| Host | guinea pig |
|---|---|
| Antibody Type | polyclonal |
| Immunogen | synthetic peptides of human periplakin (P1a/b, P2a/b, P3a/b), coupled to KLH |
| Purification | stabilized antiserum |
| Conjugate | unconjugated |
| Formulation | contains 0.09% sodium azide and 0.5% BSA |
| Storage | short term at 2 – 8 °C; long term storage in aliquots at - 20 °C; avoid freeze/ thaw cycles |
| Tested species reactivity | bovine, human |
| Tested applications | Tested dilutions |
|---|---|
| Immunohistochemistry (IHC) - frozen | 1:50 – 1:100 |
| Immunoprecipitation (IP) | assay dependent |
| Western Blot (WB) | 1:1,000 - 1:2,000 |
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各种不同类别的免疫球蛋白分子都含有四条多肽链组成的基本结构单位，即由两条重链（heavy chain, H链）和两条轻链（light chain, L链）通过不同数目的二硫键结成Y形。在抗体分子的N端，不同抗体分子的氨基酸组成和顺序都是不同的，此区为“多变区“（variable region, V区），它是抗体分子与抗原决定簇的结合部位。由于抗体多变区这一结构特点，决定了它对抗原分子“识别功能”的多样性；不同抗体分子的C端结构基本恒定，称为“稳定区”（constant region, C区）。当抗原与抗体结合时，抗体分子发生变构效应和集聚作用，使稳定区的某些部位暴露出来，并立即发生一系列免疫生理效应，如固定补体，促进对抗原分子的吞噬、溶解和清除作用。
二、保持乐观情绪乐观的态度可以维持人体于一个最佳的状态，尤其是在现今社会，人们面临的压力很大，巨大的心理压力会导致对人体免疫系统有抑制作用的荷尔蒙成分增多，所以容易受到感冒或其它疾病的侵袭。
三、限制饮酒每天饮低度白酒不要超过100毫升，黄酒不要超过250毫升，啤酒不要超过1瓶，因为酒精对人体的每一部分都会产生消极影响。即使喝葡萄酒可以降低胆固醇，也应该限制每天一杯，过量饮用会给血液与心脏等器官造成很大破坏。
四、参加运动专家进行的3项研究指出，每天运动30到45分钟，每周5天，持续12周后，免疫细胞数目会增加，抵抗力也相对增加。运动只要心跳加速即可，晚餐后散步就很适合。
五、补充维生素每天适当补充维生素和矿物质。专家指出，身体抵抗外来侵害的武器，包括干扰素及各类免疫细胞的数量与活力都和维生素与矿物质有关。
六、改善体内生态环境用微生态制剂提高免疫力的研究和使用由来已久。研究表明，以肠道双歧杆菌、乳酸杆菌为代表的有益菌群具有广谱的免疫原性，能刺激负责人体免疫的淋巴细胞分裂繁殖，同时还能调动非特异性免疫系统，去“吃”掉包括病毒、细菌、衣原体等在内的各种可致病的外来微生物，产生多种抗体，提高人体免疫能力。对于健康人来说，不妨“食疗”，多吃些乳酸菌饮料；而健康边缘人群，可以用微生态制剂来调节体内微生态平衡。能提高免疫力的食品
1.灵芝：灵芝可增强人体的免疫力，这是因为灵芝含有抗癌效能的多糖体，此外，还含有丰富的锗元素。锗能加速身体的新陈代谢，延缓细胞的衰老，能通过诱导人体产生干扰素而发挥其抗癌作用；
2.新鲜萝卜：因其含有丰富的干扰素诱导剂而具有免疫作用；
3.人参蜂王浆：能提高机体免疫力及内分泌的调节能力，并含具有防癌作用的蜂乳酸；
4.蘑菇、猴头菇、草菇、黑木耳、银耳、车养、百合等：都有明显增强免疫力的作用；
5.香菇：香菇所含的香菇多糖能增强人体免疫力。展开
（一）特异性结合抗原
Ig最显著的生物学特点是能够特异性地与相应的抗原结合，如细菌、病毒、寄生虫、某些药物或侵入机体的其他异物。Ig的这种特异性结合抗原特性是由其V区（尤其是V区中的高变区）的空间构成所决定的。Ig的抗原结合点由L链和H链超变区组成，与相应抗原上的表位互补，借助静电力、氢键以及范德华力等次级键相结合，这种结合是可逆的，并受到pH、温度和电解浓度的影响。在某些情况下，由于不同抗原分子上有相同的抗原决定簇，或有相似的抗原决定簇，一种抗体可与两种以上的抗原发生反应，此称为交叉反应（cross reaction）。
