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ImmuneTech/Anti-gp120(92RW020)(Clade A)/IT-001-001M1/500ug
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| ProductName: | Anti-gp120(92RW020)(CladeA) |
| CatNo.: | IT-001-001M1 |
| Source: | Mousemonoclonalantibody,clone12G12 |
| Formulation: | Eachvialcontains100µgpurifiedIgGin100µlPBSwith40%glycerol |
| ProductType: | MouseIgG2a |
| Immunogen: | DNAvaccineexpressinggp140(92RW020)(CladeA)protein(a.a.24-680)(GeNEBankaccessionAAT67478.1). |
| Applications: | ELISA,WB,IP,IFetc. |
| Specificity: | ReactswithHIV-1gp120(92RW020)(CladeA)orrelatedstrainsonlyastestedsofar.Minimalcross-reactivitytoothersubtypes. |
| Note: | LinearEpitope |
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2021-08-09
由于在酶标记抗体过程中,酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性,从而降低了抗体的效价。另外,血清中的非特异性抗体也可以被酶标记,这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合,放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点,Sternberger(1969)在酶标抗体法的基础上,创建了非标记抗体免疫酶技术。该方法先用酶(HRP 或 AKP)去免疫动物(羊、兔和鼠等),使其产生高效价、特异性的抗酶抗体,再将该抗酶抗体与酶结合,形成五环的复合物,例如 PAP(HRP)、APAAP(AKP)、OAGO(GO)复 查看更多
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2021-08-22
本实验提供了从将候选杂交瘤克隆接种到 96 孔培养板开始一直到分离出具有所需活性的杂交瘤克隆的步骤。 查看更多
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2021-08-06
介 绍 IgG的纯化方法作者:J.E.科利跟等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」 查看更多
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高浓度的单克隆抗体的制备可以通过在小鼠的腹腔内接种能产生MAb的杂交瘤细胞,从而产生腹水来获得。 查看更多
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2021-07-29
本方案介绍一种通过抗血清与细菌裂解液共同温育而从多克隆抗血清中去除与细菌编码蛋白质发生反应抗体的方法。本节介绍的吸收方法仅仅适用于制备含有低滴度抗大肠杆菌抗体的抗血清。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。 查看更多
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由于在酶标记抗体过程中,酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性,从而降低了抗体的效价。另外,血清中的非特异性抗体也可以被酶标记,这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合,放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点,Sternberger(1969)在酶标抗体法的基础上,创建了非标记抗体免疫酶技术。该方法先用酶(HRP 或 AKP)去免疫动物(羊、兔和鼠等),使其产生高效价、特异性的抗酶抗体,再将该抗酶抗体与酶结合,形成五环的复合物,例如 PAP(HRP)、APAAP(AKP)、OAGO(GO)复 查看更多
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2021-07-27
所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用,通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用,是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上,免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用,不同的部分在于, 层析后需要回收组分 (一般为抗原),即活性蛋白质。 查看更多
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2021-08-17
杂交癯细胞按1:10传代井培养,使细胞过度生长至死亡,然后收获上清并检测滴度,如果滴度很髙,则该杂交瘤可用于大规模实验以进一步纯化或用以制备腹水。 查看更多
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2021-07-30
本节介绍一种利用结合细菌蛋白质的基质去除粗制免疫球蛋白中与细菌编码蛋白质发生反应成分的方法(de Wet et al.1984)。该方法也适用于利用培养的细胞或组织抽提物去除交叉反应抗体。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。 查看更多
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2021-08-31
Cygnus Technologies公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2021-08-21
提高免疫原性肽的抗血清,是最简单的方法,获得非隔离的蛋白质的抗体,例如,对来自DNA序列信息的推定蛋白质序列。 这种方法也是有用的,当隔离的抗原是困难或费时,或当抗原是一个大的蛋白家族的成员。 查看更多
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医学基础知识:抗体的生物学功能123
12617604452021-08-19
在人和动物体内,由于抗原或半抗原入侵刺激机体而在细胞中产生的免疫球蛋白.能可逆、非共价、特异地与相应抗原结合,形成抗原-抗体复合体.
作用:(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤.然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用. (2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体. (3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,产生不同的疚,参与免疫应答. (4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫.免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素. (5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能.不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性. (6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏.各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用.抗体可被中性盐类沉淀.在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化. (7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应 ①调理作用 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization). ②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用
作用:(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤.然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用. (2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体. (3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,产生不同的疚,参与免疫应答. (4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫.免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素. (5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能.不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性. (6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏.各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用.抗体可被中性盐类沉淀.在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化. (7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应 ①调理作用 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization). ②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用
三九蛋白肽在人体起免疫调度和抗体作用?123
我不只会遇见你2021-08-16
当肽进入人体后,首要与人的细胞膜融合,将自己的遗传物质打入细胞核,使细胞发生免疫抗体。这么,当病毒细胞进入人体后,它也要与人体的细胞膜融合,也要将自己的遗传物质打入细胞核,然后使细胞发炎、感染,继而影响很多细胞,发炎、感染发生疾病,危及生命...
为什么一种二抗可以和多种一抗结合?_123
红线i棲n2017-11-12
一个抗原决定簇只能激活一种淋巴细胞(对于B细胞)只刺激产生一种类型抗体.一个抗原可以有一个或多个抗原决定簇.抗原功能性决定簇的总数称抗原结合价.抗原决定簇少,抗体与抗原结合就少,往往就见不到反应.天然抗原或复杂的半抗原决定簇往往多达几十个,因此可以与很多抗体分子交互结合.
