Advanced Spectrum Viewer



This protocol only provides a guideline, and should be modified according to your specific needs.

1.           Culture cells to a density optimal for autophagy induction according to your specific induction protocol (about 1-2 × 104 cells/ well/96-well plate). At the same time, culture a non-induced negative control cell population at the same density as the induced population for every labeling condition. 

 

2.       Prepare Autophagy Super Blue™ working solution by diluting 20 μL of Autophagy Super Blue™ (Component A) to 10 mL of Stain Buffer (Component B).

Note: 20 μL of 500 X Autophagy Super Blue™ (Component A) is enough for one 96-well plate. Aliquot and store unused 500 X Autophagy Super Blue™ at < -20ºC. Protect from light and avoid repeated freeze-thaw cycles.

 

3.       Remove medium, add 100 μL of Autophagy Super Blue™ working solution (from Step 2) into each well, and incubate the cells in a 37ºC, 5% CO2 incubator for 15 min-1 hour.

Note: The appropriate incubation time depends on the individual cell type and cell concentration used. Optimize the incubation time for each experiment.

 

4.       Wash the cells with Wash Buffer (Component C) for 3-4 times, add 100 μL Wash Buffer (Component C)  to each well.

Note: It is recommended to increase either the labeling concentration or the incubation time to allow the dye to accumulate if the cells do not appear to be sufficiently stained.

 

5.       Monitor the fluorescent intensity with a fluorescence microscope or flow cytometer at Ex/Em = 330/520 nm.

References & Citations
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Methods for Measuring Autophagy Levels in Disease
Authors: Kanchan Phadwal, Dominic Kurian
Journal: (2017): 195--211

High glucose induces bone marrow-derived mesenchymal stem cell senescence by upregulating autophagy
Authors: Tzu-Ching Chang, Min-Fen Hsu, Kenneth K Wu
Journal: PloS one (2015): e0126537

Licochalcone A induces autophagy through PI3K/Akt/mTOR inactivation and autophagy suppression enhances Licochalcone A-induced apoptosis of human cervical cancer cells
Authors: Jen-Pi Tsai, Chien-Hsing Lee, Tsung-Ho Ying, Chu-Liang Lin, Chia-Liang Lin, Jung-Tsung Hsueh, Yi-Hsien Hsieh
Journal: Oncotarget (2015): 28851


AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司,前身为ABD Bioquest,总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年,一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术,综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究,引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络,为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。


美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括吸收(颜色),荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品,快速的丰富各个领域的产品。

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AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.