抗体分子可有单体、双体和五聚体，因此结合抗原决定簇的数目（结合价）也不相同。Fab段为单价，不能产生凝集反应和沉淀反应。F（ab'）2和单体Ig（如IgG、IgD、IgE）为双价。双体分泌型IgA有4价。五聚体IgM理论上应为10价，但实际上由于立体构型的空间位阻，一般只有5个结合点可结合抗原。 B细胞表面Ig(SmIg)是特异性识别抗原的受体，成熟B细胞主要表达SmIgM和SmIgD，同一B细胞克隆表达不同类SmIg其识别抗原的特异性是相同的。
（二）活化补体
1．IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径活化补体。当抗体与相应抗原结合后，IgG的CH2和IgM的CH3暴露出结合C lq的补体结合点，开始活化补体。由于Clq6个亚单位中一般需要2个C端的球与补体结合点结合后才能依次活化Clr和Cls，因此IgG活化补体需要一定的浓度，以保证两个相邻的IgG单体同时与1个Clq分子的两个亚单位结合。当Clq一个C端球部结合IgG时亲和力则很低，Kd为10-4M，当Clq两个或两个以上球部结合两个或多个IgG分时，亲合力增高Kd为10-8M。IgG与Clq结合点位于CH2功能区中最后一个β折叠股318～322位氨基酸残基（Glu-x-Lys-x-Lys）。IgM倍以上。人类天然的抗A和抗B血型抗体为IgM，血型不符合引韦的输血反应发生快而且严重。
2．凝聚的IgA、IgG4和IgE等可通过替代途径活化补体。
（三）结合Fc受体
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体，分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后，由于构型的改变，其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。IgE抗体由于其Fc段结构特点，可在游离情况下与有相应受体的细胞（如嗜碱性粒细胞、肥大细胞）结合，称为亲细胞抗体（cytophilic antibody）。抗体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用。1．介导I型变态反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒，释放组胺，合成由细胞FcεRI结合。当相同的变应原再次进入机体时，可与已固定在细胞膜上的IgE结合，刺激细胞脱颗粒，释放组受，合成由细胞脂质来源的介质如白三烯、前列腺素、血小板活化因子等，引起Ⅰ型变态反应。
2．调理吞噬作用 调理作用（opsonization）是指抗体、补体C3b、C4b等调理素(opsonin)促进吞噬细菌等颗粒性抗原。由于补体对热不稳定，因此又称为热不稳定调理素（heat-labile opsonin）。抗体又称热稳定调理素（heat-stable opsonin）。补体与抗体同时发挥调理吞噬作用，称为联合调理作用。中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞具有高亲和力或低亲和力的FcγRI（CD64）和FcγRⅡ（CD32），IgG尤其是人IgG1和IgG3亚类对于调理吞噬起主要作用。嗜酸性粒细胞具有亲和力FcγRⅡ，IgE与相应抗原结合后可促进嗜酸性粒细胞的吞噬作用。抗体的调理机制一般认为是：①抗体在抗原颗粒和吞噬细胞之间“搭桥”，从而加强了吞噬细胞的吞噬作用；②抗体与相应颗粒性抗原结合后，改变抗原表面电荷，降低吞噬细胞与抗原之间的静电斥力；③抗体可中和某些细菌表面的抗吞噬物质如肺炎双球菌的荚膜，使吞噬细胞易于吞噬；④吞噬细胞FcR结合抗原抗体复合物，吞噬细胞可被活化。 抗体的调理吞噬作用。
3．发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 当IgG抗体与带有相应抗原的靶细胞结合后，可与有FcγR的中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞等效应细胞结合，发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作（antibodydependent cellmediated cytotoxicity,ADCC）。目前已知。NK细胞发挥ADCC效应主要是通过其膜表面低亲和力FcγRⅢ（CD16）所介导的，IgG不仅起到连接靶细胞和效应细胞的作用，同时还刺激NK细胞合成和分泌肿瘤坏死因子和γ干扰素等细胞因子，并释放颗粒，溶解靶细胞。嗜酸性粒细胞发挥ADCC作用是通过其FcεRⅡ和FcαR介导的，嗜酸性粒细胞可脱颗粒释放碱性蛋白等，在杀伤寄生虫如蠕虫中发挥重要作用。 抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）。