抗体(免疫细胞分泌免疫物质) 123
2021-08-23
抗体的功能有哪些
抗体分为哪几种?他们的功能分别是什么? 123
雨季AnymoreK2021-08-20
按作用对象
按作用对象,可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体(能与细胞结合的免疫球蛋白,如1型变态反应中的lgE反应素抗体,能吸附在靶细胞膜上)。
按理化性质和生物学功能
按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。
IgM抗体是免疫应答中首先分泌的抗体。它们在与抗原结合后启动补体的级联反应。它们还把入侵者相互连接起来,聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬;
IgG抗体激活补体,中和多种毒素。IgG持续的时间长,是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。他们还从乳腺分泌进入初乳,使新生儿得到保护;
IgA抗体进入身体的黏膜表面,包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜,中和感染因子。还可以通过母乳的初乳把这种抗体输送到新生儿的消化道黏膜中,是在母乳中含量最多,最为重要的一类抗体;
IgE抗体的尾部与嗜碱细胞、肥大细胞的细胞膜结合。当抗体与抗原结合后,嗜碱细胞与肥大细胞释放组织胺一类物质促进炎症的发展。这也是引发速发型过敏反应的抗体;
IgD抗体的作用还不太清楚。它们主要出现在成熟的B淋巴细胞表面上,可能与B细胞的分化有关。(IgD于1995年从人骨髓瘤蛋白中发现,分子量为175kD,主要由扁桃体、脾等处浆细胞产生,人血清中IgD浓度为3~40μg/ml,不到血清总Ig的1%,在个体发育中合成较晚。IgD铰链区很长,且对蛋白酶水解敏感,因此IgD半衰期很短,仅2.8天。血清中IgD确切的免疫功能尚不清楚。在B细胞分化到成熟B细胞阶段,除了表达SmIgD,抗原刺激后表现为免疫耐受。成熟B细胞活化后或者活化后或者变成记忆B细胞时,SmIgD逐渐消失。)
按可见反应
按与抗原结合后是否出现可见反应,可将其分为:在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体,即通常所说的抗体,以及不出现可见反应,但能阻抑抗原与其相应的完全抗体结合的不完全抗体。
按抗体来源
按抗体的来源,可将其分为天然抗体和免疫抗体。
抗体就是免疫球蛋白,是改变了的球蛋白分子。由特异性抗原刺激产生,抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用,使淋巴细胞中的B细胞分化增殖而形成浆细胞,浆细胞可产生分泌抗体。
按抗体发展
单克隆抗体的发展经历了四个阶段,分别为:鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体。
鼠源性单克隆抗体:鼠杂交瘤单克隆抗体主要是将来源于免疫接种过的小鼠的B 细胞与骨髓瘤细胞融合,继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的鼠杂交融合细胞,进而进行筛选、抗体制备和抗体纯化。
嵌合性单克隆抗体:指用人的恒定区取代小鼠的恒定区,保留鼠单抗的可变区序列,形成一个人-鼠杂合的抗体。其研制程序快,可大幅度降低异源抗体的免疫原性,却几乎保持亲本鼠单抗全部的特异性和亲和力。另外,它还具有人抗体的效应功能,如补体固定、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)等。
人源化单克隆抗体:利用现有的无数已详细分析过的小鼠抗体,取其与抗原直接接触的那段抗体片段(互补决定区,CDR)与人的抗体框架嫁接,经亲和力重塑,可维持其特异性和大部分的亲和力,同时几乎去除免疫原性和毒副作用。
全人源单克隆抗体:其抗体的可变区和恒定区都是人源的,去除免疫原性和毒副作用。全人源抗体制备的相关技术主要有:人杂交瘤技术、EBV 转化 B 淋巴细胞技术、噬菌体显示技术(phage display)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenic mouse)和单个B细胞抗体制备技术等。
由人源化和全人源抗体制备的人源化和全人源抗体药物因其具有高亲和力、高特异性、毒副作用小的特点,克服了动物源抗体及嵌合抗体的各种缺点,已经成为了治疗性抗体药物发展的必然趋势。展开
按作用对象,可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体(能与细胞结合的免疫球蛋白,如1型变态反应中的lgE反应素抗体,能吸附在靶细胞膜上)。
按理化性质和生物学功能
按理化性质和生物学功能,可将其分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。
IgM抗体是免疫应答中首先分泌的抗体。它们在与抗原结合后启动补体的级联反应。它们还把入侵者相互连接起来,聚成一堆便于巨噬细胞的吞噬;
IgG抗体激活补体,中和多种毒素。IgG持续的时间长,是唯一能在母亲妊娠期穿过胎盘保护胎儿的抗体。他们还从乳腺分泌进入初乳,使新生儿得到保护;
IgA抗体进入身体的黏膜表面,包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜,中和感染因子。还可以通过母乳的初乳把这种抗体输送到新生儿的消化道黏膜中,是在母乳中含量最多,最为重要的一类抗体;
IgE抗体的尾部与嗜碱细胞、肥大细胞的细胞膜结合。当抗体与抗原结合后,嗜碱细胞与肥大细胞释放组织胺一类物质促进炎症的发展。这也是引发速发型过敏反应的抗体;
IgD抗体的作用还不太清楚。它们主要出现在成熟的B淋巴细胞表面上,可能与B细胞的分化有关。(IgD于1995年从人骨髓瘤蛋白中发现,分子量为175kD,主要由扁桃体、脾等处浆细胞产生,人血清中IgD浓度为3~40μg/ml,不到血清总Ig的1%,在个体发育中合成较晚。IgD铰链区很长,且对蛋白酶水解敏感,因此IgD半衰期很短,仅2.8天。血清中IgD确切的免疫功能尚不清楚。在B细胞分化到成熟B细胞阶段,除了表达SmIgD,抗原刺激后表现为免疫耐受。成熟B细胞活化后或者活化后或者变成记忆B细胞时,SmIgD逐渐消失。)
按可见反应
按与抗原结合后是否出现可见反应,可将其分为:在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体,即通常所说的抗体,以及不出现可见反应,但能阻抑抗原与其相应的完全抗体结合的不完全抗体。
按抗体来源
按抗体的来源,可将其分为天然抗体和免疫抗体。
抗体就是免疫球蛋白,是改变了的球蛋白分子。由特异性抗原刺激产生,抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用,使淋巴细胞中的B细胞分化增殖而形成浆细胞,浆细胞可产生分泌抗体。
按抗体发展
单克隆抗体的发展经历了四个阶段,分别为:鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体。
