

Thisproductisfreezedried.Allwatermoleculeshavebeenremoved.

Everylotistried&testedinarelevantBIOLOGicalassay.
OurBioassay
- Wu,W. etal. (2012) Neurosci.Lett. 506, 307.
- AlomoneLabsAmitriptylinehydrochlorideinhibitsL-typevoltage-gatedCa2+ currentsexpressedin Xenopus oocytes.A.TimecourseofCaV1.2/α2-δ1/β1currentinhibitionby800µM Amitriptyline hydrochloride(#A-155).Currentswereelicitedbyapplicationofvoltagerampsfromaholdingpotentialof-100mVto+50mV(100msec).B.Superimposedexampletracesofcurrentresponsesbeforeandduringperfusionof800µMAmitriptylinehydrochloride,asindicated.
- 1.Soldatov,N.M. (2012) ISRNMol.Biol. 2012,691341.
- 2.Haderer,A. etal. (2003) Anesth.Analg. 96, 1707.
- 3.Baldessarini,R.J. etal.(1995) ThePharmacologicalBasisofTherapeutics 431.
- 4.Bryson,H.M.and Wilde,M.I. (1996) DrugsAging 8, 459.
- 5.Zahradník,I. etal.(2008) J.Pharmacol.Exp.Ther. 324, 977.
Voltage-gatedL-typeCaV1.2calciumchannelscouplemembranedepolarizationtotransientincreaseincytoplasmicfreeCa2+concentrationthatinitiatesanumberofessentialcellularfunctionsincludingcardiacandvascularmusclecontraction,geneexpression,neuronalplasticity,andexocytosis1.
Tricyclicantidepressants(TCAs)areknowntoinhibitCa2+currents,includingtheL-typeCaV1.2channelinheartmyocyteandneurons2.Otherknownphysiologicaltargetsoftricyclicantidepressantsinthecentralnervoussystemarethe5-HT2serotoninreceptorsandtheα1-adrenergicreceptors3.
Amitriptylinehydrochloride,atricyclicantidepressant,isusedforanumberofmedicalconditionsincludingmanagementofdepressive,anxietyandbipolardisorders3andmanagementofchronicpainsuchasneuropathicpain,diabeticneuropathy,postherpeticneuralgiaandfibromyalgia4.
Theproposedmechanismsofactionforamitriptylinehydrochlorideincludeinhibitionofthereuptakeofserotoninandnorepinephrine,inhibitionofNMDAreceptors,ofvoltage-gatedionchannelssuchasCa2+andNa+channelsandinteractionwithadenosinereceptors5.
Amitriptylinehydrochloride(#A-155) isahighlypure,synthetic,andbiologicallyactivecompound.
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此法适用于小量抗体的荧光素标记,标记简便,非特异性染色较少。
(1)试剂和材料 试剂和材料同改良法。
(2)方法及步骤
①用0.025mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0,将欲标记免疫球蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中。
②用同一缓冲液将FITC配成0.1mg/ml的溶液,按10mg/ml球蛋白溶液体积的10倍,将FITC稀释液盛于圆柱形容器内,并使透析袋浸没于FITC液中。
③容器顶端盖紧,底部放搅拌棒,在4~C电磁搅拌下透析标记24h。取出透析袋中标记液,即刻用SephadexG50凝胶过滤,去除游离荧光素,分装,贮存于4℃中。
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。免疫荧光细胞化学技术将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.免疫酶细胞化学技术是目前免疫组织化学研究中最常用的技术.基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究.免疫胶体金技术就是用胶体金标记一抗,二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性,定位或定量研究.由于胶体金的电子密度高,多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究。近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。
1、直接法:这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体,染色时将该抗体直接滴在载玻片上进行孵育,使之直接与载玻片上的抗原结合,在荧光显微镜下直接观察,作出判断。该方法评价:简单易行、特异性高、快速方便,常用于肾活检组织几种免疫球蛋白的检测和病原体的检测。但其不足是只能检测相应的一种物质,敏感性较差,效果有时不理想,目前较少作为更多方面的检测。
2、间接法:该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后,继用间接荧光抗体,与前面的抗原抗体复合物结合,形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下,根据复合物的发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价:由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多,发出的荧光亮度强,因而其敏感性强。目前本法应用较广泛,只需制备一种种属荧光抗体,即可适用于多种第一抗体的标记显示。
3、如果你有针对待查抗原一抗(荧光素标记),而且你的待检抗原表达也比较丰富的话,做直接法也未尝不可。不过如果你不具备上述两个条件的话,还是推荐你做间接法。
4、如果你做的是细胞骨架,那么就是用直接免疫荧光。如果是一般的蛋白表达,这个要看有没有试剂是直接标记的;如果没有,还是只能考虑间接荧光。直接荧光相对间接荧光可以避免非特异姓染色,当然步骤也少了些。我做过细胞骨架的直接染色,效果很好。
标记免疫技术主要类型:放射免疫技术、酶免疫技术、荧光免疫技术、化学发光免疫技术 基本原理:利用化学或生物发光系统作为抗原抗体反应的指示系统,借以定量检测抗原或抗体的方法,发光物质可直接作为抗原抗体的标记物,也可以游离形式用于催化剂(酶)和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。向左转|向右转
做荧光抗体试验时,定量测定荧光素的含量用到的是哪个波长?
CD133抗原为5次跨膜( 5_transmembrane, 5_TM )糖蛋白。
CD133抗原可被3种CD133抗体识别:克隆AC133、293C3和AC141。AC133直接与CD133/1糖基化抗原表位结合,可用于从外周血、骨髓、脐带血及其它组织中分析和分选CD133+细胞。
多数情况下CD133/1和CD133/2识别同种细胞,只是有表达强度的差别,但是在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)和某些急性髓性白血病中发现CD133/1和CD133/2表达不同,或者正常表达强度紊乱。
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