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| 实验方法原理 | 到目前为止，在常用来检测经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的蛋白质的方法中，SYPRORUBY可能是最灵敏的突光染色方法了，它能检测出仅含1?2ng蛋白的条带。遗憾的是，如此微量的蛋白条带经染色后用肉眼却不可见，需要一个荧光扫描仪检测（SYPRORuby的最大激发光和发射光的波长分别是280nm和450nm/610nm)。蛋白含量约50ng的条带在紫外透射光的帮助下肉眼可见。本方案是由GenomicSolution提供的SYPRORuby染色方法改写而来。这种方法也与质谱兼容。关于荧光检测技术，包括成像装置和检测设备等，请详阅Patton(2000)。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 单向凝胶电泳分离后的蛋白样品 试剂、试剂盒 | 甘油 仪器、耗材 | 铝箔荧光扫描仪塑料容器 实验步骤 | 1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂A的塑料容器中，试剂A的量要足够覆盖整块凝胶。例如，一块典型的mini胶（8cmXIOcm或8cmX8cm)需用IOOml的试剂A。 2.室温下摇动凝胶30min。 3.弃去使用后的试剂A，加入足够覆盖凝胶量的SYPRORuby染料，用铝箔遮盖好容器，室温下摇动凝胶90mm至过夜。 未使用过的SYPRORuby染料仅需染色约2h，突光扫描仪（MolecularDynamiCSTyphoon8600或类似产品）就能检测到Ing条带。若重复使用染料按步骤③染色2h，灵敏度将下降，只能检测到约Sng蛋白含量的条带。 4.弃去SYPRORuby染料（或者保存起来以备后用，见步骤③的注解）。 5.加人适量的试剂B，室温下摇动30~60min。 6.将荧光扫描仪设置在523nm处对凝胶扫描，或者将凝胶保存在适量的2%甘油中。 凝胶在2%甘油中可保存6个月，而且荧光信号不会减弱。 7.若要长期保存凝胶，应用干胶机或让凝胶在空气中干燥。若采用空气干燥凝胶，需将凝胶放在两张湿的玻璃纸中间，拉紧玻璃纸，待胶静置于空气中变干。空气干燥后的凝胶可永久保存 |
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发布于 ： 2021-08-21
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