- Overview
- Data/Specifications
- Literature/Support
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Overview
Type I collagen is the most abundant collagen and is found in connective tissues including tendon, ligament, dermis and blood vessel. It is the major component and the primary determinant of tensile strength of the extracelluar matrix (ECM). It is widely used as a thin layer on tissue-culture surfaces to enhance the attachment and proliferation of a variety of cells including endothelial cells, fibroblasts, hepatocytes, epithelial cells etc. In addition, collagen I can self-assemble into a 3-D superamolecular gel in vitro, making it an ideal biological scaffold to promote more in vivo-like cellular morphology and function.
Type III collagen is the second most abundant collagen in tissues and is found most commonly in tissues exhibiting elastic properties such as skin, lungs, intestinal walls and walls of blood vessels. It is a homotrimer comprised of three alpha-1 chains and resembles other fibrillar collagens in structure and function. It is synthesized as procollagen, similary to collagen I, but the N-terminal propeptide remains attached in the mature fibrillar type III form.
Symbols/Related Terms:
- COL1A1
- COL1A2
- COL3A1
- Collagen type III, alpha 1
- osteogenesis imperfecta
Data/Specifications
Purity:
Bovine collagen type I - 45%
Bovine Collagen type III - 45%
Bovine collagen other types - below 10%
Non-collagen proteins - below 0.5%
Form: 10 mg lyophilized, salt-free
Purification: Partial pepsin digestion in acidic conditions and differential salt precipitation.
Source: Bovine (calf) skin. Collagen was extracted from washed dissected tissue into dilute acetic acid after pepsin treatment. Collagen type I and III were purified by using differential salt precipitation.
Reconstitution: Use 0.5 M acetic acid, pH 2.5. Dissolved collagen retains immunologic properties of native collagen. Structure of native collagen confirmed by ability to form microfibrils.
Storage:Collagen dissolved in acetic acid is stable at 4 °C for 1 month. Lyophilized collagen long term storage (2 years) at -20°C or lower.
Literature/Support
Bovine Type I and III Collagen Insert (PDF)
Note: inserts are for review only. Please refer to the insert shipped with your product to ensure the most up-to-date revision is being used.
How To Use
Key Applicatons:
- Coating material for cell culture studies.
Note: May not be suitable for 3-D gel formation.
Related Products
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能用的条件：1.分子的小鼠和人差异小，2.小鼠细胞本身不含有鼠抗体的结合受体；
不能用的条件：1.分子种属间差异大，2.采用的小鼠细胞株表面有鼠抗体的结合受体。
推荐尽量采用抗鼠的抗体，义翘神州兔单抗技术做出来的FCM抗体不少，可以到官网搜一下看看。
根据这个信息进行适宜的选择。
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
例如 GST (1-109):
•epitope corresponding to amino acids 1-109 mapping at the N-terminus of GST of Schistosoma japonicum origin
•recommended for detection of GST fusion proteins and glutathione-S-transferase (GST) of Schistosoma japonicum origin by WB, IP, IF and ELISA
还有Schistosoma japonicum origin 跟我载体pGEX4T-1表达的融合蛋白可用Western Blot吗?它们有什么关系？
十分感谢
无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，Immunetech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。
1.收到抗体和重组蛋白后的操作
收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋白是溶液态），请务必在4℃，12000rpm，离心3分钟，再打开管盖进行分装、溶解和保存（如果抗体和重组蛋白体积小于50µl，请延长离心时间至5分钟，以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来，干粉状态的同样适用）。Immunetech的抗体和重组蛋白使用特制的储存管，只有在12000rpm离心3分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来（即使是在10000rpm离心也会离心不完全，导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象）。请详细阅读说明书，并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。
2.抗体和重组蛋白的长期保存
对于Immunetech（苏州杰恩生物）大部分抗体和重组蛋白，比较合适的保存方式是：抗体分装后保存在-20℃，重组蛋白分装后保存在-80℃。
（1）分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。
（2）分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10µl每份。因为分装体积越小，抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
（3）复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来。
（4）抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完，4℃保存尽量不要超过1天。
（5）绝对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中，将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
3.抗体和重组蛋白的短期保存
大部分Immunetech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白收到后4℃短暂保存1~2周，对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用（1~2周内），推荐在4℃保存，这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体和重组蛋白。
4.抗体和重组蛋白的运输条件
一般的运输过程需要1~2周的时间，所以是在低温4℃的条件下来完成的。4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中一般避免干冰运输。
5.抗体和重组蛋白的稳定性
（1）抗体的稳定性是自然界长期进化的结果，抗体是免疫系统中最重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果，在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。
（2）抗体的高Tm值，在室温下，甚至短时间温度达到50~60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持其应有的活性。
（3）抗体和重组蛋白的纯度。Immunetech采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术，确保抗体和重组蛋白产品的高纯度，保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。
（4）抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。Immunetech大部分抗体和重组蛋白浓度为1mg/ml，抗体和重组蛋白纯度高，特异性好，效价更高。
6.重组蛋白的特性
Immunetech（苏州杰恩生物）的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immunetech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100µg，用86µl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
