谁在做这个实验:细胞膜完整性及膜转运功能检测实验 实验方法 丁 ...
| 实验方法原理 | |
|---|---|
| 实验步骤 | 1.主要试剂的的配制 碘化丙锭（PI）染色液（4℃避光保存）：Pl，100μg/ml；TritonX-100，1.0%；NaCl0.9%。 2.操作流程 2.1样本的准备 2.1.1培养细胞收集悬浮细胞于Eppendorf管中。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液，1000r/min离心5min。 2.1.2新鲜实体组织取材组织用PBS漂洗干净后，浸泡在含PBS的平皿或青霉素小瓶内，用眼科剪尽可能将组织剪碎，吸去上清液，组织块转入大瓶中加入10～20ml酶（200μg/ml胶原酶），37℃消化30min，在不锈钢网上轻轻研磨，使组织和细胞分离，用200目筛网过滤2次。 2.1.3石蜡切片组织切50μm厚切片4张，置玻璃试管中，加二甲苯5ml，脱蜡3×5min，无水乙醇洗3×5min，蒸馏水洗5min，加2ml0.5%胃蛋白酶（pH1.0），振荡消化30min，PBS洗终止消化，最后用200目筛网过滤2次。 2.2染色方法 制备好的单细胞悬液可用70%乙醇固定，4℃保存备用。染色前用PBS稀释单细胞，离心沉淀，弃上清，加入200μlRNA酶A，37℃水浴30min，再加入800μlPI染色液，混匀，4℃避光孵育30min。 2.3上机检测记录 激发波长488nm处红色荧光。 3.结果观察 细胞凋亡时，G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型。在光散射图谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。细胞坏死时，细胞周期中的细胞均出现不同程度的减少，亚二倍体细胞量多少不等。在光散射图谱上，的向光散射和侧向光散射均高于正常。 |
| 注意事项 | |
| 其他 |
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发布于 ： 2021-09-18
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