鼠源性单克隆抗体:鼠杂交瘤单克隆抗体主要是将来源于免疫接种过的小鼠的B 细胞与骨髓瘤细胞融合,继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的鼠杂交融合细胞,进而进行筛选、抗体制备和抗体纯化。
嵌合性单克隆抗体:指用人的恒定区取代小鼠的恒定区,保留鼠单抗的可变区序列,形成一个人-鼠杂合的抗体。其研制程序快,可大幅度降低异源抗体的免疫原性,却几乎保持亲本鼠单抗全部的特异性和亲和力。另外,它还具有人抗体的效应功能,如补体固定、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)等。
人源化单克隆抗体:利用现有的无数已详细分析过的小鼠抗体,取其与抗原直接接触的那段抗体片段(互补决定区,CDR)与人的抗体框架嫁接,经亲和力重塑,可维持其特异性和大部分的亲和力,同时几乎去除免疫原性和毒副作用。
全人源单克隆抗体:其抗体的可变区和恒定区都是人源的,去除免疫原性和毒副作用。全人源抗体制备的相关技术主要有:人杂交瘤技术、EBV 转化 B 淋巴细胞技术、噬菌体显示技术(phage display)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenic mouse)和单个B细胞抗体制备技术等。
由人源化和全人源抗体制备的人源化和全人源抗体药物因其具有高亲和力、高特异性、毒副作用小的特点,克服了动物源抗体及嵌合抗体的各种缺点,已经成为了治疗性抗体药物发展的必然趋势。展开
...会出现抗结核杆菌的抗体.抗体的产生体现了细胞膜的哪一种功能...123
晴空PS12021-08-22
免疫功能
甲状腺功能检查两项抗体高怎么回事123
黑色7059272017-11-12
甲状腺功能检查两项抗体高,有可能是甲状腺炎
慢性淋巴细胞性甲状腺炎亦称桥本甲状腺炎,是一种自体免疫性疾病。
本病多见于中年女性,表现为甲状腺肿,起病缓慢,常在无意中发现,体积约为正常甲状腺的2~3倍,表面光滑,质地坚韧有弹性如橡皮,明显结节则少见,无压痛,与四周无粘连,可随吞咽运动活动。
若出现甲状腺机能亢进症的表现时,宜吃得清淡,吃含维生素高的新鲜蔬菜、水果及营养丰富的瘦肉、鸡肉、鸭肉、甲鱼、淡水鱼、香菇、银耳、百合、桑椹等食物。忌食碘、辣椒、羊肉、浓茶、咖啡等湿热或具有刺激性的食物。
若出现甲状腺机能减退症的表现时,除忌碘外,宜吃含维生素高的新鲜的蔬菜、水果,还宜胡桃肉、枸杞子、山药、芡实等食物。
慢性淋巴细胞性甲状腺炎亦称桥本甲状腺炎,是一种自体免疫性疾病。
本病多见于中年女性,表现为甲状腺肿,起病缓慢,常在无意中发现,体积约为正常甲状腺的2~3倍,表面光滑,质地坚韧有弹性如橡皮,明显结节则少见,无压痛,与四周无粘连,可随吞咽运动活动。
若出现甲状腺机能亢进症的表现时,宜吃得清淡,吃含维生素高的新鲜蔬菜、水果及营养丰富的瘦肉、鸡肉、鸭肉、甲鱼、淡水鱼、香菇、银耳、百合、桑椹等食物。忌食碘、辣椒、羊肉、浓茶、咖啡等湿热或具有刺激性的食物。
若出现甲状腺机能减退症的表现时,除忌碘外,宜吃含维生素高的新鲜的蔬菜、水果,还宜胡桃肉、枸杞子、山药、芡实等食物。
乳酸菌活菌制剂对动物免疫调节作用与研究进展123
fanqs2021-07-20
摘要:免疫初乳粉未(IP),控制性初乳粉末(CP),脱脂乳(SP)对乳酸杆菌LGG在MRS培养基中发酵的影响,已经得到研究,同时也研究了IP对乳酸杆菌LGG在灭菌牛奶中发酵的影响。
在MRS中,SP能够在整个发酵过程中提高乳酸杆菌LGG的生长速度,尤其在5%与10%的CP初始浓度中,初期具有很好的只有在1%和2。5%浓度才有的反应速度。所有的CP(1%,2.5%, 5%, 10%)都能在发酵未期达到一个可生长的高的细胞浓度,这些表明在CP中含有LGG的生长因子及非特异性抗体的抑制作用被克服了.1%,2.5% 5%和10%的IP能够在整个发酵过程中抑制LGG的生长,临界的浓度点在2.5%与5%之间,并存在生长因子及特异抗体的抑制作用之间的竞争.
在灭菌牛奶中Hepes的影响能帮助发酵的快速进行,并比对照组更早地达到对数期,然而当混合有5%的IP时LGG的生长则在整个发酵过程中都要受到强烈的抑制.
在发酵及贮存过程中,LGG的发酵对抗龋齿抗体的效价变化没有明显的影响.在将来,它能应用于推动功能性发酵免疫乳产品的发展。
关键词 抗体乳酸杆菌LGG 发酵
1.介绍
在人类营养物中,probiotics是一个活的微生物食物组分,它有利于人体健康(salminener al 1998b)它能通过影响免疫系统抑制有害菌的生长,改善营养吸收等方式来改善人体健康.
大量的出版物已论述probiotics在胃肠道疾病的防止与治疗中起到非常重要的作用(salminenetal1998b,Gorbach sl1990)。乳酸杆菌属及bofodobacteria是通常用作probiotics的细菌属,从人体肠道中分离出来的LGG被证明是人体的一个重要的probiotics,(maija saxelin1995),S.Elo和他的同事提出,LGG能够粘到人体肠道细胞(linecaco-zinvitro). 在PH3.0的胃液中也能很好地生存,通过降低葡萄糖苷酸酶的活性来很好地调节菌落的微生态.Alander M也提出LGG也能粘到菌落上,Ryseker-vanEmbdemIG(1998)证明LGG不会破坏肠道粘液中的糖蛋白,因此能够很安全地用于治疗,MajamaaH (1995)则认为某些乳酸菌株,特别是乳酸杆菌LGG,能够促进血清和肠道对轮状病毒的免疫反应,因此它也许在对待轮状病毒的再次感染的免疫建立非常重要.M malin(1997)证明LGG具有加强对青少年慢性关节炎的粘膜屏障机制的潜能,
在奶牛初乳中的免疫球蛋白的浓度是牛奶的50~100倍,可以从用特异性微生物抗原进行全身性高度免疫的奶牛中获得特异性初始抗体。(Hannu korhonen et all,1998)。越来越多的临床研究证明免疫乳的制备对人体胃肠病的预防及治疗的功效,Roos et al(1995)证明从牛初乳中得到的免疫球蛋白在人体胃肠中至少能部分地保持其活性.
虽然,在牛初乳抗体和Probiotics功能研究方面都各自取得很大的成功,但在抗体及乳酸菌(尤其是LGG)的共同存在方面的研究还是很少,有许多问题需要回答,例如,在(vitro及vivo)胃肠道病的预防与治疗方面,抗体及pribiotics的协同功能.例如,粘附到粘膜等上皮的过程和机制中的主要作用因子。这个研究的主要目的是调查抗体是怎样影响LGG的发酵的.以及在发酵及贮存中LLGG是怎样影响抗体的生物成分的.
2.材料与方法
2.1菌种: LGG菌种是由芬兰农业中心食物研究院提供,曾保存在-70℃的菌种,放在10%的消毒牛奶中激活12小时,然后移植到MRS固体培养基中,在通风条件下,37℃恒温10小时.培养液在3000g下离心10分钟,分离出细胞,弃去上清液,沉淀物用消毒约0.7%的生理盐水冲冼两次,活细胞的沉淀物留在生理盐水中以作为发酵初始物。
2.2培养基. MRS液体培养基是按照下列配方制成的.然后在115℃杀菌15分钟。
灭菌牛奶:鲜牛奶在15000rpm下离心15分仲,除去脂肪及酪蛋白,然后在85--杀菌1小时.
SP是由valio公司提供
抗龋齿的IP及CP是按照v。loimaranta及同事(1997)讲述的方法得到的,20%IP和20%CP溶入支离子水中,然后通过微量过滤进行灭菌.SP CP IP分别认1% 2.5% 5% 10%(W/V)的浓度加入到MRS中.