此外，人IgGFc段能非特异地与葡萄菌A蛋白（staphylococcus proteinA,SPA)结合，应用SPA可纯化IgG等抗体，或代替第二抗体用。展开
（London-Science.com原创，转载需注明来源，原文地址：http://www.london-science.com/archives/1053）
请想象一下，上百只兔子，老鼠甚至是山羊等动物拥挤在狭小的笼子和窝棚中，吃着劣质的饲料，忍受着病痛的折磨，还要定期被注射针剂，抽取血清。履行完“使命”的动物们甚至要接受安乐死。这是一幅多么可怕的景象！而我们经常使用到的抗体，有很大一部分就是这样被制造出来的。
7月21日，数位科学家在Cell的子刊TrendsInBiotechnology发表文章，揭示了传统抗体生产方式给动物福利带来的严重危害，并呼吁各界使用噬菌体病毒技术来替代动物生产抗体，以保护动物福利。文章指出，尽管这种技术与传统的动物生产模式相比有众多的优点，但还是被人所忽视。人道主义行为，并不一定以牺牲生产力作为代价。改变人们的观念，与改进技术同等重要。
残酷的现实
抗体是一种最常用的生物试剂-不仅仅在基础科研领域，它们也被广泛应用在疾病诊断，临床治疗等各个方面。生物医学领域对抗体的种类和数量有很大的需求。举例来说，仅人类基因组就有20000-25000个编码蛋白质的基因，而mRNA剪切，翻译后修饰等生物过程又会产生许多蛋白质的变体，将蛋白质种类扩大10倍以上。如果要检测这些蛋白质，就必须用到相对应的抗体—强烈的需求创造出了这个发达的市场—全球共有超过200万种科研抗体产品，仅在欧美就有300余家科研抗体供应商（详见：2016年全球科研抗体行业报告）。据估计，整个抗体相关市场规模高达800亿美元以上【1】。
而传统的抗体生产方法极大地依赖于动物。用于抗体生产的动物们会接受免疫—被注射抗原和佐剂，激发体内抗体的产生—然后从腹水中分离目标抗体（多克隆抗体），或从肾脏中提取淋巴B细胞，与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，进而从中提取出目标抗体（单克隆抗体）。
在全球，有上百万只动物被用于抗体的生产和研发。据统计，英国在2013年共有9522只动物被用于抗体生产。而在荷兰，这个数字高达25697只【1】。尽管随着文明的进步，动物福利被越来越多的公司所重视，可还有一些利欲熏心的抗体供应商违背法律和道德，从动物身上榨取利润。在今年五月，抗体行业的巨头SantaCruzBiotechnology就被指控虐待动物，遭到了美国政府350万美元的天价罚款，并将被禁售多克隆抗体（详见：2016第一个或将倒下的抗体巨头）。为什么说SantaCruzBiotechnology是抗体巨头呢？因为仅这一家公司所使用的动物数量，在2013年就达到了15648只，超过了全英国总和的1.5倍！
在今天，依旧有许多宣称“动物友好（animal-friendly）”的传统抗体生产方式，但实际上一点都不“友好”！
技术的突破
为什么一定要利用动物来制造抗体呢？难道是技术的局限性吗？
在过去20年间，真正意义上”动物友好“的抗体生产方法在迅速发展，并且早已在技术上十分成熟，足以替代传统的抗体生产方式—利用动物免疫。已经有多种动物友好性亲和试剂（animalfriendlyaffinityreagenats,AFA)被成功开发出来，甚至投入商业化生产。这些试剂的生产完全独立于任何活体的免疫系统，并且能够替代现有的动物免疫技术手段，在广泛的范围内得到应用。AFA是由噬菌体展示，核糖体展示或者酵母菌展示在体外生产出来并进行筛选的。这些产物主要是抗体，但同时也涉及一些非抗体的亲和试剂，如DARPins，affibodies，monobodies，anticalins或其它产物。这篇文章主要强调了一种最成熟，适用性最高的方式—噬菌体展示。
