Overview:
Lysyl-endopeptidase(Lys-c)wasisolatedfromtheGram-negativesoilbacteriumAchromobacterlyticusbyMasakietal.TheproteinhydrolyzesamideandpeptideesterbondsatthecarboxylicsideoflysineandS-aminoethylcysteineresiduesmakingitanimportanttoolforenzymaticproteinsequencingandLys-Xcompoundsynthesis.Theenzymefunctionsoptimallybetween30–37oCandsuffersfromdegradationwhensubjectedtotemperaturesabove50oC.Lysyl-endopeptidaseretainscompleteactivityafterincubationin4Mureaorin0.1%SDSsolutionforupto6hoursat30oC.Conversely,theenzymeisinhibitedbyDFP,PMSF,TLCK.Lysyl-endopeptidaseisinvolvedduringtheproductionofrecombinantinsulinandinproteomicsresearch.ImmobilizedLysyl-Endopeptidaseiscovalentlycross-linkedtoanagarosematrixcircumventingtheneedforenzymeremovalaftercleavage.Theresincanbereused10-20timesafterregeneratingwhenproperstorageconditionsarefollowed.
GeneAliases:
API,ProteaseI,Lysylendopeptidase
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影响核酸电泳迁移率的几个因素
1、核酸分子大小
在一定浓度的琼脂糖凝胶中，DNA片段迁移距离和其含有的碱基对数量成反比，因此可以通过与标准条带迁移距离进行比较，由此得出目的条带的大小，但这仅对双链线性的DNA比较准确（DNAMarker一般为双链线状DNA），且对大于20kb的DNA不适用（普通琼脂糖凝胶很难将其分开）。
2、核酸分子构象
DNA分子在电场中的迁移速度不仅和分子量有关，还和它本身的构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中的移动速度不一样，移动速度次序为：共价闭环DNA>线性DNA>开环DNA。当琼脂糖浓度太大时，环状的DNA一般不能进入胶内（停留在孔中）。
3、琼脂糖浓度
同样的线状DNA分子在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速度不同，DNA电泳迁移率的对数和琼脂糖凝胶浓度呈线性关系，凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。
琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围
凝胶浓度（%）线性DNA长度（bp）
0.51000~30000
0.7800~12000
1.0500~10000
1.2400~7000
1.5200~3000
2.050~2000
4、电源电压
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率和所加电压成正比。但电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分离率达到最大，所使用的电压不得超过5V/cm。
5、电泳方式
用于分离核酸的琼脂糖凝胶电泳可分为垂直型及水平型(平板型)。垂直型电泳，一般用聚丙烯酰胺凝胶做为支撑物。水平型电泳时，凝胶板完全浸泡在电极缓冲液下1-2mm，故又称为潜水式。目前更多用的是后者，因为它制胶和加样比较方便，电泳槽简单，易于制作，又可以根据需要制备不同规格的凝胶板，节约凝胶，因而较受欢迎。
6、嵌入染料的存在
常用的荧光染料EB可以嵌入到堆积的碱基对之间，使其刚性更强，并使其迁移速率有所下降。
7、电泳缓冲液的离子强度
电泳缓冲液的组成和离子强度也能影响DNA的迁移速度。在离子存在很少的情况下（如无用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误用10×电泳缓冲液），则电导率很高并产热明显，严重时能引起凝胶融化或DNA变性。
大家好，本人是实验新手一枚，目前在学做琼脂糖电泳，我是提取基因组DNA，然后以500ngDNA为模板，按照以下反应体系PCR:Q5高保真热启动2Xmastermix12.5UL;上下游引物终浓度0.5uM,DNA模板500ng，加水补支总体积25ul,反应程序，98℃30s，98℃5S,62℃10s,72℃20s，35或者40个循环，72℃2min,4℃保存，PCR产物取5UL行2%琼脂糖电泳，EB染色，50ul琼脂糖胶加入10mg/mlEB染液5ul，但是结果几乎看不到条带，但是Marker很清晰。最后我把PCR产物用分光光度计测量浓度，发现浓度在400-600ng/ul之间，260/280接近1.80,我想知道我哪里做错了，才导致看不到条带呢？请园子里的老师指教，在此，我首先感谢大家了！
biowest agarose 指的是西班牙琼脂糖。
agarose指的是琼脂糖。
TBE作为电泳缓冲液，其中的离子可以导电。并且TE作为DNA的储存液，可以保证DNA免受DNA酶的降解，其中的离子也可以稳定DNA的存在。
交联琼脂糖凝胶是生物分离中常用的色谱基质,利用不同的功能基对其表面的羟基进行修饰,进而制备出疏水色谱、离子交换色谱和亲和色谱等商业填料,这些填料在生物大分子的分离纯化中得到了广泛应用。对于修饰凝胶的分离性能,很多研究者都给予了广泛的关注,但凝胶本身的性状如耐压能力以及其微观结构的改变并未受到应有的重视。而这些性状的改变必然影响修饰后材料的应用范围且与其分离性能存在内在的联系,因此本文以羰基二咪唑(CDI)这种常见的羟基活化剂活化交联琼脂糖凝胶,键合不同功能基,考察修饰后凝胶其耐压能力和微观结构的变化,寻找其中的规律,为以交联琼脂糖凝胶为基质的色谱填料的应用提供参考。
琼脂糖是线性的多聚物，基本结构是1,3连结的β-D-半乳呋喃糖和1,4连结的3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。它们的结构相似，但带硫酸根和羧基组分，凝胶能力差。
琼脂糖（Agarose）的特性详细介绍可以登录生物帮看看， http://www.bio1000.com/news/cp/ 生物产品,生物学新技术,生物研发,生物产业,生命科学创新产品。