在牛奶消毒之前,加10nM的Hepes到消毒牛奶中,另外根据实验计划加入5%IP.
2.3 活细胞计数 活细胞是通过0.7%生理盐水稀释10倍而估计的.在MRS琼脂中加入样品10-5 10-6 10-7的稀释液100ul,每一个稀释度都做两个平行样.在37℃恒温48小时后,就可通过数菌落数来决定每一组活的细胞数.
2.4PH决定:pH计
2.5 乳酸决定:1ml样品用灭菌稀释到5ml,保持沸腾状态,加入Ltul的phendphtalin(0.5% in 95% ethanol)m然后在搅拌的情况下用0.1NnaoH进行滴定当试样变红并稳定30S最后乳酸变可用1ml0.1NnaoH相当于0.009乳酸的当量进行计算.
2.6酶联免疫吸附测定. 聚苯已烯微效价平板的小孔(labsystems Finlsnd)用100ul(10 CFU/ml)的被热杀死的S,matans磷酸缓冲液悬浮液覆盖.在4℃恒温过夜.小孔在Mutiwash系统中用含有0.05%吐温20的PBS冲洗三次,再用离子水冲洗三次.
IP样品在六种不同稀释度下(1:10001:3000 1:9000 1:27000 1:81000 1:24300)进行多次测试.每小孔中加入各种稀释度的100ul倍数体积,至抗原覆盖平板.在37℃恒温,然后按前面的方法冲洗小孔。加入150ul的碱性磷酸酶结合牛抗体LGG,在37℃作用90分钟,冲洗后,平板用150ul的溶解在二乙醇胺,Mgcl2缓冲液中的对硝基酚磷酸盐作用于30分钟.然后在405nm中进行快速吸收测定.
2.7乳酸菌LGG在MRS及鲜牛奶中的发酵
对数期的激活恬细胞收集起来,用0.85%的灭菌生理盐水冲洗三次,悬浮在生理盐水和vortex中使它处于非正常状态。使用100ul的倍数体积,可以使活细胞处于悬浮状态。加入200ul(A) 1ml(B) 2ml(C)的悬浮液于100mlMRS 培养基中培养。PH值,乳酸,活细胞由发酵时间决定.
在灭菌牛奶中两种不同的培养方法使用,在发酵期,监控PH值,乳酸,活细胞数目。.
2.8 在MRS中SP、IP、CP对乳酸菌生长的影响.
将1%,2.5% ,5% 和10%的IP ,CP加入用MRS中作为测试组,而1% 2.5% 5% 和10%的SP加入到MRS液体培养基中作用控制组.在100ul的各组培养基中接入0.1ml的LGG生理盐水悬浮液,在37℃下培养至达到对数生长期.在发酵过程中,从各组中取出4mll的aliquit认检验PH,乳酸及活细胞,这样进行多次取样.
2.9在牛奶中Hepes系统对LGG生长的影响
在高压灭菌之前向无菌牛奶中加入50mMHepes来形成Hepes群,这个消毒牛奶被标记为控制组接入活细胞悬浮液,在37℃下培养48小时,PH 乳酸,titres,活细胞随后进行,48小时后,这些群得存在4℃下,上面这些因素,每几天都要检测1次.
2.10 在Hepes牛奶缓冲液中IP对LGG生长的影响在上面提到的各组中加入5%IP,所有过程与上面的一样。
2.11LGG的贮存试验 :同上面提到的。
3. 结果
3.1在MRS及鲜奶中LGG的发酵:
在MRS中接入三种不同量的活细胞,向灭菌鲜牛奶中导入两种不同的接种量.活细胞,乳酸,PH值的指数要不时地检测,以决定发酵对数期,很明显,在MRS培养基及FM中,LGG的生长有明显的不同。在MRS中LGG的对数生长期大约9小时,不管开始活细胞的接种量.在整个发酵过程中,PH值的变化,乳酸代谢,活细胞都没有显著的不同.(图1)然而,不同的接种量会显著地影响PH值的变化,乳酸代谢及活细胞数。对数期的平台大约36~48小时(图2)
3.2 在MRS中SP、CP、IP对LGG生长的影响
1%,2.5% ,5%,10%的SP放入MRS培养基中,在37℃时接种,PH值及活细胞要在24小时内测定多次.结果表明,1% 2.5% 5% 10%的SP能够显著地提高LGG的生长,而对数期与控制组相比明显变化.但是在2.5%SP组中发酵了8~12小时发现异常.很有意思的是发酵了8~10小时,1%2.5% 5% SP的PH值缓慢上升,因为有些蛋白质被断裂,氨基暴露出来,中和了酸。在CP组中,1% 2.5% 5% 10%的CP同样能够提高LGG的生长,比起SP组来对数期则延缓了2小时,PH的下降缓慢,8~10小时平稳,在IP组中所有的测试浓度对LGG的生长起抑制作用。具有强抑制的关键点,在2.5%~5%之间.(Figure5)
3.3在牛奶中Hepes缓冲系统中对LGG生长的影响
向鲜牛奶中加入50umolHepes,接入LGG,这一点与控制组同时进行,在37℃下培养48小时,在6 12 24 36 与48小时的时间点上取样,检测其PH值,乳酸及活菌数.
很明显,在开始Hepes能提高LGG的生长,其对数期比控制组稍早一点.在前24小时内其乳酸量比控制组稍高,但24小时后,乳酸增加得很慢.鉴于控制组中能很快提高,与活菌计数结果相适应,因此认为在控制组的对数期比Hepes组晚.
3.4 在有Hepes缓冲系统的牛奶中IP对LGG生长的影响
5%的IP加入到含有50mMHepes的鲜牛奶中,测试结果显示在图6中,在0~6小时,IP强烈控制LGG的生长,无论是含有Hepes还是不含.在6~24小时内,两个IP组都进入对数期,看上去含有Hepes组要比无Hepes的IP组,更早地进入对数平台期,因为在某种浓度下,中性PH值能帮助抗体抑制生长.值得注意的是,无Hepes的IP组能在24小时后继续对数期,在48小时后,缓慢进入平台期,比起Hepes组及前面提到的控制组稍晚一些.
虽然在36~48小时之间,乳酸增加得很快,PH值则保持恒定甚至有点升高.这很有可能与牛奶中蛋白质的剪切作用有关,碱性基团被暴露,中和了乳酸,这一点与图3的结果非常相似.
看上去Hepes与IP对LGG生长的作用不同,Hepes能加速LGG的生长,因此对数期的出现比对照组的早,它可以通过减少乳酸的抑制而维持中性环境,以适应其生长,虽然离子浓度对发酵有一些影响。相反,IP能在发酵初期抑制LGG的生长,其对数期的出现比控制组的稍晚一些.但是,比Hepes组和控制组,它至少能达到相同量的活细胞量,且乳酸量更高.当IP与Hepes相混合时,情况就不一样了.在发酵的初期,LGG的生长同样受到强烈抑制.随着乳酸的生成,LGG的生长超过IP的抑制作用,但是当它达到一定浓度时,生长与抑制达到平衡.因此,Hepes加强了IP抗体的作用,而乳酸通过改变PH值,减少IP对LGG生长的抑制作用.