文章指出，使用噬菌体展示制造的抗体，并不仅仅是”看起来像抗体“或者”与抗体有相似的作用“，它们实际就是”原装“的抗体—它们拥有与活体生产出来的抗体完全相同的生物活性—在开发上，功能上，以及结构上，它们无法与活体生产的抗体区分开来。并且，它们的特异性比活体制造的抗体还要优秀，能够有效避免抗体的多态性，继而减少抗体引发的可重复性问题。同时，它们的生产成本更低，产能更大。理论上来说，只需要构建一个良好的噬菌体展示Library，并进行合理的筛选措施，即可利用这种技术生产出与活体生产等效的抗体。即使生产出来的抗体质量不符合预期，也可以利用各种体外手段来改进抗体的特异性，亲和力以及其他特征。目前，一些大规模的比较性研究，如StructuralGenomicsConsortiumSH2Pilot、EUprogrammeAffinityProteome、NIHCommonFundProteinCaptureInitiatives，都证实了利用噬菌体展示生产的抗体，在不利用杂交瘤细胞（单克隆抗体制造技术）的情况下，能制造出完全等效的单克隆抗体。市场上以及有一些比较成熟的非动物来源的抗体了：如ABD和Yumab。
政策与法规
人道主义和动物保护，在西方国家中一直占有重要的地位。文章中例举了欧盟的科研用途的动物保护政策：3Rs原则—替代，减少，精炼（replacement,reduction,refinement)。从名称上，我们不难看出这项法规的目的就是为了利用政策的调控，促进动物替代品在科研中的应用，从而减少实验动物的使用。例如，法案规定”如果可能，一项技术上满足标准的方法或实验手段（不涉及动物使用），应该作为动物实验的替代方法。“另外，法案还规定“如果有其它可以得到理想结果的方法被欧盟法规认可（不涉及动物使用），那么某项涉及动物的实验步骤就不能被执行。”这些规定意味着，在每个欧盟成员国，包括抗体生产在内的各项动物实验都要经过政府部门的审核与评估，以确保”动物使用是唯一的合理选择“。
在欧洲，这就为替代动物生产抗体提供了法律上的支撑。虽然噬菌体展示方法可以作为动物的完美替代品，但由于人们对一些概念上的误解，导致审批部门认为动物生产抗体的方式是”无法替代的“。因此，许多抗体制造的项目依旧可以通过审批，这项替代技术也没有得到足够的重视。
光明的未来
文章的第一作者，来自诺丁汉大学的访问学者AlisonGray博士表示：“科学家们在这个领域的终极目标，因该是在研究和生产上完全替换动物。然而，由于人们对这些替代技术缺乏足够的意识，改变来的不会那么快。利用噬菌体展示来制造多抗和单抗的技术，早在二十年之前就存在了。这是一项高性价比的技术，足以替代当前如此巨大的实验动物用量。事实上，这项技术已经足够成熟，足以淘汰现有的动物免疫手段。”【2】
因此，基于欧盟的3Rs原则，AlisonGray博士带领众多科学家提出了7项行动计划，用来替代动物制造抗体—由欧盟领导，延伸到科研机构和生物技术产业：
1.完全替换利用动物免疫的方式来制造抗体，包括抗体相关产品的进口，除非能够被证明在某些情况下AFA无法作为替代品。
2.应当建立一个专家工作小组，专门策划使用AFA来替代动物抗体的行动路线。
3.设立项目，以促进这项新型技术的转化和扩散。这应该包括设立技术中心，为抗体生产者提供AFA技术培训，确保提供足够的技术支持。
4.应该对非欧盟地区的动物来源抗体生产进行评估，以保证这些抗体的生产是符合欧盟标准的，尤其是在一些动物保护法规较弱的地区。
5.欧盟参考实验室（EURL）应该与它的国际合作伙伴一起扩大活动领域，将AFA的生产和应用包含在内。
6.服从3Rs原则的欧盟国家和机构，以及按照欧盟法规进行化妆品，药品以及食品的商业机构，应该全力支持3Rs原则，停止动物来源的抗体相关产品的进口。
7.由欧盟委员会出具的实验动物统计数据报告，应当把”用于抗体生产的动物“单独归为一个类别。
总结
作为替代医学实验动物基金（FRAME）的主席，AndrewBennett博士对这篇文章做出了很好的总结：”Gray博士的这篇文章指出了一个在抗体制造领域十分反常的现状：一方面，抗体可以不依赖于动物来制造，并且这项技术十分成熟；但是另一方面，每年却有成千上万的动物在抗体制造的过程中被杀害。利用动物来制造抗体，是完全没有必要的。更重要的是，利用动物生产出来的抗体，会引发严重的质量问题—有很大一部分抗体效果很差，甚至是无效（详见这里）。相比传统的抗体生产方式，噬菌体展示技术有潜力制造出特异性更强，功能性更好的抗体。“【2】
参考文献
【1】GrayAC,SidhuSS,ChandrasekeraPC,etal.AnimalFriendlyAffinityReagents:ReplacingtheNeedlessintheHaystack[J].TrendsinBiotechnology,2016.
【2】http://phys.org/news/2016-07-scientists-animals-antibody-production.html
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