LyophilizedPowderThisproductisfreezedried.Allwatermoleculeshavebeenremoved.
AntigenIncl.ThisantibodyisshippedwithitsantigenFREEofcharge!
- PeptideKDYPASTSQDSFEA(C),correspondingtoaminoacidresidues263-276ofhumanKV1.3(AccessionP22001).ExtracellularloopbetweendomainsS1andS2.

WesternblotanalysisofhumanJurkatTcellleukemiacelllysate(lanes1and3)andmousebrainlysate(lanes2and4):1-2. Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)-BiotinAntibody(#APC-101-B),(1:1000).
3-4.Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)-BiotinAntibody,preincubatedwiththecontrolpeptideantigen.
Immuno-colocalizationofKV1.3andKV1.5inmousecerebellumImmunohistochemicalstainingofmouseperfusion-fixedfrozenbrainsectionsusing Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)-Biotin Antibody(#APC-101-B)(1:400),and Anti-KV1.5(KCNA5)-ATTO-550Antibody (#APC-004-AO),(1:60).A.KV1.3staining(green)isdetectedinBergmanngliasomaandprocessesinthemolecularlayer(Mol)(arrow).B.SamesectionshowsstainingforKV1.5(red).C.Mergeofthetwoimagessuggestsconsiderableco-localizationinthesomaofBergmannglia.Inthemolecularlayer,thedistributionofKV1.5isdiffuse,unlikethediscretestainingforKV1.3inglialprocesses.CellnucleiwerevisualizedwithDAPI(blue).
CellsurfacedetectionofKV1.3inliveintacthumanJurkat Tcellleukemiacellline:___ Cells+Streptavidin-Alexa647.
___ Cells+ Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)-BiotinAntibody(#APC-101-B),(1:10)+Streptavidin-Alexa647.Thecontrolantigenisnotsuitableforthisapplication.
- 1.Chandy,K.G.etal.(2001)Toxicon39,1269.
- 2.Koo,G.C.etal.(1997)J.Immunol.158,5120.
KV1.3belongstothe Shaker familyofvoltage-dependentK+ channels. Thechannel,encodedby KCNA3,iswidelyexpressedinthebrain,lungandosteoclastsandinseveralcell populationsofhematopoieticorigin.TheprominenceofKV1.3channelsinthesecells(particularlyinTlymphocytes)directedmuchresearch attention.ItwasfoundthatKV1.3isthemainchannelresponsIBLeformaintainingtherestingpotentialinquiescentcellsandregulatingthe Ca2+ signalingthatisindispensablefornormalTlymphocyteactivation.1,2 BasedonthecentralroleofKV1.3inregulatingtheinitiationofanimmuneresponse, thechannelhasbeenrecognizedasapotentialtargetforimmunosuppressantdrugs.1ThecentralroleofKV1.3inimmunesystemcellscreatedarealneedforaspecific antibodythatwouldbeabletoworkinflowcytometryapplications.
Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)Antibody(#APC-101)isahighlyspecificantibodydirectedagainstanextracellularepitopeofthehumanprotein.Theantibodycanbeusedinwesternblot,immunohistochemistry,livecellimaging,andindirectflowcytometryapplications.IthasbeendesignedtorecognizeKV1.3potassiumchannelfromhuman,mouse,andratsamples.
Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)-BiotinAntibody(#APC-101-B)isdirectlylabeledwithbiotin.StrepavidintaggedwithHRPorwithafluorescentprobecanthenbeusedtodetecttheprotein.Thebiotin/strepavidinsystemisidealforminimizingcross-reactivitywhensamespeciesantibodiesaresimultaneouslyused.Anti-KV1.3(KCNA3)(extracellular)-BiotinAntibody hasbeentestedinwesternblot,immunohistochemistryanddirectflowcytometryandisspeciallysuitedtoexperimentsrequiringsimultaneouslabelingofdifferentMarkers.
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免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
此法适用于小量抗体的荧光素标记,标记简便,非特异性染色较少。
(1)试剂和材料 试剂和材料同改良法。
(2)方法及步骤
①用0.025mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0,将欲标记免疫球蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中。
②用同一缓冲液将FITC配成0.1mg/ml的溶液,按10mg/ml球蛋白溶液体积的10倍,将FITC稀释液盛于圆柱形容器内,并使透析袋浸没于FITC液中。
③容器顶端盖紧,底部放搅拌棒,在4~C电磁搅拌下透析标记24h。取出透析袋中标记液,即刻用SephadexG50凝胶过滤,去除游离荧光素,分装,贮存于4℃中。
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
1、直接法:这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体,染色时将该抗体直接滴在载玻片上进行孵育,使之直接与载玻片上的抗原结合,在荧光显微镜下直接观察,作出判断。该方法评价:简单易行、特异性高、快速方便,常用于肾活检组织几种免疫球蛋白的检测和病原体的检测。但其不足是只能检测相应的一种物质,敏感性较差,效果有时不理想,目前较少作为更多方面的检测。
2、间接法:该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后,继用间接荧光抗体,与前面的抗原抗体复合物结合,形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下,根据复合物的发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价:由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多,发出的荧光亮度强,因而其敏感性强。目前本法应用较广泛,只需制备一种种属荧光抗体,即可适用于多种第一抗体的标记显示。
3、如果你有针对待查抗原一抗(荧光素标记),而且你的待检抗原表达也比较丰富的话,做直接法也未尝不可。不过如果你不具备上述两个条件的话,还是推荐你做间接法。
4、如果你做的是细胞骨架,那么就是用直接免疫荧光。如果是一般的蛋白表达,这个要看有没有试剂是直接标记的;如果没有,还是只能考虑间接荧光。直接荧光相对间接荧光可以避免非特异姓染色,当然步骤也少了些。我做过细胞骨架的直接染色,效果很好。
二抗可以耦联有几种不同的标记,可以是酶,荧光素,或生物素。
做荧光抗体试验时,定量测定荧光素的含量用到的是哪个波长?
荧光素是具有光致荧光特性的染料,荧光染料种类很多。目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种:异硫氰酸荧光素,四乙基罗丹明,四甲基异硫氰酸罗丹明,酶作用后产生荧光的物质。
2.放射免疫检测放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术,利用放射性同素标记抗原(或抗体),与相应抗体(或抗原)结合后,通过测定抗原抗体结合物的放射性检测结果.放射性同位素具有pg级的灵敏度,且利用反复曝光的方法可对痕量物质进行定量检测.但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用.
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法.该方法是将二抗标记上酶,抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来,根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果,其敏感度可达ng水平.常见用于标记的酶有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等.由于酶联免疫法无需特殊的仪器,检测简单,因此被广泛应用于疾病检测.常用的方法有间接法、夹心法以及BAS-ELISA.间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内,然后依次加入一抗、标记了酶的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原.这种方法操作简单但由于高背景而特异性较差.目前已逐渐被夹心法取代.夹心法利用二种一抗对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性.近年来,抗原的定量检测技术也不断推陈出新.近年来,在夹心法ELISA的基础上,开发了多抗原检测试剂盒,能同时检测微量液相样本中多个抗原含量.这项技术的应用大大缩短了诊断的时间,提高诊断的可靠性和及时性.
4.免疫金胶体技术胶体金技术经过30多年的发展到现在已日趋成熟,该方法是将二抗标记上胶体金颗粒,利用抗原抗体间的特异性反应,最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上,此方法简单,快速,广泛应用于临床筛查.