值得注意的是,IP的效价在6小时处达到最高,此时LGG同样受到强烈抑制.因此,在效价与LGG的生长之间存在一些明显的联系或机制。在6小时处,IP+LGG的效价比Hepes+IP+LGG, Hepes+IP的明显低,因此,Hepes在维持PH于中性时起着重要作用,这一点有利于免疫球蛋白达到最高活性,与IP组相比,在6小时处,IP+LGG组的效价明显更低,虽然PH并无明显不同,因此,在某种程度上,乳酸能够抑制免疫球蛋白的活性。(图7)
3.5 LGG的贮藏试验 当LGG的生长达到对数期的平台期时,在4℃保存,其活细胞量,PH,乳酸,效价要不时地检测。(看图8,9)
Hepes是影响LGG生存的主要因素,在无Hepes存在时,在4℃下,IP与控制组可以在50天内维持活细胞量基本不变.然而有Hepes组只能在前31天维持不变.然后急剧下降,
从图8,我们可以看到:无Hepes组的PH值维持不变或持续下降,然而在有Hepes组中,因为细胞的死亡及溶菌作用,PH慢慢上升.
至于效价,在Heper组与无Hepes组中并无明显不同,在50天贮存期内,LGG对免疫球蛋白效价的影响很小.
4.讨论
一般ptobiotics是以它对酸与胆汁的抵制为特征的.它粘到肠道上皮细胞上,并在肠道中复制,乳酸杆菌是人类健康上运用很广的probiotic菌.从人胃肠道上分离出来的LGG被认为是抗酸抗胆汁菌株。它能暂时在人胃肠道上生存,复制,生长出抗菌物质,影响存在的微生物的代谢活性,它同样可以在口服抗生素时,在肠道内复制。
在这个研究中,在MRS中,LGG有相同的发酵时间9小时,相同的PH值及乳酸曲线而不管MRS培养液中活细胞中的接种量。然而,LGG在灭菌牛奶中有一个很长的发酵时间,很少有以LGG作为起始物的报道.在牛奶中LGG生长的关键因素是接种量和对数期的状态.有利于身体健康的LGG和最小口服剂量是1010~1011CFU/天,可以服用冷冻干粉.发酵牛奶或a fermented whey drink .
在发酵的牛奶中,活细胞量通常是10--CFU /ml,因此100-200ml的发酵牛奶可以提供1010~1011CFU.我们试验同样显示了,虽然以单菌株作为起始物,LGG能够达到109CFU/ml.
为了观察IP及CP在MRS中对LGG生长的影响,把不同浓度的IP、CP加入到MRS培养基中,SP则被作为控制物。
所有的SP组在整个发酵过程中都能提高LGG的生长,尤其在5﹪与10﹪的浓度下。很明显,SP起缓冲作用及给细胞的快速复制提供特殊碳氢化合物及氮源。在8-10小时期间,SP的PH曲线比控制组稍高,可能是因为在一过程中蛋白质的剪切作用和某些肽键的暴露,来支持细菌生长及PH缓冲系统。
在0-4小时内,CP给细胞复制一个好的起始速度,这一点暗示CP可能含有LGG生长因子,因此克服了一般细菌生长模型的激活期。当进入对数期(6-8hr)时,CP组中的细胞生长要比控制组中的慢,说明一些非特异性抗体的抑制作用。在8-12小时,细胞通过抗体克服抑制作用,再次达到比控制组高的水平。很可能,
CP中的生长因子是通过抗体来克服抑制作用的。
至于IP组,好像IP中的抗体在发酵期起重要作用。它们在整个发酵期抑制LGG细胞的复制,尤其在发酵初期。1﹪与2.5﹪IP组和5﹪和20﹪IP组中有所不同,暗示了在2.5﹪和5﹪之间,是弱与强抑制作用的临界。IP的浓度越高,抑制越强,LGG的生长越慢:从PH变化曲线看,1﹪与2.5﹪IP组的PH值比起控制组来说下降得非常快,这一点也与CP组不同.
总的来说,SP,CP与IP由于其组分不同,对LGG生长的作用也不同.SP含有适合LGG生长的普通碳氢化合物及氮源,而CP含有能部分抑制细胞生长的非专一性抗体及LGG的生长因子.因此,在两种情况下LGG的生长有很大的提高.然而,IP的情况就完全不同,它里面存在一些对链球菌属突变体的专一性抗体,它能强列抑制LGG的生长,同样含有一些LGG的生长因子,这些原因导致了LGG的生长缓慢。抗体的抑制作用与IP中生长因子的竞争,同样受到IP中的微量胰蛋白酶及胰凝乳蛋白的影响.两种酶都能减少抗体的活性.然而,我们的结果显示抗体的效价在发酵过程中几乎没有变化。(数据并无显示).
用在无菌牛奶中的Hepes缓冲液,是用来检查LGG牛奶发酵中IP的功能。Hepes对LGG的生长有两个不同的功能.在一方面,Hepes能够减少积累的乳酸对LGG生长 的抑制作用.另一方面,它能够在某种程度上通过保持PH于中性,来帮助抗体维持在一个稳定的功能状态.我们的测试,显示HePes能够使发酵快速开始和比控制组更早地达到对数期.但是,当与IP结合时这个结果就会相反; IP 组则受到轻微的抑制.虽然对数期来得更晚,它同样能使活细胞数达到控制组那样多.这个结果与MRS中有IP的发酵结果相一致.
LGG的货架生命力与抗体的效价,是我们测试中的关键。贮存试验显示,在4℃下,所有的牛奶发酵组的活细胞都能在31天内维持在相同的水平.31天后,有Hepes组下降得更快,而无Hepes组则能继续保持在相同水平.看上去在贮存期间,IP对LGG的货架生命力只有微小的影响.PH变化有小的不同,然而无Hepes组的乳酸代谢比hepes组更活跃,这一点与活细胞贮存相一致.有Hepes组与无hepes组中的效价变化并无不同,发酵牛奶在4℃能在10天内使效价保持相同水平,在31天内保留50%,50天内仍大于30%。而且我们的实验显示:在4℃ ,发酵免疫牛奶中的抗龋齿抗体的功能在贮存50天后,仍能保持完整.