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PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。Ⅰ、材料1、PI(e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA)2、缓冲体系:1×PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Sant 查看更多>
Solution PreparationLysis buffer:0.15 M NaCl, 5 mM EDTA, pH 8.0, 1% Triton X100, 10 mM Tris-Cl, pH 7.4. Just before use, add 5 mM DTT, 0.1 mM PMSF inisopropanol, 5 mM ε-aminocaproic acid.2X Sample buffer:130 mM Tris-Cl, pH8.0, 20% (v/v) glycerol, 4.6% (w/ 查看更多>
1.将固定液中的凝胶摇动过夜或至少1小时。2.将保温液中的凝胶轻微振荡2小时。3.去离子水清洗凝胶3次,每次20分钟。4.将硝酸银溶液中凝胶轻微振荡30分钟。5.用去离子水快速洗胶30秒。6.将定影液中凝胶摇动5~30分钟,时间由所加的蛋白质量决定。7.如果已经达到所需的颜色深度,将凝胶放到定 查看更多>
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by Michael Koelle8/23/94You will have a couple frustrating sessions when you first attempt this technique, but everyone seems to master injection after a few d 查看更多>
L-乳酸脱氢酶测定实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。&lt;link rel=&quot;stylesheet&quot; type=&quot;text/css&quot; href=&quot;/ueditor/themes/ifra... 查看更多>
大多数用于分析蛋白质的现代电泳方法,都是建立在聚丙烯酰胺为介质的区带电泳或圆盘连续电泳的基础上(Raynond and Weintraub,1959;David,1964;Orn-stein,1964)。聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegel..electrophoresis,PAGE) 同时利用了分子大小和电荷差别两种属性,从而达到分离目的。[澳] 理查德 J. 辛普森 (Richard J.Simpson) 主编  何大澄 主译 查看更多>
在间期细胞核中,女性X 染色质和男性Y 染色质均可用特殊染色法显示出来。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。(北京出版社) 查看更多>
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做细胞免疫荧光实验,请问波长为633nm的选用那种荧光染料,从没接触到这样的实验,一切都要从头开始做,好晕呢.作实验真的郁闷.
荧光颜料有毒么? 123
713417ztUO2021-08-05
绝大部分合成染料本身都是没有特殊味道的,但你拿到的成品染料可能有味道,因在商品化过程都添加了助剂,有些助剂味道是很大的,比如木质素磺酸钠等。
请问有哪位高手用过EvaGreen的荧光染料,最近有人推荐其性能很好,目前已经有很多原来使用SYBRGreen的国内用户都已经改用该产品,不知具体效果究竟如何,有谁亲自用过啊,介绍一下经验吧,非常感谢!!!
荧光染料是一些具有特殊结构的化合物,其结构特征主要有以下三点:
(1)、分子内含有发射荧光的基团,如羰基、氮氮双键、碳氮双键等。
(2)、分子内含有助色基团。助色基团使光谱红移并增大荧光效率,如伯胺基、仲胺基、羟基、醚键、酰胺基等。
(3)、分子内含有刚性平面结构的共轭π键。分子内共轭体系愈大平面性愈强其荧光强度愈高。一些能提高共轭度的因素能提高荧光效率,并使荧光波长向长波方向移动。 就是荧光染料的附着物,主要作用有帮助荧光染料展色、提高荧光染料与下游树酯的相溶性、保护荧光染料的性能。通常载体树脂是强极性树脂,分子中含有胺基、羟基、醚键、酰胺基等强极性基团,一方面有助色作用,增大荧光效率;另一方面与荧光染料有很好的相溶性,有助于染料的均匀分散。
荧光颜料常用的载体树脂有胺基树脂、苯代三聚氰胺一甲醛树脂、聚丙烯酸酯树脂、聚酰胺树酯、聚酯树脂、聚氨酯树脂等。 (1)、热塑性荧光颜料:线型
(2)、热固性荧光颜料: 体型
(3)、可溶解色精荧光颜料
(4)、水乳型荧光颜料 (1)、胺基树酯
(2)、聚酰胺树酯
(3)、聚酯树酯
(4)、丙烯酸乳液 (1)、塑胶类
低温型
中温型
高温型
(2)、涂料类
水性涂料
油性涂料
粉末涂料 (1)、含甲醛
(2)、不含甲醛
我现在正在做细胞吞噬铁的实验,想在共聚焦下观察细胞吞噬的实验,想找一个荧光染料可以染到细胞膜的?新手上路,还望各路高手多多指点啊!
希望同路人多多交流啊!
一种染料的激发发射波长是488/560nm,显红色,其在细胞内分布未知,一种是核染料DAPI,这两种是确定会存在的荧光物质,而现在想选择一种能染出细胞轮廓(细胞膜或细胞骨架)的荧光染料,不知可选择哪些荧光染料染的效果比较好。FITC-鬼笔环肽不知是否可以,因为FITC的激发发射波长是495/520nm,想知道选择FITC-鬼笔环肽的话,在做共聚焦时会不会跟488/560nm的染料有干扰?因为好像使用的是同一个激发器。
那种一掰就咔嚓一下的,然后出现荧光的能戴在手上的一次性荧光棒有辐射吗?带的时间长点会对身体有害吗?希望专业人士解答,说下自己的工作好吗?

想请问一下,DAPI这个染料到底有没有膜通透性,我通过百度搜索查询关于DAPI染料的,基本上是说它能透过细胞膜对活细胞和死细胞均能染上蓝色;但是也有人说DAPI只可以透过死细胞膜,不能对活细胞进行染色,用以区分活死细胞,到底哪个是对的啊,蒙了!!!!!!

北京安立通科技有限公司官网123
要拼才能赢2021-07-28
荧光颜料有毒么?
染料的荧光跟重金属之间没有必然联系。一般含有重金属的染料都是金属络合染料,现在几乎绝迹了。现在大多数染料都是活性、直接、还原和分散这几种类型。都是不含重金属的。而带有荧光的染料是非常少的,只有那么几种,跟重金属没有丝毫关系。
挺多的呀,AF532,AF555, Cy3,ATTO532之类的。如果是要用来做原料合成其他的分子的话,这几种就不合适了,太贵...罗丹明类的会便宜些
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