认证认可关键技术研究与示范项目
实验方法原理 | 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下:.![]() | ||||||||
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实验材料 | 马铃薯块茎 试剂、试剂盒 | 聚乙烯吡咯烷酮磷酸缓冲液磷酸缓冲液和度硫酸铵儿茶酚三氯乙酸 仪器、耗材 | UV-1206UV-1240分光光度计离心机恒温水浴研钵或匀浆机试管移液管纱布袋 实验步骤 | 1.粗酶液的制备 称取马铃薯块茎5g于研钵中,加入0.5g不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸馏水浸洗,然后过滤以除去杂质)和100ml0.1mol·L-1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,用几层纱布袋过滤,滤液加入30%饱和度硫酸铵,离心除沉淀,上清液再加硫酸铵使达60%饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2~3ml0.01mol·L-1pH6.5磷酸缓冲液中,即为粗制酶液。 2.活性酶的测定 在试管中加入3.9ml0.05mol·L-1pH5.5磷酸缓冲液,1.0ml0.1mol·L-1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min,然后加入0.5ml酶液(可视酶活性增减用量),迅速摇匀,倒入比色杯内,于525nm波长处以时间扫描方式,在1~2min内测定吸光度变化(A)值。 其他 | 酶活性的计算: ![]() |
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发布于 : 2018-08-06
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