使用probiotics细菌进行免疫牛奶发酵是开发人类健康功能食品的新领域.为得到更多有关抗体对probiotics发酵的普通机制的信息,不同的菌株及不同的专一性抗体在将来都要被测试.功能实验也要在抑制期与活跃期中进一步进行.因为有一些probiotics菌的普通抗原能与抗体相作用,以及发酵过程中的凝集作用,我们应该选择一些probiotics菌,来避免此类凝集反应,或用probitics菌的非专一性抗体来组成免疫牛奶.虽然免疫牛奶的发酵是开发功能食品的可行性方法,怎样保持抗体活性及在发酵前怎样在同一时间对免疫牛奶进行了灭菌,仍然是个问题.将来一些特殊的技术过程仍要得到改进.
在MRS中,SP能够在整个发酵过程中提高乳酸杆菌LGG的生长速度,尤其在5%与10%的CP初始浓度中,初期具有很好的只有在1%和2。5%浓度才有的反应速度。所有的CP(1%,2.5%, 5%, 10%)都能在发酵未期达到一个可生长的高的细胞浓度,这些表明在CP中含有LGG的生长因子及非特异性抗体的抑制作用被克服了.1%,2.5% 5%和10%的IP能够在整个发酵过程中抑制LGG的生长,临界的浓度点在2.5%与5%之间,并存在生长因子及特异抗体的抑制作用之间的竞争.
在灭菌牛奶中Hepes的影响能帮助发酵的快速进行,并比对照组更早地达到对数期,然而当混合有5%的IP时LGG的生长则在整个发酵过程中都要受到强烈的抑制.
在发酵及贮存过程中,LGG的发酵对抗龋齿抗体的效价变化没有明显的影响.在将来,它能应用于推动功能性发酵免疫乳产品的发展。
关键词 抗体乳酸杆菌LGG 发酵
1.介绍
在人类营养物中,probiotics是一个活的微生物食物组分,它有利于人体健康(salminener al 1998b)它能通过影响免疫系统抑制有害菌的生长,改善营养吸收等方式来改善人体健康.
大量的出版物已论述probiotics在胃肠道疾病的防止与治疗中起到非常重要的作用(salminenetal1998b,Gorbach sl1990)。乳酸杆菌属及bofodobacteria是通常用作probiotics的细菌属,从人体肠道中分离出来的LGG被证明是人体的一个重要的probiotics,(maija saxelin1995),S.Elo和他的同事提出,LGG能够粘到人体肠道细胞(linecaco-zinvitro). 在PH3.0的胃液中也能很好地生存,通过降低葡萄糖苷酸酶的活性来很好地调节菌落的微生态.Alander M也提出LGG也能粘到菌落上,Ryseker-vanEmbdemIG(1998)证明LGG不会破坏肠道粘液中的糖蛋白,因此能够很安全地用于治疗,MajamaaH (1995)则认为某些乳酸菌株,特别是乳酸杆菌LGG,能够促进血清和肠道对轮状病毒的免疫反应,因此它也许在对待轮状病毒的再次感染的免疫建立非常重要.M malin(1997)证明LGG具有加强对青少年慢性关节炎的粘膜屏障机制的潜能,
在奶牛初乳中的免疫球蛋白的浓度是牛奶的50~100倍,可以从用特异性微生物抗原进行全身性高度免疫的奶牛中获得特异性初始抗体。(Hannu korhonen et all,1998)。越来越多的临床研究证明免疫乳的制备对人体胃肠病的预防及治疗的功效,Roos et al(1995)证明从牛初乳中得到的免疫球蛋白在人体胃肠中至少能部分地保持其活性.
虽然,在牛初乳抗体和Probiotics功能研究方面都各自取得很大的成功,但在抗体及乳酸菌(尤其是LGG)的共同存在方面的研究还是很少,有许多问题需要回答,例如,在(vitro及vivo)胃肠道病的预防与治疗方面,抗体及pribiotics的协同功能.例如,粘附到粘膜等上皮的过程和机制中的主要作用因子。这个研究的主要目的是调查抗体是怎样影响LGG的发酵的.以及在发酵及贮存中LLGG是怎样影响抗体的生物成分的.
2.材料与方法
2.1菌种: LGG菌种是由芬兰农业中心食物研究院提供,曾保存在-70℃的菌种,放在10%的消毒牛奶中激活12小时,然后移植到MRS固体培养基中,在通风条件下,37℃恒温10小时.培养液在3000g下离心10分钟,分离出细胞,弃去上清液,沉淀物用消毒约0.7%的生理盐水冲冼两次,活细胞的沉淀物留在生理盐水中以作为发酵初始物。
2.2培养基. MRS液体培养基是按照下列配方制成的.然后在115℃杀菌15分钟。
灭菌牛奶:鲜牛奶在15000rpm下离心15分仲,除去脂肪及酪蛋白,然后在85--杀菌1小时.
SP是由valio公司提供
抗龋齿的IP及CP是按照v。loimaranta及同事(1997)讲述的方法得到的,20%IP和20%CP溶入支离子水中,然后通过微量过滤进行灭菌.SP CP IP分别认1% 2.5% 5% 10%(W/V)的浓度加入到MRS中.
在牛奶消毒之前,加10nM的Hepes到消毒牛奶中,另外根据实验计划加入5%IP.
2.3 活细胞计数 活细胞是通过0.7%生理盐水稀释10倍而估计的.在MRS琼脂中加入样品10-5 10-6 10-7的稀释液100ul,每一个稀释度都做两个平行样.在37℃恒温48小时后,就可通过数菌落数来决定每一组活的细胞数.
2.4PH决定:pH计
2.5 乳酸决定:1ml样品用灭菌稀释到5ml,保持沸腾状态,加入Ltul的phendphtalin(0.5% in 95% ethanol)m然后在搅拌的情况下用0.1NnaoH进行滴定当试样变红并稳定30S最后乳酸变可用1ml0.1NnaoH相当于0.009乳酸的当量进行计算.
2.6酶联免疫吸附测定. 聚苯已烯微效价平板的小孔(labsystems Finlsnd)用100ul(10 CFU/ml)的被热杀死的S,matans磷酸缓冲液悬浮液覆盖.在4℃恒温过夜.小孔在Mutiwash系统中用含有0.05%吐温20的PBS冲洗三次,再用离子水冲洗三次.
IP样品在六种不同稀释度下(1:10001:3000 1:9000 1:27000 1:81000 1:24300)进行多次测试.每小孔中加入各种稀释度的100ul倍数体积,至抗原覆盖平板.在37℃恒温,然后按前面的方法冲洗小孔。加入150ul的碱性磷酸酶结合牛抗体LGG,在37℃作用90分钟,冲洗后,平板用150ul的溶解在二乙醇胺,Mgcl2缓冲液中的对硝基酚磷酸盐作用于30分钟.然后在405nm中进行快速吸收测定.
2.7乳酸菌LGG在MRS及鲜牛奶中的发酵
对数期的激活恬细胞收集起来,用0.85%的灭菌生理盐水冲洗三次,悬浮在生理盐水和vortex中使它处于非正常状态。使用100ul的倍数体积,可以使活细胞处于悬浮状态。加入200ul(A) 1ml(B) 2ml(C)的悬浮液于100mlMRS 培养基中培养。PH值,乳酸,活细胞由发酵时间决定.
