Certificate of Analysis | ||||
Monoclonal Antibody: | 10E11 (clone: Please Inquire) | |||
Vial: | Red cap; 100µl | |||
Immunogen: | Der p 2 | |||
Isotype: | Please Inquire | |||
Specificity: | Please Inquire | |||
Purification: | Please Inquire | |||
Concentration: | 1-2 mg/ml in phosphate buffered saline, pH 7.4 Based on A280 for IgG (1.42 = 1mg/ml). 0.22μm filtered, preservative free. Optimized for use in ELISA. | |||
Storage: | Store at 4°C | |||
For Research Use Only: Not for Diagnostic or Therapeutic Use | ||||
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你是说用另外的方法来验证结果吗?
3-硝基邻苯二甲酸可作为鲁米诺的合成原料。3-硝基邻苯二甲酸与肼在高沸点溶剂(如二甘醇)中发生缩合反应,失去一分子水,生成3-硝基邻苯二甲酰肼。然后以保险粉还原3-硝基邻苯二甲酰肼中的硝基,得到3-氨基邻苯二甲酰肼,即是鲁米诺。
我们常说的鲁米诺试剂是鲁米诺与过氧化氢(双氧水的主要成分)的混合物,主要用于现代刑侦的的血液检测。鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子(Dianion),它可被过氧化氢分解出的氧气氧化,产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定,立即分解出氮气(鲁米诺被有机氧化剂如二甲基亚砜氧化后不是生成氮气,而是生成含氮有机物),生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中,释放的能量以光子的形式存在,波长位于可见光的蓝光部分。鲁米诺只有用氧化剂处理过才会发光。通常使用双氧水和一种氢氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。在铁化合物催化下,双氧水分解为氧气和水:2H2O2→O2+2H2O实验室中常以铁氰化钾作为催化剂铁的来源,而法医学上的催化剂则恰好是血红蛋白中的铁。很多生物系统中的酶也可催化过氧化氢的分解反应。鲁米诺试剂使用识别血液的试剂,血迹即使被擦拭,血液中的血红素还是会残留下来,当鲁米诺试剂喷在血红素上,会与活性氧产生氧化作用,释放出蓝紫色荧光。被成为鲁米诺反应。是鉴定血液用的有机物质。
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配胶、上样、跑胶、半干转无特殊,半干转后,就用TBST浸润一下后放入封闭液(试过5%牛奶、5%BSA)2小时,后取出直接抗体孵育(目标蛋白抗体1:1000、1:1500、1:2000【建议浓度1:1000-3000】,二抗1:2000、1:3000、1:5000【建议浓度1:1000-5000】,内参beta-actin差不多,目标蛋白4度过夜,内参室温2小时),孵育完后,TBST洗三次,每次10min,后二抗孵育,完后同样TBST洗三次,每次10min,后进行ECL发光液浸润2min,暗室压片2min(主要问题是在暗室中可以看到整张PVDF膜都有荧光,郁闷),显影定影,结果在胶片PVDF膜位置很黑,虽然可以见到我的条带,但是无法使用,不知道究竟怎样解决?(实验室另一位同学不存这样的问题)
试过几次都是同样的问题,是封闭的不好?抗体稀释度不够?TBST洗得不好?ECL发光步骤问题?渴求园里战友指导,谢谢!

