Description
CNTF is a potent neural factor that was originally characterized as a vital factor for the survival of chick ciliary neurons in vitro. CNTF is also important for the survival of other neural cell types including primary sensory neurons, motor neurons, basal forebrain neurons and type 2 astrocytes. CNTF is highly conserved across species and exhibits cross-species bioactivity. Recombinant human CNTF is synthesized as a 199 amino acid polypeptide (22.8 kDa) lacking a hydrophobic N-terminal signal for secretion.Manufactured using all non-animal reagents.
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配胶、上样、跑胶、半干转无特殊,半干转后,就用TBST浸润一下后放入封闭液(试过5%牛奶、5%BSA)2小时,后取出直接抗体孵育(目标蛋白抗体1:1000、1:1500、1:2000【建议浓度1:1000-3000】,二抗1:2000、1:3000、1:5000【建议浓度1:1000-5000】,内参beta-actin差不多,目标蛋白4度过夜,内参室温2小时),孵育完后,TBST洗三次,每次10min,后二抗孵育,完后同样TBST洗三次,每次10min,后进行ECL发光液浸润2min,暗室压片2min(主要问题是在暗室中可以看到整张PVDF膜都有荧光,郁闷),显影定影,结果在胶片PVDF膜位置很黑,虽然可以见到我的条带,但是无法使用,不知道究竟怎样解决?(实验室另一位同学不存这样的问题)
试过几次都是同样的问题,是封闭的不好?抗体稀释度不够?TBST洗得不好?ECL发光步骤问题?渴求园里战友指导,谢谢!
我只听说在研究分子表面蛋白质时会用到,最近还有一个华裔科学家因为发光蛋白得了诺贝尔奖的。
具体的应用有:
细胞检测中的应用
脂质过氧化物检测的应用(自由基、活性氧分析)
生物传感器的研究应用
分子生物学研究的应用
卫生学检测中的应用
环境检测应用
药物筛选
医学应用
应用化学发光免疫分析法可用于对甲状腺素类、肿瘤标记物、生殖-孕激素类、血清抗原抗体类、心脏指示类等项目检测。