在灭菌牛奶中两种不同的培养方法使用,在发酵期,监控PH值,乳酸,活细胞数目。.
2.8 在MRS中SP、IP、CP对乳酸菌生长的影响.
将1%,2.5% ,5% 和10%的IP ,CP加入用MRS中作为测试组,而1% 2.5% 5% 和10%的SP加入到MRS液体培养基中作用控制组.在100ul的各组培养基中接入0.1ml的LGG生理盐水悬浮液,在37℃下培养至达到对数生长期.在发酵过程中,从各组中取出4mll的aliquit认检验PH,乳酸及活细胞,这样进行多次取样.
2.9在牛奶中Hepes系统对LGG生长的影响
在高压灭菌之前向无菌牛奶中加入50mMHepes来形成Hepes群,这个消毒牛奶被标记为控制组接入活细胞悬浮液,在37℃下培养48小时,PH 乳酸,titres,活细胞随后进行,48小时后,这些群得存在4℃下,上面这些因素,每几天都要检测1次.
2.10 在Hepes牛奶缓冲液中IP对LGG生长的影响在上面提到的各组中加入5%IP,所有过程与上面的一样。
2.11LGG的贮存试验 :同上面提到的。
3. 结果
3.1在MRS及鲜奶中LGG的发酵:
在MRS中接入三种不同量的活细胞,向灭菌鲜牛奶中导入两种不同的接种量.活细胞,乳酸,PH值的指数要不时地检测,以决定发酵对数期,很明显,在MRS培养基及FM中,LGG的生长有明显的不同。在MRS中LGG的对数生长期大约9小时,不管开始活细胞的接种量.在整个发酵过程中,PH值的变化,乳酸代谢,活细胞都没有显著的不同.(图1)然而,不同的接种量会显著地影响PH值的变化,乳酸代谢及活细胞数。对数期的平台大约36~48小时(图2)
3.2 在MRS中SP、CP、IP对LGG生长的影响
1%,2.5% ,5%,10%的SP放入MRS培养基中,在37℃时接种,PH值及活细胞要在24小时内测定多次.结果表明,1% 2.5% 5% 10%的SP能够显著地提高LGG的生长,而对数期与控制组相比明显变化.但是在2.5%SP组中发酵了8~12小时发现异常.很有意思的是发酵了8~10小时,1%2.5% 5% SP的PH值缓慢上升,因为有些蛋白质被断裂,氨基暴露出来,中和了酸。在CP组中,1% 2.5% 5% 10%的CP同样能够提高LGG的生长,比起SP组来对数期则延缓了2小时,PH的下降缓慢,8~10小时平稳,在IP组中所有的测试浓度对LGG的生长起抑制作用。具有强抑制的关键点,在2.5%~5%之间.(Figure5)
3.3在牛奶中Hepes缓冲系统中对LGG生长的影响
向鲜牛奶中加入50umolHepes,接入LGG,这一点与控制组同时进行,在37℃下培养48小时,在6 12 24 36 与48小时的时间点上取样,检测其PH值,乳酸及活菌数.
很明显,在开始Hepes能提高LGG的生长,其对数期比控制组稍早一点.在前24小时内其乳酸量比控制组稍高,但24小时后,乳酸增加得很慢.鉴于控制组中能很快提高,与活菌计数结果相适应,因此认为在控制组的对数期比Hepes组晚.
3.4 在有Hepes缓冲系统的牛奶中IP对LGG生长的影响
5%的IP加入到含有50mMHepes的鲜牛奶中,测试结果显示在图6中,在0~6小时,IP强烈控制LGG的生长,无论是含有Hepes还是不含.在6~24小时内,两个IP组都进入对数期,看上去含有Hepes组要比无Hepes的IP组,更早地进入对数平台期,因为在某种浓度下,中性PH值能帮助抗体抑制生长.值得注意的是,无Hepes的IP组能在24小时后继续对数期,在48小时后,缓慢进入平台期,比起Hepes组及前面提到的控制组稍晚一些.
虽然在36~48小时之间,乳酸增加得很快,PH值则保持恒定甚至有点升高.这很有可能与牛奶中蛋白质的剪切作用有关,碱性基团被暴露,中和了乳酸,这一点与图3的结果非常相似.
看上去Hepes与IP对LGG生长的作用不同,Hepes能加速LGG的生长,因此对数期的出现比对照组的早,它可以通过减少乳酸的抑制而维持中性环境,以适应其生长,虽然离子浓度对发酵有一些影响。相反,IP能在发酵初期抑制LGG的生长,其对数期的出现比控制组的稍晚一些.但是,比Hepes组和控制组,它至少能达到相同量的活细胞量,且乳酸量更高.当IP与Hepes相混合时,情况就不一样了.在发酵的初期,LGG的生长同样受到强烈抑制.随着乳酸的生成,LGG的生长超过IP的抑制作用,但是当它达到一定浓度时,生长与抑制达到平衡.因此,Hepes加强了IP抗体的作用,而乳酸通过改变PH值,减少IP对LGG生长的抑制作用.
值得注意的是,IP的效价在6小时处达到最高,此时LGG同样受到强烈抑制.因此,在效价与LGG的生长之间存在一些明显的联系或机制。在6小时处,IP+LGG的效价比Hepes+IP+LGG, Hepes+IP的明显低,因此,Hepes在维持PH于中性时起着重要作用,这一点有利于免疫球蛋白达到最高活性,与IP组相比,在6小时处,IP+LGG组的效价明显更低,虽然PH并无明显不同,因此,在某种程度上,乳酸能够抑制免疫球蛋白的活性。(图7)
3.5 LGG的贮藏试验 当LGG的生长达到对数期的平台期时,在4℃保存,其活细胞量,PH,乳酸,效价要不时地检测。(看图8,9)
Hepes是影响LGG生存的主要因素,在无Hepes存在时,在4℃下,IP与控制组可以在50天内维持活细胞量基本不变.然而有Hepes组只能在前31天维持不变.然后急剧下降,
从图8,我们可以看到:无Hepes组的PH值维持不变或持续下降,然而在有Hepes组中,因为细胞的死亡及溶菌作用,PH慢慢上升.
至于效价,在Heper组与无Hepes组中并无明显不同,在50天贮存期内,LGG对免疫球蛋白效价的影响很小.
