细胞死亡的形态学评价实验
| 实验材料 | 细胞悬液 试剂、试剂盒 | LenkostatHoechst33258吖啶橙溴化乙锭 仪器、耗材 | 光学显微镜荧光显微镜 实验步骤 | 一、旋转细胞制备的Lenkostat染色 1.在转瓶小室中加入100μl细胞悬液，500r/min离心2分钟。载玻片风干至少5分钟。 2.在Lenkostat固定液中固定细胞10秒：2mg/ml孔雀石绿溶于100%甲醇。可滴去。 3.载玻片在Lenkostat溶液1中浸10秒钟使细胞质染色：0.1%依红；0.1%甲醛；0.4%磷酸氢二钠；0.5%磷酸二氢钾。可用纸巾吸干。 4.载玻片在Lenkostat溶液2中浸10秒复染细胞质：0.04%亚甲蓝；0.04%天青A；0.4%磷酸氢二钠；0.5%磷酸二氢钾。冲去多余染料，风干载玻片。 5.在光学显微镜下观察确定是否获得了所需染色。如是，可用Pemount制作载玻片标本。 6.如要测定凋亡数量，应放大40倍观察。至少应分析包括约100个细胞的3个视野，给出凋亡和坏死的百分率。 二、悬浮细胞Hoechst33258染色 1.用1μlHoechst33258孵育100μl悬浮细胞10分钟。 2.样品加入转瓶小室中，500r/min离心2分钟，空气干燥后在细胞上加盖玻片，以减小光衍射，用装备有DAPI滤光片的荧光显微镜计数至少300个细胞，使用60倍物镜。 三、吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色 1.用1μlAO/EB溶液孵育25μl悬浮细胞。轻轻混合。每个样品显微定量前应混合。样品必须立即测评。 2.置10μl悬浮细胞于显微载玻片上，加盖玻片，用装有荧光滤光片、60倍物镜的荧光显微镜检测至少300个细胞。 |
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发布于 ： 2021-09-07
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