4.讨论
一般ptobiotics是以它对酸与胆汁的抵制为特征的.它粘到肠道上皮细胞上,并在肠道中复制,乳酸杆菌是人类健康上运用很广的probiotic菌.从人胃肠道上分离出来的LGG被认为是抗酸抗胆汁菌株。它能暂时在人胃肠道上生存,复制,生长出抗菌物质,影响存在的微生物的代谢活性,它同样可以在口服抗生素时,在肠道内复制。
在这个研究中,在MRS中,LGG有相同的发酵时间9小时,相同的PH值及乳酸曲线而不管MRS培养液中活细胞中的接种量。然而,LGG在灭菌牛奶中有一个很长的发酵时间,很少有以LGG作为起始物的报道.在牛奶中LGG生长的关键因素是接种量和对数期的状态.有利于身体健康的LGG和最小口服剂量是1010~1011CFU/天,可以服用冷冻干粉.发酵牛奶或a fermented whey drink .
在发酵的牛奶中,活细胞量通常是10--CFU /ml,因此100-200ml的发酵牛奶可以提供1010~1011CFU.我们试验同样显示了,虽然以单菌株作为起始物,LGG能够达到109CFU/ml.
为了观察IP及CP在MRS中对LGG生长的影响,把不同浓度的IP、CP加入到MRS培养基中,SP则被作为控制物。
所有的SP组在整个发酵过程中都能提高LGG的生长,尤其在5﹪与10﹪的浓度下。很明显,SP起缓冲作用及给细胞的快速复制提供特殊碳氢化合物及氮源。在8-10小时期间,SP的PH曲线比控制组稍高,可能是因为在一过程中蛋白质的剪切作用和某些肽键的暴露,来支持细菌生长及PH缓冲系统。
在0-4小时内,CP给细胞复制一个好的起始速度,这一点暗示CP可能含有LGG生长因子,因此克服了一般细菌生长模型的激活期。当进入对数期(6-8hr)时,CP组中的细胞生长要比控制组中的慢,说明一些非特异性抗体的抑制作用。在8-12小时,细胞通过抗体克服抑制作用,再次达到比控制组高的水平。很可能,
CP中的生长因子是通过抗体来克服抑制作用的。
至于IP组,好像IP中的抗体在发酵期起重要作用。它们在整个发酵期抑制LGG细胞的复制,尤其在发酵初期。1﹪与2.5﹪IP组和5﹪和20﹪IP组中有所不同,暗示了在2.5﹪和5﹪之间,是弱与强抑制作用的临界。IP的浓度越高,抑制越强,LGG的生长越慢:从PH变化曲线看,1﹪与2.5﹪IP组的PH值比起控制组来说下降得非常快,这一点也与CP组不同.
总的来说,SP,CP与IP由于其组分不同,对LGG生长的作用也不同.SP含有适合LGG生长的普通碳氢化合物及氮源,而CP含有能部分抑制细胞生长的非专一性抗体及LGG的生长因子.因此,在两种情况下LGG的生长有很大的提高.然而,IP的情况就完全不同,它里面存在一些对链球菌属突变体的专一性抗体,它能强列抑制LGG的生长,同样含有一些LGG的生长因子,这些原因导致了LGG的生长缓慢。抗体的抑制作用与IP中生长因子的竞争,同样受到IP中的微量胰蛋白酶及胰凝乳蛋白的影响.两种酶都能减少抗体的活性.然而,我们的结果显示抗体的效价在发酵过程中几乎没有变化。(数据并无显示).
用在无菌牛奶中的Hepes缓冲液,是用来检查LGG牛奶发酵中IP的功能。Hepes对LGG的生长有两个不同的功能.在一方面,Hepes能够减少积累的乳酸对LGG生长 的抑制作用.另一方面,它能够在某种程度上通过保持PH于中性,来帮助抗体维持在一个稳定的功能状态.我们的测试,显示HePes能够使发酵快速开始和比控制组更早地达到对数期.但是,当与IP结合时这个结果就会相反; IP 组则受到轻微的抑制.虽然对数期来得更晚,它同样能使活细胞数达到控制组那样多.这个结果与MRS中有IP的发酵结果相一致.
LGG的货架生命力与抗体的效价,是我们测试中的关键。贮存试验显示,在4℃下,所有的牛奶发酵组的活细胞都能在31天内维持在相同的水平.31天后,有Hepes组下降得更快,而无Hepes组则能继续保持在相同水平.看上去在贮存期间,IP对LGG的货架生命力只有微小的影响.PH变化有小的不同,然而无Hepes组的乳酸代谢比hepes组更活跃,这一点与活细胞贮存相一致.有Hepes组与无hepes组中的效价变化并无不同,发酵牛奶在4℃能在10天内使效价保持相同水平,在31天内保留50%,50天内仍大于30%。而且我们的实验显示:在4℃ ,发酵免疫牛奶中的抗龋齿抗体的功能在贮存50天后,仍能保持完整.
使用probiotics细菌进行免疫牛奶发酵是开发人类健康功能食品的新领域.为得到更多有关抗体对probiotics发酵的普通机制的信息,不同的菌株及不同的专一性抗体在将来都要被测试.功能实验也要在抑制期与活跃期中进一步进行.因为有一些probiotics菌的普通抗原能与抗体相作用,以及发酵过程中的凝集作用,我们应该选择一些probiotics菌,来避免此类凝集反应,或用probitics菌的非专一性抗体来组成免疫牛奶.虽然免疫牛奶的发酵是开发功能食品的可行性方法,怎样保持抗体活性及在发酵前怎样在同一时间对免疫牛奶进行了灭菌,仍然是个问题.将来一些特殊的技术过程仍要得到改进.
幽门螺杆菌抗体是怎么回事_张颖医生讲座讲解消化内科疾病快速问...123
Fenice1234562021-07-28
相关疾病:消化性溃疡功能性消化不良溃疡病我想问一下幽门螺旋杆菌的GagA抗体是什么来的?今天跟着主任查房看到的一个指标。
什么是“免疫球蛋白”,有哪些生物学意义123
贡籽2021-07-27
免疫球蛋白一般来说可以理解为抗体,作用如下:1.中和抗原 2.调理作用 3.激活补体.进而产生:①裂解靶细胞②联合调理作用 4.穿过胎盘,参与胎儿被动免疫(特指IgG)。
简述抗体的生物学功能 123
2021-08-11
在人和动物体内,由于抗原或半抗原入侵刺激机体而在细胞中产生的免疫球蛋白.能可逆、非共价、特异地与相应抗原结合,形成抗原-抗体复合体.
主要作用:
(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤.然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用.
(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体.
(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,产生不同的疚,参与免疫应答.
(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫.免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素.
(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能.不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性.
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏.各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用.抗体可被中性盐类沉淀.在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化.
(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应
①调理作用 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization).
②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。
主要作用:
(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤.然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用.
(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体.
(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,产生不同的疚,参与免疫应答.
(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫.免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素.
(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能.不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性.
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏.各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用.抗体可被中性盐类沉淀.在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化.
(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应
①调理作用 IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization).
②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。
【进展】转载:美学者首次“功能性治愈”艾滋病婴儿 “根本性治愈...123
杏林新风2013-03-05
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